NAT-ni柱纯化蛋白使用pH范围一般是多少？

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2015-11-23 01:17 标签： ni柱再生
NI-NTA蛋白提纯的原理是什么？_百度知道
NI-NTA蛋白提纯的原理是什么？
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蛋白过镍柱纯化的原理：Ni柱中的氯化镍或者硫酸镍可以与有HIs(组蛋白)标签的碱性蛋白蛋白结合，组蛋白标签一般是6个组氨酸(碱性氨基酸)。在蛋白上样后，带有组氨酸标签的蛋白特异性结合到柱子里，其他的杂蛋白流出。Ni柱中的氯化镍或者硫酸镍可以也可以与咪唑结合这时候再用咪唑洗脱，梯度洗脱，咪唑竞争性结合到硫酸镍上，目的蛋白就被洗脱了，这时候收集浸出液，那么里面就是你要的目的蛋白，然后透析掉咪唑就行了。现在的柱子大多是预装柱，也就是不用自己填柱，就是装好镍的傻瓜柱，也不贵，上样，洗脱，基本两个步骤就结束了。剩下的看你怎么处理了。
高亲和Ni-NTA纯化介质(L00250)是把螯合剂(氮川三乙酸或NTA)共价偶联到琼脂糖介质(4%交联)上，然后再螯合Ni2+制备而成。NTA能够通过四个位点牢固的螯合Ni...
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Ni柱纯化蛋白问题
大家好，我有一个蛋白利用酵母表达分泌到发酵液中，收集发酵液上清的时候pH值为6.0左右，我要利用Ni柱纯化目标蛋白，缓冲液选择的是pH为7.4的磷酸钠。我想问的是，我需要调节发酵液的上清至中性或者7.4么？如果不调节pH值，也就是直接拿发酵液离心过滤后上柱，会影响蛋白的挂柱么？希望各位高手指教！谢谢。
不会，Ni柱对pH耐受远远强于你的蛋白对pH耐受程度。所以只要你的蛋白没问题，完全可以离心之后取上清去上柱子。
影响蛋白挂柱的不是你的pH，而是柱子的柱效还有就是你蛋白的标签。 不会，主要看你的柱子以及蛋白的特性，标签若是被包裹住的话就很难挂在柱子上的 是要调节PH的，HIS标签蛋白的洗脱条件是咪唑浓度提高和PH降低，pH值为6.0会影响结合。
可以下载上海生工的BSP033-2的说明书看看 楼主，你好，我也在做酵母表达体系，我的蛋白也是分泌在培养基中，现在用Ni柱提纯蛋白，发现蛋白不挂柱。我收集上清后，用PBS透析，之后再过柱子的。做了好几次了，都是不挂柱。 : Originally posted by dshlove at
不会，Ni柱对pH耐受远远强于你的蛋白对pH耐受程度。所以只要你的蛋白没问题，完全可以离心之后取上清去上柱子。
影响蛋白挂柱的不是你的pH，而是柱子的柱效还有就是你蛋白的标签。 你好，我想请问一下，发酵液纯化只要离心就可以吗 : Originally posted by menghuiying at
你好，我想请问一下，发酵液纯化只要离心就可以吗... 可以的，但是如果体积很大的话建议浓缩然后用硫酸铵沉淀，富集后再重溶过柱子。 : Originally posted by dshlove at
可以的，但是如果体积很大的话建议浓缩然后用硫酸铵沉淀，富集后再重溶过柱子。... 你好，我之前用了TCA沉淀，然后跑SDS-PAGE，没什么效果，TCA不好清除干净。还有一个问题，用镍拄纯化时和普通纯化一样吗，看了手册里面用到的溶液都不一样啊 : Originally posted by menghuiying at
你好，我之前用了TCA沉淀，然后跑SDS-PAGE，没什么效果，TCA不好清除干净。还有一个问题，用镍拄纯化时和普通纯化一样吗，看了手册里面用到的溶液都不一样啊... 你所指的普通纯化是什么？离子交换？如果柱子不同，所用的缓冲液肯定是有差别的。 : Originally posted by dshlove at
你所指的普通纯化是什么？离子交换？如果柱子不同，所用的缓冲液肯定是有差别的。... 身边的同学都是做大肠表达的，用到的洗脱液是不同梯度的咪唑缓冲液，我看了我所用的手册里推荐用probond试剂盒，我们没有买，只买了需要自己上柱的那种镍拄，然后我自己配的试剂盒里的试剂，纯化了一次，没有挂柱 : Originally posted by dshlove at
你所指的普通纯化是什么？离子交换？如果柱子不同，所用的缓冲液肯定是有差别的。... 能不能给个联系方式，私底下想要详细请教，谢谢，我的qq，麻烦了 : Originally posted by menghuiying at
能不能给个联系方式，私底下想要详细请教，谢谢，我的qq，麻烦了... 我Q：，只有晚上回家才会用
邮箱：:hand: : Originally posted by menghuiying at
能不能给个联系方式，私底下想要详细请教，谢谢，我的qq，麻烦了... 我想问下你的纯化问题解决了吗？您所在位置： &
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（生物化学与分子生物学专业优秀论文）SpiCSsaM蛋白复合物和IpaBMad2B蛋白复合物的表达、纯化与结晶.pdf63页
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中国协和医科大学硕士学位论文 导师：柴继杰研究员 作者：张弛 摘 要
筮二部筮 编码于沙门氏茵 砌砌伽P砌 毒力岛2的SpiC蛋白在沙门氏菌得以存活于宿主
吞噬性细胞内起到必要性的作用。沙门氏菌侵入宿主细胞后并不滞留于胞质中，而是
形成一个沙门氏菌内含小泡 SCV ，并通过三型分泌系统分泌大量的效应蛋白改变
宿主生物学行为。沙门氏菌在吞噬性细胞内得以存活并复制是靠其自身的避免SCV
与溶酶体融合这一机制，而SpiC在这一机制中的功用是不可或缺的。虽然使用基因
序列比对和蛋白质一级序列比对无法得到任何有关Spic功能作用的信息，但是SpiC
与同位于一个操纵子下的SsaM之间的显著并且特异的结合，暗示了一个围绕着SpiC
和SsaM的蛋白质复合物作用于转运元的形成进而控制其它效应蛋白的分泌顺序。为
在E∞疗表达体系中单独表达Ss捌并不可以得到可溶性的蛋白，所以采取了将携带
有His标签的SpiC和不携带任何标签的SsaM共同转化入感受态细胞并协同表达的
手段。Ss蝴因为与SpiC的结合变得可溶，蛋白质复合物利用亲和层析技术得以纯化。
时稳定很多。之后便利用离子交换层析和凝胶过滤层析手段大量纯化了胰蛋白酶限制
性酶切后的SpiC、Ss蝴复合物，并进行了结晶实验。
关键词：SpiC，SsaM，沙门氏菌毒力岛2，复合物 第5页共65页 知识水坝@damdoc D1pl咖’Ihe文s M朗tor：IⅪCh锄Jllle Auth0虻Zh觚ZChi
箍三部盆 福氏志贺氏菌 舶袒砌．肥溯e一 通过三型分泌系统分泌自身编码的效应蛋白
IpaB，该蛋白在福氏志贺氏菌入侵宿主细胞、宿主细胞内定殖以及对抗宿主细胞固有
免疫机制方面都起到关键作用。IpaB被分泌到胞质中后，特异性的与宿主胞内Mad2B Anaphase．prom甜
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