（广东省惠州市惠东县人民医院检验科& 广东& 惠州& 516300）
　　【摘要】 目的：建立自配总蛋白试剂测定血清总蛋白含量在开放检测系统中的性能验证和实验方法。方法：参考美国临床和实验室标准化协会系列文件和相关文献[1]，结合实际工作，设计实验方案[2]。对在Roche公司的 Modular P的开放检测系统中测定血清总蛋白的精密度、准确度、线性范围、回收试验等进行性能验证[3]。结果：自配总蛋白试剂在检测低、高浓度质控血清的变异系数均符合原配试剂的相关标准；准确度试验结果在允许范围内；线性范围试验中实测值与理论值呈高度相关；回收率在90%～110%范围内。结论：在Roche公司的 Modular P中利用开放检测系统使用自配总蛋白试剂测定血清总蛋白含量达到质量要求的标准，对降低检测成本有重要意义。
　　【关键词】 自配总蛋白试剂；开放检测系统；性能验证
　　【中图分类号】R446&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 【文献标识码】A&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 【文章编号】（7-02
　　Roche公司的 Modular P生化分析仪操作简便、检测快速、试剂稳定性好、重复性佳，无污染等优点，是实验室重中之重的仪器之一。而Roche公司的 Modular P除了封闭系统必须使用配套的原装试剂以外，其还设置了少量开放系统可以使用其他厂家的试剂。这对与一般实验室来说无疑也是一大优点，因为这就意味着可以降低检测成本。可是其他的试剂能否符合质量的要求还有待实验来验证。
　　国际标准化组织于2003年颁布的《医学实验室质量和能力的专用要求》作为医学实验室认可的标准，该标准要求申请的实验室应对检测系统的主要分析性能进行验证，证实其能够达到所要求的性能标准。因此我们结合工作的实际，对自配总蛋白试剂测定血清总蛋白含量在Roche公司的 Modular P生化分析仪的开放检测系统中进行精密度、准确度、线性范围、回收试验等性能验证。
　　1.材料与方法
　　1.1 材料
　　1.1.1仪器& Roche公司的 Modular P生化分析仪。
　　1.1.2检测试剂、校准品及质控品& 依照Roche 原装配套试剂的试剂说明书中所含的试剂成份，再按照全国临床检验操作规程（第三版）中双缩脲试剂的配制方法[4]，在实验室里自配总蛋白试剂R1和R2。校准品及质控品均为Roche 配套产品。
　　1.1.3标本来源& 符合要求的本院门诊及住院送检标本。
　　1.2 方法
　　1.2.1精密度试验& 严格按照标准操作规程对Roche公司的 Modular P生化分析仪进行日常维护保养、校准及质量控制，选择低值和高值两个浓度的质控品，按照标本检测程序进行测定。选择低、中、高三水平新鲜、无溶血、无黄疸、无脂浊的血清标本，用原装试剂和自配试剂分别连续重复测定每个水平血清5次，计算每个水平平均值（X）、标准差（s）、变异系数（CV%）。临床可接受水平：CV%&1/2美国CILA'88允许总误差（Tea）。
　　1.2.2准确度试验（日常评估）& 具有量值溯源的检测系统赋值校准检测系统，选择广东省临检中心、卫生部临检中心或其他厂家提供高、中、低3个水平室内质控品进行检测，每个水平测定5次，计算平均值作为&靶值&，监测、评估准确度。通过与具有量值溯源的检测系统比对新鲜血清，计算相对偏倚（SE%）。临床可接受水平：SE%&1/4美国CILA'88允许总误差（Tea）。
　　1.2.3线性范围& 选择一个高值的样本，按比例配制成9个系列浓度样本，每个样本重复检测3次，每个系列检测结果如均未超过5%，检测结果可用于线性评价，计算线性方程（P&0.05）。结合分析灵敏度，确认线性范围。
　　1.2.4回收试验& 稀释回收率=（实测值/理论值）&100%。选择高浓度样本3份，用0.9% NaCl分别作系列稀释，线性范围高值/低值越大，系列稀释倍数越大。回收率在90%～110%结果为可接受。结合分析灵敏度、最大稀释度确定临床可报告范围。
　　2.结果
　　2.1 精密度试验结果
　　精密度试验结果显示，原装试剂检测血清总蛋白浓度变异系数在0.18%～0.70%，自配试剂在0.42%～0.73%。两者实测CV均小于10%。在厂家说明书给定的允许范围之内（见表1）。
　　2.2 准确度试验结果
　　准确度试验结果显示，用原装试剂检测结果与靶值的偏倚为-0.30%～0.36%，在规定的偏倚&20%之间；同时用自配试剂检测结果表明，偏倚为-1.74%～0.45%（见表2），也在允许范围之内。
　　2.3线性范围试验结果
　　以原装试剂测得的血清总蛋白为理论值（x），自配试剂测得的为实测值（Y），将所有结果作X-Y散点图，计算回归方程：Y=a+bx。若相关系数R2&0.975，b在0.97～1.03范围内，a接近于0。则结果可接受。根据试验结果可得到回归方程Y=0.2x，R2=0.999，P&0.001。实测值与理论值呈良好的线性关系（见图1）。
　　2.4 回收试验结果
　　同理以原装试剂测得的血清总蛋白为理论值，自配试剂测得的为实测值，根据公式：回收率=（实测值/理论值）&100%。得到的回收率在97.59%～100.56%之间（见表3），也在允许范围之内。
　　3.讨论
　　本实验的结果显示用自配总蛋白试剂在开放检测系统中检测血清总蛋白变异系数（CV）为0.42%～0.73%。小于厂家CV &10%的要求，而且原装试剂与自配试剂检测结果无显著性差异（P&0.05），由此说明自配试剂的重复性良好。按照ISO 15189文件对准确度的评价要求，可以通过参加室间质评活动进行考核。我科用自配试剂参加卫生部临检中心的室间质量评价活动，均取得良好的成绩。在准确度的结果中表明，自配试剂检测结果与靶值的偏倚为-1.74%～0.45%，也在允许范围之内。由此说明自配试剂的准确度符合要求。线性范围试验结果得到回归方程Y=0.2x，R2和b值均在允许的范围之内，实测值与理论值呈高度相关，自配试剂测得的结果在坐标图上呈良好的线性趋势。回收试验结果表明，自配试剂的回收率为在90%～110%的范围内，符合要求。
　　对自配试剂的各项指标评价表明[5]：自配试剂检测血清总蛋白的重复性，准确度，线性范围和回收率均符合相关的实验要求，说明自配试剂的性能稳定，质量可靠，可以在Roche公司的 Modular P生化分析仪上使用。而且原料的成本远低于厂家配套试剂，因此使用自配试剂可以降低检测成本，提高经济效益。
　　在工作中我们发现敞开盖子的试剂瓶在仪器上的使用时间不长，根据全国临床检验操作规程（第三版）中双缩脲试剂的配制方法和原厂家说明书中试剂的保存要求：配好的试剂应置与塑料瓶中，密封加塞，放入4～8℃冰箱中保存。开瓶前可保存4～6个月，上机保存为10天。这是因为敞开的试剂瓶会吸收空气中的CO2，以及温度的变化和试剂水分的蒸发都会影响到试剂的稳定性。因此试剂盒还需要使用一种带有色的试剂罩，从而减少试剂对于CO2的吸收。
　　【参考文献】
　　[1] 魏昊，丛玉隆.医学实验室质量管理与认可指南.中国计量出版社，.
　　[2] 毕波，吕元.定量检测方法学性能验证的系统设计.中华检验医学杂志，3-145.
　　[3] 张葵.定量检测系统方法学性能验证实验的基本方法[J].临床检验杂志，）：321-323.
　　[4] 中华人民共和国卫生部医政司编.全国临床检验操作规程（第三版），南京：东南大学出版社，.
　　[5] 张丹，王玲，董振南等.Cobas6000 自动生化分析仪临床检验性能评价[J].分析仪器，2009，（1）：128-129.
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　　实验二十二
血清(浆)脂类及脂蛋白测定 　　血清(浆)脂类成分包括甘油三酯、胆固醇、磷脂、糖脂、游离脂肪酸等；血浆脂蛋白根据密度不同分为高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、极低密度脂蛋白(VLDL)、乳糜微粒(CM)等。在临床上对这些成分的检测由来已久，就方法学而言有化学法、酶法、免疫化学比浊法、电泳法、超迷离心法等等。本章根据教学和临床实际需要，介绍一般常用的基础方法，并就方法学的优缺点、发展趋势进行评价。 　　一、血清甘油三酯测定(磷酸甘油氧化酶法) 　　(一)原理
血清中甘油三酯经脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase，LPL)作用，可以水解为甘油和游离脂肪酸(freefatty acid，FFA)，甘油在ATP和甘油激酶(glycerokinase，GK)的作用下，生成3-磷酸甘油，再经磷酸甘油氧化酶(glycerophospate oxidase，GPO)作用氧化生成磷酸二羟丙酮和过氧化氢(H2O2)，H2O2与4-氨基安替比林(4-AAP)及4-氯酚在过氧化物酶(peroxidase，POD)作用下，生成红色醌类化合物，其显色程度与TG的浓度成正比。 　　(二)试剂 　　1.甘油三酯液体稳定酶试剂组成 　　GOODs缓冲液(pH7.2)
50mmoo/L 　　脂蛋白脂酶
≥4000U/L 　　甘油激酶
≥40U/L 　　磷酸甘油氧化酶
≥500U/L 　　过氧化物酶
≥2000U/L 　　ATP
2.0mmol/L 　　硫酸镁
15mmol/L 　　4-AAP
0.4mmoFL 　　4-氯酚
4.0mmol/L 　　2.2.26 mmol/L( 200m 9/d1)三油酸甘油酯标准液
准确称取三油酸甘油酯200mg，加Triton X-100 5ml，用蒸馏水定容于100ml，分装后，4'C保存，切勿冰冻保存。 　　(三)操作
取3支试管按表1-2操作。 　　表10-2
GPO法测定TG操作表 　
　　混匀后37~C水浴5min，用分光光度计比色，以空白管调零，于500nm波长处测各管的吸光度。 　　(四)计算
　　(五)参考值 　　血清正常范围：
0.56~1.70mmol/L；临界阈值：2.30mmol/L：危险阈值：4.50mmol/L。 　　(六)临床意义 　　1.血清TG增高常见于动脉粥样硬化、家族性脂类代谢紊乱、肾病综合征、糖尿病、甲状腺功能减退、急性胰腺炎、糖原积累病、胆道梗塞和原发性甘油三酯增高症等。 　　2.血清TG降低比较少见，慢性阻塞性肺疾患、脑梗死、甲状腺功能亢进、营养不良和消化吸收不良综合征等可引起血清TG的降低。 　　(七)注意事项 　　1.本法影响因素很多，参考值各家报告不一：故无论用蛋白或酪氨酸表示结果，均须说明采用的方法及参考值。 　　2.本方法没有进行抽提和吸附，所以血清中游离的甘油对TG测定结果有一定的影响。 　　3.方法中所用酶试剂在4'C避光保存，至少可稳定3天至1周，出现红色时不可再用，试剂空白的吸光度应≤0.05。 　　4.要求空腹12h后再进行采血，并要求72h内不饮酒，否则会使检测结果偏高，标本4~C存放不宜超过3天，避免TG水解释放出甘油。 　　5.本实验方法的线性上限为11.4mmol/L，若所测TG值超过了11.0mmol/L，则可用生理盐水稀释后再测。 　　(八)评价
本实验介绍的是一步终点法，其主要缺点是所测TG值包括了血清中游离的甘油(FG)。为了除去FG的干扰，常用的方法有两种： 　　1.外空白法
即同时使用不含LPL的酶试剂测定FG作空白值，此法需作双份测定，使成本加倍，但是可同时得到血清中FG数据： 　　2.内空白法
又称为两步法或双试剂法，将酶试剂分作两部分，其中LPL和4-AAP组成试剂II，其余部分为试剂I，血清先加试剂I，37*(2孵育后，因无LPL存在，TG不被水解，FG在GK和GPO的作用下反应生成H202，但因不含4-AAP，不能完成显色反应，故可除去FG的干扰：再加入试剂11，即可测出TG水解生成的甘油。内空白法虽然增加了操作步骤，但不增加试剂成本，且排除FG干扰效果好，预孵育5min即可排除4mmol/L FG的干扰。本法线性范围在11.4mmol/L以内，精密度为：批内CVS3%、批间CVs<5%。加入不同浓度TG，平均回收率98.6%，加入甘油的平均回收率103.6%。与乙酰丙酮法比较：y=0.996x-4.2，r=0.9996；与BoehringerMannheim试剂法比较：y=1.02x-4.3，r=0.990。 　　因为LPL除水解TG外，亦能水解甘油一酯和甘油二酯(血清中这二者的浓度约占TG的3%)，所以本法测定结果包含了后二者的值。 　　二、血清胆固醇的测定 　　胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇 　　(一)原理
血清中总咀固醇(total cholesterol，TC)包括游离胆固醇(freecholesterol，FC)和胆固醇酯(cholesterolester,CE)两部分。血清中胆固醇酯可被胆固醇酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪酸(FFA)，胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化作用下生成Aa.胆甾烯酮和过氧化氢（H2O2)在4-氨基安替比林和酚存在时，经过氧化物酶催化，反应生成苯醌亚胺非那腙的红色醌类化合物，其颜色深浅与标本中TC含量成正比。 　　(二)试剂 　　1.胆固醇液体酶试剂组成 　　GOOD'S缓冲液(pH6.7)
50mmol/L 　　胆固醇酯酶
≥200U/L 　　胆固醇氧化酶
≥100U/L 　　过氧化物酶
≥3000U/L 　　4-AAP
0.3mmol/L 　　苯酚
5mmol/L 　　2.5.17 mmol/L(200mg/dl)胆固醇标准溶液
精确称取胆固醇200mg，用异丙醇配成100ml溶液，分装后， 4℃ 保存，临用取出。也可用定值的参考血清作标准。 　　(三)操作
终点法检测TC按表10-3依次加样。 　　表10-3
酶法测定TC操作步骤 　　
标准液或定值血清
　　混匀后， 37℃ 保温5min，用分光光度计比以，于500nm波长处以空白管调零，读出各管吸光度。 　　(四)计算 　　血清TG(mmol/L)=
胆固醇标准液浓度 　　(五)参考值
血清正常上限值：<5.20mmol/L；危险阈值：5.20~6.20mmol/L；高胆固醇血症：≥6.20mmol/L。 　　(六)临床意义 　　l. TC增高
常见于动脉粥样硬化、原发性高脂血症(如家族性高胆固醇血症、家族性ApoB缺陷症、多源性高胆固醇血症、混合性高脂蛋白血症等)、糖尿病、肾病综合征、总胆管阻塞、甲状腺功能减退、肥大性骨关节炎、老年性白内障和牛皮癣。 　　2.TC降低
常见于低脂蛋白血症、贫血、败血症、甲状腺功能亢进、肝脏疾病、严重感染、营养不良、肠道吸收不良和药物治疗过程中的溶血性黄疸及慢性消耗性疾病，如癌症晚期等。 　　(七)注意事项 　　1.试剂中酶的质量影响测定结果。 　　2.若需检测游离胆固醇浓度，将酶试剂成分中去掉胆固醇酯酶即可。 　　3.检测标本可为血清或者血浆(以肝素或EDTAK2抗凝)。 　　(八)评价
本方法线性范围为≤19.38mmol/L(750mg/dl)。 　　本方法特异性好和灵敏较高，既可用于手工操作，也可自动化分析；既可作终点法检测，也可作速率法检测。 　　在终点法中血红蛋白高于 2g /L时引起正干扰；胆红素高于 0.1g /L时有明显负干扰；血中维生素C与甲基多巴浓度高于治疗水平时，会使结果降低。但是在速率法中上述干扰物质影响较小。高TG血症对本法无明显影响。 　　检测TC的血清(浆)标本密闭保存时，在 4℃ 可稳定1周， -20℃ 可稳定半年以上。当前位置： >>
血清总蛋白测定
郧县中医院检验科 主题内容生化室作业指导书文件编号：检验科-SH-01 版本/修订号：1/0 生效日期： 第 1 页 共 103 页血清总蛋白测定血 清 总 蛋 白 测 定 (双 缩 脲 法 )1.实 验 原 理 ： 凡 分 子 中 含 有 两 个 甲 酰 氨 基 ( -CONH2- )的 化 合 物 都 能 与碱性铜溶液作用，形成紫色复合物，这一反应称双缩脲反应 。蛋 白 质 分 子 中 有 许 多 肽 键 ( -CONH- ） 都 能 起 此 反 应 ， 而 且 各 种 血 浆 蛋 ， 白 显 色 程 度 基 本 相 同 .紫 色 复 合 物 在 540 nm 有 吸 收 峰 ， 并 与 蛋 白 含 量成正比，通过与同样处理的标准蛋白比较可求出血清总蛋白含量。 因 此 ，在 严 格 控 制 条 件 下 ，双 缩 脲 反 应 可 作 为 血 浆 蛋 白 总 量 测 定 的 理 想 方 法 ，从 测 定 的 吸 光 度 值 计 算 出 蛋 白 质 含 量 。吸 光 度 的 大 小 与 试 剂 的 组 分 、 pH 值 、 反 应 温 度 有 关 。 蛋白质 + 铜离子 NaOH 紫红色络合物 2.标 本 采 集 及 存 放 ：无 特 殊 要 求 ，最 好 用 禁 食 的 标 本 以 减 少 乳 糜 血 的 干 扰 。离 心 后 采 集 血 清 或 肝 素 抗 凝 的 血 浆 。血 清 标 本 20～ 25℃ 保 存 可 稳 定 6天 ； 4～ 8℃ 保 存 可 稳 定 4周 ； -20℃ 保 存 至 少 可 稳 定 1年 。 3.实 验 试 剂 及 仪 器 ： 3.1 试 剂 ： 使 用 北 京 利 德 曼 总 蛋 白 试 剂 盒 。 试 剂 组 成 如 下成份含 32mmol/L 12mmol/L量酒石酸钾钠 硫酸铜碘化钾 NaoH30mmol/L 600mmol/L3.2仪 器 及 参 数 ： 3.2.1使 用 凯 美 雅 生 化 分 析 仪 ， 具 体 的 操 作 详 见 生 化 分 析 仪 作 业 指 导 书. 3.2.2 分 析 参 数 ：主波长 副波长 反应温度540nm 700nm 37℃分析方法 反应方向 S : R终点法 向上 5： 3004.质 量 控 制 ： 测 定 每 一 批 标 本 前 先 做 正 常 值 和 异 常 值 来 两 个 水 平 的 在 质 控 品 ， 以 2S 为 质 控 警 告 限 ， 3S 为 失 控 限 ， 绘 制 质 控 图 ， 判 断 是 否 在控（质控规则见生化室室内质控操作规程） 在控后方可进行标本 。 测定，若失控，查明原因并采取措施。 5. 计 算 方 法 ： 样本 总 蛋 白 含 量 ＝ 〓C0△ At----------标 本 管 的 吸 光 度 变 化 ； △ As----------标 准 管 的 吸 光 度 变 化 ； C0----------- 标 准 液 的 浓 度 ； 6. 参 考 值 范 围 ： 健 康 成 人 走 动 后 血 清 总 蛋 白 浓 度 为 64～ 83 g/L ， 健 康 成 人 静 卧 时 ， 血 清 总 蛋 白 浓 度 为 60～ 78 g/L。 7. 临 床 意 义 :血 清 总 蛋 白 有 生 理 性 波 动 ， 立 体 位 由 于 体 液 分 布 的 原 直因 ，血 液 相 对 浓 缩 ，而 长 久 卧 床 者 血 液 较 直 立 体 位 相 对 稀 释 。因 此 长 久 卧 床 者 血 清 总 蛋 白 比 直 立 活 动 时 约 低 3～ 5g/L； 新 生 儿 血 清 总 蛋 白 可 比 成 人 低 5～ 8g/L； 60 岁 以 上 老 人 约 比 成 人 低 2g/L。 （ 1）总 蛋 白 浓 度 增 高 ：① 血 清 中 水 分 减 少 ，使 总 蛋 白 浓 度 相 对 增 高 。 凡 体 内 水 分 的 排 出 大 于 水 分 的 摄 入 时 ，均 可 引 起 血 浆 浓 缩 ，尤 其 是 急 性 失 水 时 (如 岖 吐 、 腹 泻 、 高 热 等 )变 化 更 为 显 著 ， 血 清 总 蛋 白 浓 度 有 时 可 达 100～ 150g/L， 又 如 休 克 时 ， 于 毛 细 血 管 通 透 性 的 变 化 ， 由 血 浆 也 可 发 生 浓 缩 。慢 性 肾 上 腺 皮 质 功 能 减 退 患 者 ，由 于 钠 的 丢 失 而 致继发性水分丢失，血浆也可出现浓缩现象。② 血清蛋白质合成增 加 。大 多 发 生 在 多 发 性 骨 髓 瘤 患 者 ，此 时 主 要 是 球 蛋 白 的 增 加 ，其 量 可 超 过 50g/L， 总 蛋 白 则 可 超 过 100g/L。 （ 2） 血 清 总 蛋 白 浓 度 降 低 ： ① 血 浆 中 水 分 增 加 ， 血 浆 被 稀 释 。 如 因 各 种 原 因 引 起 的 水 钠 潴 留 。② 营 养 不 良 和 消 耗 增 加 。长 期 食 物 中 蛋 白 含 量 不 足 或 慢 性 肠 道 疾 病 所 引 起 的 吸 收 不 良 .使 体 内 缺 乏 合 成 蛋 白 质 的 原 料 ，或 因 长 期 患 消 耗 性 疾 病 ，如 严 重 结 核 病 、甲 状 腺 功 能 亢 进 和 恶 性 肿 瘤 等 ，均 可 造 成 血 清 总 蛋 白 浓 度 降 低 。③ 合 成 障 碍 ，主 要 是 肝 功 能 障 碍 。肝 脏 功 能 严 重 损 害 时 ，蛋 白 质 的 合 成 减 少 ，以 白 蛋 白 的 下 降 最 为 显 著 。④ 蛋 白 质 丢 失 。严 重 烫 伤 时 ，大 量 血 浆 渗 出 ，或 大 出 血 时 ，大 量 血 液 的 丢 失 ;肾 病 综 合 征 时 ，尿 液 中 长 期 丢 失 蛋 白 质 ;溃 疡 性 结 肠 炎 可 从 粪 便 中 长 期 丢 失 一 定 量 的 蛋 白 质 .这 些 均 可 使 血 清 总 蛋 白 浓度降低。 8.附 注 ：⑴ 干 扰 因 素 ： ① 胆 红 素 ≤ 40mg/dl， 血 红 蛋 白 ≤ 200mg/dl, 抗 坏 血 酸 ≤ 50mg/dl,乳 糜 1.6%时 对 检 测 结 果 没 有 影 响 。 ② 酚 酞 、 溴 磺 酞 钠 在 碱 性 溶 液 中 呈 色 ，影 响 双 缩 脲 的 测 定 结 果 ，右 旋 糖 酐 可 使 测 定 管 混 浊 亦影响结果， 论上这些干扰均可吸光度太高， 影响测定的准确性。 理 可 ⑵ 方 法 局 限 性 ： 本 试 剂 线 性 上 限 为 100g/L ， 如 样 品 测 定 值 超 过 上 限 时 ， 应 将 样 品 用 0.9％ 氯 化 钠 溶 液 作 1:1 稀 释 ， 重 新 测 定 ， 结 果 乘 以 2。 ⑶危急值报告：无危急值。 ⑷ 注 意 事 项 : ① 血 清 蛋 白 质 的 含 量 一 般 用 g/L 表 示 ， 因 为 各 种 蛋 白 质 的 分 子 量 不 同 ，不 能 用 mmol/L 表 示 。② 脂 类 高 的 血 清 ,呈 色 后 混 浊 不 清 ,可 用 乙 醚 抽 提 后 再 比 色 。 ③ 当 采 用 50g/L 的 浓 度 标 准 液 时 ， 吸 光 度 的 变 化 范 围 在 0.10～ 0.35。 9 参考文献 ： 9.1 叶 应 妩 、 王 毓 三 、 申 子 瑜 等 .全 国 临 床 检 验 操 作 规 程 【 第 三 版 】 东 南 大 学 出 版 社 ，
梁 淑 新 、 施 俊 英 . 临 床 检 验 操 作 技 术 系 列 丛 书 生 物 化 学 检 验 分 册 ， 军 事 医 学 出 版 社 ， 2006郧县中医院检验科 主题内容生化室作业指导书文件编号：检验科-SH-02 版本/修订号：1/0 生效日期： 第 5页 共 103 页血清白蛋白测定血 清 白 蛋 白 测 定 (溴 甲 酚 绿 法 )1.实 验 原 理 ： 白 蛋 白 是 血 清 中 清 蛋 白 ， 几 乎 都 由 肝 细 胞 合 成 ,它 是 血 清中的主要蛋白质组分。 蛋白作为一个结合和转运分子在机体营养 白 状 况 中 起 着 重 大 作 用 。它 的 另 一 个 作 用 是 维 持 渗 透 压 ，血 浆 胶 体 渗 透压 的 75%是 依 靠 白 蛋 白 维 持 的 。 血 清 白 蛋 白 的 测 定 常 用 于 病 人 状 态 的 非 特 异 监 视 。在 营 养 不 良 ，特 别 是 恶 性 营 养 不 良 的 病 人 中 可 看 到 很 低 水 平 的 血 浆 白 蛋 白 。另 外 ，血 液 稀 释 ，或 由 于 营 养 不 良 、肝 脏 疾 病 使 合 成 白 蛋 白 能 力 下 降 ，或 由 于 肾 病 综 合 征 、蛋 白 丢 失 性 肠 道 疾 病 等 可 引起大量白蛋白丢失的疾病均可导致低白蛋白。 白蛋白症则常见于 高 脱 水 或 血 液 浓 缩 。 血 清 中 的 白 蛋 白 与 溴 甲 酚 绿 在 pH=4.2 的 条 件 下 结 合 生 成 绿 色 复 合 物 ，溶 液 由 黄 色 变 为 绿 色 ，其 颜 色 深 浅 与 白 蛋 白 浓 度 成 正 比 ，通 过 在 630 nm 处 测 定 其 吸 光 度 ，与 同 样 处 理 的 白 蛋 白 标 准 比较，可求得血清中白蛋白含量。 白蛋白 + 溴甲酚绿 PH=4.2 绿色复合物2.标 本 采 集 及 存 放 ： 无 特 殊 要 求 ， 最 好 用 禁 食 的 标 本 以 减 少 乳 糜 血 的 干 扰 。离 心 后 采 集 血 清 或 血 浆 。血 清 4℃ 可 贮 6 天 ，在 20～ 25 ℃ 也可保存 6 天。3.试 验 试 剂 及 仪 器 ： 3.1 试 剂 ： 使 用 北 京 利 德 曼 白 蛋 白 检 测 试 剂 盒 。 试 剂 组 成 如 下成份含 PH=4.2量琥珀酸缓冲液 溴甲酚绿 表面活性剂及稳定剂3.2 仪 器 及 参 数 ：0.25mmol/L ＜0.1%3.2.1 使 用 凯 美 雅 生 化 分 析 仪 ，具 体 的 操 作 详 见 生 化 分 析 仪 作 业 指 导 书. 3.2.2 分 析 参 数 ： 主波长 副波长 反应温度 6300nm 700nm 37℃ 分析方法 反应方向 S : R 终点法 向上 3： 3004. 质 量 控 制 ： 在 测 定 每 一 批 标 本 前 先 做 正 常 值 和 异 常 值 来 两 个 水 平 的 质 控 品 ， 以 2S 为 质 控 警 告 限 ， 3S 为 失 控 限 ， 绘 制 质 控 图 ， 判 断 是 否在控（质控规则见生化室室内质控操作规程） 在控后方可进行标 。 本测定，若失控，查明原因并采取措施。5 计算方法：样本白蛋白含量＝〓C0△At----------标本管的吸光度变化；△As----------标准管的吸光度变化； C0-----------标准液的浓度； 6. 参 考 值 范 围 ： 4～ 14 岁 儿 童 ， 血 清 白 蛋 白 浓 度 为 38～ 54g/L， 健 康 成 人 血 清 白 蛋 白 浓 度 为 34～ 48g/L。 7. 临 床 意 义 :血 清 白 蛋 白 在 肝 脏 合 成 。 清 白 蛋 白 浓 度 增 高 常 见 于 严 血 重 失 水 、血 浆 浓 缩 所 致 ，并 非 蛋 白 质 绝 对 量 的 增 加 。临 床 上 尚 未 发 现 单 纯 白 蛋 白 浓 度 增 高 的 疾 病 ， 而 以 白 蛋 白 浓 度 降 低 为 多 见 .白 蛋 白 浓 度降低的原因与总蛋白浓度降低的原因相同乙但有时总蛋白的浓度 接近正常，而白蛋白的浓度降低，同时又伴有球蛋白浓度的增高。急性白蛋白浓度降低主要由于急性大量出血或严重烫伤时血浆 大量丢失。慢性白蛋白浓度降低主要由于肝脏合成白蛋白功能障碍、 腹水形成时白蛋白的丢失和肾病时尿液中的丢失， 重时白蛋白浓度 严 可 低 于 10g/L。 白 蛋 白 浓 度 低 于 25g/L 时 ， 由 于 胶 体 渗 透 压 的 下 降 ， 常可见到水肿等现象。 妊 娠 ，尤 其 是 妊 娠 晚 期 ，由 于 体 内 对 蛋 白 质 的 需 要 量 增 加 ，同 时 又 伴 有 血 浆 容 量 增 高 ，血 清 白 蛋 白 可 明 显 下 降 ，但 分 娩 后 可 迅 速 恢 复 正 常 。文 献 报 道 ，还 有 极 少 数 先 天 性 白 蛋 白 缺 乏 症 病 例 ，由 于 白 蛋 白 合成障碍，血清中几乎没有白蛋白，但患者不出现浮肿。 8.附 注 ： ⑴ 干 扰 因 素 ： 胆 红 素 ≤ 40mg/dl， 血 红 蛋 白 ≤ 500mg/dl, 抗 坏 血 酸 ≤ 50mg/dl,乳 糜 ＜ 1.60%时 对 检 测 结 果 没 有 影 响 。 ⑵ 方 法 局 限 性 ： 本 试 剂 线 性 上 限 为 60g/L， 如 样 品 测 定 值 超 过 上 限 时 ， 应 将 样 品 用 0.9％ 氯 化 钠 溶 液 作 1:1 稀 释 ， 重 新 测 定 ， 结 果 乘 以 2。 ⑶危急值报告：无危急值。 ⑷ 注 意 事 项 :① 该 试 剂 除 与 白 蛋 白 反 应 外 ， 还 可 以 与 血 清 中 许 多 蛋 白 如 铜 兰 蛋 白 、 C 反 应 蛋 白 、 а -球 蛋 白 、 结 合 珠 蛋 白 也 可 呈 色 ， 呈 慢 反 应 ，实 际 上 当 血 清 与 试 剂 混 合 之 后 就 开 始 反 应 ，持 续 一 个 小 时 之 后 反 应 完 成 ， 故 在 反 应 最 初 的 30 秒 之 内 读 取 吸 光 度 ， 可 减 少 非 特 异 性 反 应 。 ② 当 60g/L 白 蛋 白 标 准 与 BCG 结 合 后 .溶 液 光 径 1.0cm ， 在 630nm 测 定 的 吸 光 度 应 为 0.. 如 达 不 到 此 值 ， 表 示 灵敏 度 较 低 。③ 此 法 测 定 正 常 血 清 标 本 的 批 间 变 异 系 数 为 6.3%左 右 。④ 国 内 试 剂 大 多 为 溴 甲 酚 绿 法 ， 些 进 口 原 装 试 剂 则 用 的 溴 甲 酚 紫 (BCP) 有 方法， BCP 法 的 优 点 是 受 球 蛋 白 和 其 他 血 浆 蛋 白 干 扰 较 小 ， 和 BCG 但 法 相 比 ，灵 敏 度 较 低 。此 外 ，溴 甲 酚 紫 与 非 人 源 性 白 蛋 白 结 合 力 相 当 弱， 适用于测定动物标本中的白蛋白， 质控血清往往是动物血清， 不 而 故 其 应 用 不 如 BCG 法 普 遍 。 ⑸ 血 清 球 蛋 白 含 量 及 白 球 比 值 ：在 临 床 生 化 检 验 中 ，一 般 不 需 要 单 独 测 定 球 蛋 白 的 含 量 ，而 是 在 测 定 总 蛋 白 和 白 蛋 白 含 量 之 后 ，用 总 蛋 白 减去白蛋白的含量即为球蛋白的含量。 前全自动生化分析仪能同时 目 测 定 白 蛋 白 和 总 蛋 白 的 含 量 ， 并 计 算 出 白 球 比 值 ， A/G 比 值 的 参 考 范 围 为 1.5～ 2.5.球 蛋 白 浓 度 增 高 。临 床 上 常 以 ? 球 蛋 白 增 高 为 主 .球 蛋 白 增 高 的 原 因 ， 除 水 分 丢 失 的 间 接 原 因 外 ， 主 要 有 下 列 因 素 :① 感 染 性 疾 病 :如 结 核 病 、痢 疾 、黑 热 病 、血 吸 虫 病 、麻 风 病 等 ;② 自 身 免 疫 性 疾 病 :如 系 统 性 红 斑 猥 疮 、 硬 皮 病 、 风 湿 热 、 类 风 湿 性 关 节 炎 、 肝 硬 化 等 ;③ 多 发 性 骨 髓 瘤 :球 蛋 白 可 增 至 20～ 50 g/L 。 球蛋白浓度降低主要是合成减少. 正常婴儿出生后至 3 岁内， 由 于 肝 脏 租 免 疫 系 统 尚 未 发 育 完 全 ，球 蛋 白 浓 度 较 低 ，此 属 于 生 理 性 低球蛋白血症。 上腺皮质激素和其他免疫抑制剂有抑制免疫机能的 肾 作 用 ， 会 导 致 球 蛋 白 的 合 成 减 少 .低 ? 球 蛋 白 血 症 或 无 ? 球 蛋 白 血 症 ， 患者血清中 ? 蛋白极度下降或缺如。先天性患者，仅见于男性婴儿， 而 后 天 获 得 性 的 .可 发 生 于 男 、女 两 性 。此 类 患 者 缺 乏 体 液 免 疫 功 能 ， 很易发生难以控制的感染.9.参 考 文 献 ： 9.1 叶 应 妩 、 王 毓 三 、 申 子 瑜 等 .全 国 临 床 检 验 操 作 规 程 【 第 三 版 】 东 南 大 学 出 版 社 ，
梁 淑 新 、 施 俊 英 . 临 床 检 验 操 作 技 术 系 列 丛 书 生 物 化 学 检 验 分 册 ， 军 事 医 学 出 版 社 ， 2006郧县中医院检验科 主题内容生化室作业指导书文件编号：检验科-SH-03 版本/修订号：1/0 生效日期： 第 9页 共 103 页血清总 胆 红 素 (TBIL)测 定血 清 总 胆 红 素 (TBIL)测 定 (钒 酸 盐 氧 化 法 )1.实 验 原 理 ： 总 胆 红 素 (是 血 红 蛋 白 、 肌 红 蛋 白 、 过 氧 化 物 酶 、 细 胞 色素等含铁卟琳的化合物在体内代谢的产物。血清中有两类胆红素， 即未结合胆红素和合胆红素。 结合胆红素又称游离胆红素或间接胆 未 红 素 。间 接 胆 红 素 在 生 理 pH 条 件 下 是 难 溶 于 水 的 脂 溶 性 物 质 ，可 透 过 细 胞 膜 ，对 细 胞 有 毒 害 作 用 ，不 能 通 肾 脏 随 尿 排 出 体 外 。结 合 胆 红 素即胆红素葡萄糖醛酸酯， 称直接胆红素， 接胆红素是水溶性的， 又 直 不 易 透 过 细 胞 膜 ，可 通 过 肾 脏 随 尿 排 出 。总 胆 红 素 是 直 接 胆 红 素 与 间 接胆红素的和。C酸盐氧化法原理如下： C酸盐 总胆红素 胆绿素胆 红 素 的 减 少 引 起 在 波 长 450nm 处 吸 光 度 下 降 ，吸 光 度 的 变 化 与总胆红素含量成正比。2.标 本 采 集 ： 采 用 空 腹 无 溶 血 血 清 ， 要 尽 快 分 离 测 定 。 2 -8℃ 避 光 保 存 ，血 清 中 胆 红 素 可 稳 定 3 天 。冰 冻 保 存 3 个 月 ，胆 红 素 水 平 未 见 明 显变化。 3.实 验 试 剂 及 仪 器 ： 3.1 试 剂 ： 使 用 北 极 利 德 曼 检 测 试 剂 盒 。 试 剂 组 成 如 下 成 份 含 量R1:柠 檬 酸 缓 冲 液 反应促进剂 表面活性剂 R2:磷 酸 盐 缓 冲 液 偏钒酸钠100mmol/L 1mmol/L 2mmol/L 10mmol/L 4mmol/L 2 仪 3.器及参数： 3.2.1 使 用 凯 美 雅 生 化 分 析 仪 ，具 体 的 操 作 详 见 生 化 分 析 仪 作 业 指 导 书. 3.2.2 分 析 参 数 ： 主波长 副波长 反应温度 450nm 546nm 37℃ 分析方法 反应方向 S:R1:R2 终点法 向下 14:280:704. 质 量 控 制 ： 在 测 定 每 一 批 标 本 前 先 做 正 常 值 和 异 常 值 来 两 个 水 平 的 质 控 品 ， 以 2S 为 质 控 警 告 限 ， 3S 为 失 控 限 ， 绘 制 质 控 图 ， 判 断 是 否在控（质控规则见生化室室内质控操作规程） 在控后方可进行标 。 本测定，若失控，查明原因并采取措施。5. 计 算 方 法 ： 血 清 胆 红 素 的 含 量 ( μ mol/L)＝ △At----------标本管的吸光度变化； △As----------标准管的吸光度变化； C0-----------标准液的浓度； 6. 参 考 值 范 围 ： 婴〓C0儿 ： 出 生 24 小 时 内 ＜ 150μ mol/L 出生第 2 天 出生第 3 天 出 生 第 4～ 6 天 22-193μ mol/L 12-217μ mol/L 1.7-216μ mol/L 3.4-17μ mol/L儿童： ＞一个月成 年 人 ： 3.4-17.2μ mol/L 7.临 床 意 义 ⑴ 判 断 有 无 黄 疸 、 黄 疸 程 度 及 演 变 变 过 程 ： 当 STB& 17.1 μ mol/L 但 &34.2μ mol/L 时 为 隐 性 黄 疸 或 亚 临 床 黄 疸 ;34.2-171μ mol/L 为 轻度黄疸， 171-342μ mol/L 为 中 度 黄 疸 ， &342μ mol/L 时 为 重 度 黄 疸 。 在病程中检测可以判断疗效和指导治疗。 ⑵ 根 据 黄 疸 程 度 推 断 黄 疸 病 因 溶 血 性 黄 疸 通 常 &85.5μ mol/L ， 细 肝 胞 黄 疸 为 17.1-171μ mol/L ， 不 完 全 性 梗 阻 性 黄 疸 为 171 - 265μ mol/L ， 完 全 性 梗 阻 性 黄 疸 通 常 &342μ mol/L 。 ⑶ 根据总胆红素、结合及非结合胆红素增高程度判断黄疸类型若 STB 增 高 伴 非 结 合 胆 红 素 明 显 增 高 提 示 为 溶 血 性 黄 疸 ，总 胆 红 素 增 高 伴结合胆红素明显升高为胆汁淤积性黄疸， 者均增高为肝细胞性黄 三 疸。8.附 注 ： ⑴ 干 扰 因 素 ： 血 红 蛋 白 ≤ 100mg/dl, 抗 坏 血 酸 ≤ 50mg/dl, 乳 糜 ＜ 1.60%时 对 检 测 结 果 没 有 影 响 。 ⑵ 方 法 局 限 性 ： 本 试 剂 线 性 上 限 为 680μ mol/L， 如 样 品 测 定 值 超 过 上 限 时 ， 应 将 样 品 用 0.9％ 氯 化 钠 溶 液 作 倍 比 稀 释 ， 重 新 测 定 ， 结 果乘以稀释倍数。 ⑶ 危 急 值 报 告 ：当 新 生 儿 血 清 标 本 测 定 结 果 总 胆 红 素 〉340μ mol/L 时，在经过复查等确认手段处理后应及时向临床主管医生汇报。 ⑷ 注 意 事 项 : ① 当 采 用 100 μ mol/L 的 浓 度 标 准 液 时 ， 吸 光 度 的 变 化 范 围 在 0.05～ 0.20 ②试 剂 空 白 吸 光 度 应 ＜ 0.10， 否 则 应 视 为 过 期 不 能 在 使 用 。③ 本 法 测 定 血 清 胆 红 素 ，在 10～ 37℃ 条 件 下 不 受 温 度 的 变 化 影 响 ，呈 色 在 2 小 时 内 非 常 的 稳 定 。胆 红 素 对 光 敏 感 ，标 准 及 标 本 均 应 尽 量 避 光 。 ④ 钒 酸 盐 法 试 剂 稳 定 、保 存 期 长 ，可 室 温 保 存 ，操 作 简 单 ， 特 别 适 合 全 自 动 生 化 分 析 仪 。 ⑤ 1993 年 日 本 学 者 对 该 法 ， 目 前 国 内 用 户 众 多 ，文 献 均 认 为 该 法 和 传 统 方 法（ 改 良 J-G 法 ）有 良 好 的相关性。线性和特异性达到较理想的水平。 9.参 考 文 献 ： 9.1 叶 应 妩 、 王 毓 三 、 申 子 瑜 等 .全 国 临 床 检 验 操 作 规 程 【 第 三 版 】 东 南 大 学 出 版 社 ，
梁 淑 新 、 施 俊 英 . 临 床 检 验 操 作 技 术 系 列 丛 书 生 物 化 学 检 验 分 册 ， 军 事 医 学 出 版 社 ， 2006郧县中医院检验科 主题内容生化室作业指导书文件编号：检验科-SH-03 版本/修订号：1/0 生效日期： 第 13 页 共 103 页血清直 接 胆 红 素 (TBIL)测 定血 清 直 接 胆 红 素 （ D-BIL） 测 定 (钒 酸 盐 法 )1.实 验 原 理 ： 在 正 常 生 理 状 态 下 ， 间 接 胆 红 素 以 胆 红 素 -血 浆 蛋 白 复 合 物 的 形 式 经 血 液 运 输 ，这 一 方 面 增 大 了 胆 红 素 的 水 溶 性 ，有 利 于 运 输 ;同 时 又 使 血 红 素 固 定 在 大 分 子 蛋 白 质 上 ， 可 阻 止 血 红 素 进 入 细 胞内 ，避 免 了 胆 红 素 对 细 胞 的 毒 害 作 用 。但 是 如 果 血 液 中 间 接 胆 红 素 浓 度过高， 血浆清蛋白浓度明显降低时， 导致间接胆红素游离增多， 或 可 从 而 增 加 了 间 接 胆 红 素 透 人 细 胞 内 的 危 险 .另 外 ， 些 阴 离 子 对 清 蛋 某 白 与 胆 红 素 的 结 合 具 有 竞 争 作 用 。如 游 离 脂 肪 酸 、甲 状 腺 素 、磺 胶 类 药 物 、水 杨 酸 等 在 血 浆 中 的 推 度 升 高 时 ，都 可 使 间 接 胆 红 素 和 血 浆 蛋 白 质 的 结 合 减 少 。间 接 血 红 素 进 入 肝 细 胞 后 ，与 肝 细 胞 内 的 载 体 蛋 白 Y 或 z 结 合 形 成 血 红 素 -y 或 胆 红 素 -z ， 以 此 形 式 运 往 滑 面 内 并 质 网 ，在 葡 萄 糖 醛 酸 基 转 移 酶 作 用 下 ，胆 红 素 与 二 磷 酸 尿 苷 葡 萄 糖 醛 酸 反 应 生 成 结 合 胆 红 素 ，即 直 接 胆 红 素 。直 接 胆 红 素 再 经 肝 内 胆 道 系 统 和 胆 总 管 随 胆 汁 一 起 排 入 肠 道 进 一 步 代 谢 ，最 后 以 胆 素 形 式 ，随 尿 及粪便排出体外。 在 PH 值 为 3.0左 右 、 表 面 活 性 剂 和 间 接 胆 红 素 抑 制 剂 的 条 件 下 ， 样品中的直接胆红素被氧化剂C酸盐氧化为胆绿素。 红素的黄色特 胆 异 性 吸 光 度 下 降 ，通 过 测 定 C 酸 盐 氧 化 前 后 吸 光 度 的 变 化 ，计 算 出 样 品中直接胆红素的含量。 胆红素 钒酸盐 胆绿素 2.标 本 采 集 及 保 存 ： 采 用 空 腹 无 溶 血 血 清 ， 要 尽 快 分 离 测 定 。 2 -8℃ 避 光 保 存 ，血 清 中 胆 红 素 可 稳 定 3 天 。冰 冻 保 存 3 个 月 ，胆 红 素 水 平 未见明显变化。3 .实 验 试 剂 ：3.1 试 剂 ： 使 用 北 极 利 德 曼 检 测 试 剂 盒 。 试 剂 组 成 如 下 成 份 含 量R1:柠 檬 酸 缓 冲 液 反应促进剂 表面活性剂 R2:磷 酸 盐 缓 冲 液 偏钒酸钠100mmol/L 1mmol/L 2mmol/L 10mmol/L 4mmol/L3.2 仪 器 及 参 数 ： 3.2.1 使 用 凯 美 雅 生 化 分 析 仪 ，具 体 的 操 作 详 见 生 化 分 析 仪 作 业 指 导 书. 3.2.2 分 析 参 数 ： 主波长 副波长 反应温度 450nm 546nm 37℃ 分析方法 反应方向 S:R1:R2 终点法 向下 14:280:704. 质 量 控 制 ： 在 测 定 每 一 批 标 本 前 先 做 正 常 值 和 异 常 值 来 两 个 水 平 的 质 控 品 ， 以 2S 为 质 控 警 告 限 ， 3S 为 失 控 限 ， 绘 制 质 控 图 ， 判 断 是 否在控（质控规则见生化室室内质控操作规程） 在控后方可进行标 。 本测定，若失控，查明原因并采取措施。5. 计 算 方 法 ： 血 清 胆 红 素 的 含 量 ( μ mol/L)＝ △At----------标本管的吸光度变化； △As----------标准管的吸光度变化； C0-----------标准液的浓度；〓C06. 参 考 值 范 围 ： ＜ 6.8μ mol/L 7. 临 床 意 义 : 根 据 直 接 胆 红 素 与 总 胆 红 素 比 值 ， 有 助 于 鉴 别 黄 疸 类 型 ， 如 DBIl/TBIL & 20% 提 示 为 溶 血 性 黄 疸 ， 20% -50% 常 为 肝 细 胞 性 黄 疸 ，比 值 &50% 为 梗 阻 性 黄 疸 。直 接 胆 红 素 测 定 可 能 有 助 于 某 些 肝 胆 疾 病 的 早 期 诊 断 。肝 炎 的 黄 疸 前 期 、无 黄 疸 型 肝 炎 、失 代 偿 期 肝 硬 化 、 肝 癌 等 ， 30% -50% 患 者 表 现 为 直 接 胆 红 素 增 加 ， 而 总 胆 红 素 正常（见下表）正常人及常见黄疸的胆红素素代谢检查结果 血清胆红素 尿内胆色素DBILTBILD/T尿胆红素尿胆原正常人0～ 6.83.4～ 17.10.2～ 0.4阴性0.84～ 4.2梗阻性黄疸明显增加轻度增加&0.5强阳性减少或缺少溶血性黄疸轻度增加明显增加&0.2阴性明显增加肝细胞性黄疸 中度增加中度增加0.2～ 0.5阳性正常或轻度增加8.附 注 ： ⑴ 干 扰 因 素 ： 血 红 蛋 白 ≤ 300mg/dl, 抗 坏 血 酸 ≤ 20mg/dl, 乳 糜 ＜ 0.40%时 对 检 测 结 果 没 有 影 响 。 ⑵ 方 法 局 限 性 ： 本 试 剂 线 性 上 限 为 430μ mol/L， 如 样 品 测 定 值 超过 上 限 时 ， 应 将 样 品 用 0.9％ 氯 化 钠 溶 液 作 倍 比 稀 释 ， 重 新 测 定 ， 结 果乘以稀释倍数。 ⑶危急值报告：无。 ⑷ 注 意 事 项 : ① 当 采 用 100 μ mol/L 的 浓 度 标 准 液 时 ， 吸 光 度 的 变 化 范 围 在 0.07～ 0.20 ②试 剂 空 白 吸 光 度 应 ＜ 0.10， 否 则 应 视 为 过 期 不 能 在 使 用 。③ 本 法 测 定 血 清 胆 红 素 ，在 10～ 37℃ 条 件 下 不 受 温 度 的 变 化 影 响 ，呈 色 在 2 小 时 内 非 常 的 稳 定 。胆 红 素 对 光 敏 感 ，标 准 及 标 本 均应尽量避光。④ C酸盐法试剂稳定、保存期长，可室温保存，操 作 简 单 ， 特 别 适 合 全 自 动 生 化 分 析 仪 。 ⑤ 1993 年 日 本 学 者 对 该 法 ， 目 前 国 内 用 户 众 多 ，文 献 均 认 为 该 法 和 传 统 方 法（ 改 良 J-G 法 ）有 良 好 的 相 关 性 。线 性 和 特 异 性 达 到 较 理 想 的 水 平 。⑥ 直 接 胆 红 素 包 括 结 合 胆 红 素 和 胆 红 素 δ -胆 红 素 ， 而 间 接 胆 红 素 则 是 游 离 胆 红 素 。 因 此 在 加 速 剂 存 在 的 情 况 下 ，所 有 部 分 的 胆 红 素 都 参 与 反 应 ，其 测 定 结 果 为总胆红素。总胆红素健减去直接胆红素即为间接胆红素。 9.参 考 文 献 ： 9.1 叶 应 妩 、 王 毓 三 、 申 子 瑜 等 .全 国 临 床 检 验 操 作 规 程 【 第 三 版 】 东 南 大 学 出 版 社 ，
梁 淑 新 、 施 俊 英 . 临 床 检 验 操 作 技 术 系 列 丛 书 生 物 化 学 检 验 分 册 ， 军 事 医 学 出 版 社 ， 2006郧县中医院检验科 主题内容生化室作业指导书文件编号：检验科-SH-04 版本/修订号：1/0 生效日期： 第 17 页 共 103 页血清丙 氨 酸 氨 基 转 移 酶 测 定血 清 丙 氨 酸 氨 基 转 移 酶 测 定 (IFCC 推 荐 方 法 )1.实 验 原 理 ： 丙 氨 酸 氨 基 转 移 酶 (ALT) 又 称 谷 丙 转 氨 酶 (GPT) ， 它 催 化 L- 丙 氨 酸 和 L- 谷 氨 酸 之 间 氨 基 的 转 移 ， 在 此 过 程 中 相 应 的 酮 酸 是 a -酮 戊 二 酸 和 丙 酮 酸 。 丙 酮 酸 进 入 柠 檬 酸 循 环 被 利 用 ， 而 谷 氨 酸 产 生 的 氨 为 尿 素 循 环 提 供 氮 源 。 在 正 常 情 况 下 ， ALT 主 要 存 在 于 各 组 织 细 胞 中 (以 肝 细 胞 中 含 量 最 多 ， 心 肌 细 胞 中 含 量 也 较 多 ) ， 只 有 极 少 量 释 放 人 血 液 中 ，所 以 血 清 中 此 酶 活 力 很 低 ，当 这 些 组 织 病 变，细胞坏死或通透性增加时，细胞内的酶即可大量释放人血液中， 使 血 清 中 该 酶 的 活 力 显 著 增 高 。 在 ALT 速 率 法 中 ， 谷 丙 转 氨 酶 催 化 L-丙 氨 酸 的 氨 基 转 移 ，生 成 丙 酮 酸 。丙 酮 酸 与 NADH 在 LDH 的 催 化 下 反 应 生 成 乳 酸 和 NAD + 。 NADH 在 340nm 处 有 特 异 吸 收 峰 ， 其 被 氧 化 的 速 率 与 血 清 中 ALT 的 活 性 成 正 比 ，在 340nm 处 测 定 NADH 下 降 速 率 , 即 可 测 出 ALT 活 性 单 位 。ALT L-丙 氨 酸 + α -酮 戊 二 酸 丙 酮 酸 + L-谷 氨 酸NADH + 丙 酮 酸 + H +LDHL-乳 酸 + NAD + + H 2 O2.标 本 采 集 与 处 理 ：宜 采 用 血 清 标 本 。草 酸 盐 、肝 素 、枸 橼 酸 盐 虽 不 抑 制 酶 活 性 ，但 可 引 起 反 应 液 轻 度 浑 浊 。红 细 胞 内 ALT 含 量 为 血 清 中 3～ 5倍 ，故 应 避 免 标 本 溶 血 。血 清 Z 4℃ 冰 箱 内 1周 ，酶 活 性 无 显 著 变 化 。 不 推 荐 冰 冻 保 存 ALT 测 定 标 本 。 3.实 验 试 剂 及 仪 器 ： 3.1 试 剂 ： 使 用 北 京 利 德 曼 检 测 试 剂 盒 。 试 剂 组 成 如 下 成 份 含 PH=7.8 量 80mmol/LR1:Tris 缓 冲 液 L-丙 氨 酸 LDH R2:起 动 液 NADH200mmol/L&1.2U/ml0.18mmol/L 12mmol/La -酮 戊 二 酸3.2仪 器 及 参 数 ：3.2.1使 用 凯 美 雅 生 化 分 析 仪 ， 具 体 的 操 作 详 见 生 化 分 析 仪 作 业 指 导 书. 3.2.2 分 析 参 数 ： 主波长 340nm 分析方法 速率法 延滞时间 60S副波长 反应温度410nm 37℃反应方向 S:R1:R2向下 20:200： 40读数时间 理论因子120S 20904. 质 量 控 制 ： 在 测 定 每 一 批 标 本 前 先 做 正 常 值 和 异 常 值 来 两 个 水 平 的 质 控 品 ， 以 2S 为 质 控 警 告 限 ， 3S 为 失 控 限 ， 绘 制 质 控 图 ， 判 断 是 否在控（质控规则见生化室室内质控操作规程） 在控后方可进行标 。 本测定，若失控，查明原因并采取措施。 5.计 算 方 法 ： ALT(U/L) =ΔA/min×Vt×1000= ΔA/min×F式中: ΔA/min 一一每分钟吸光度变化率； e 一一 6.22 摩尔吸光系数； Vt 一一反应液总体积 (ml)； Vs 一一样品体积 (ml)； d 一一 比色杯光径 (cm) F 一一 理论因子 6. 参 考 值 范 围 ： 不 含 磷 酸 吡 哆 醛 女 性 &31U/L 男 性 &41U/L 7.临 床 意 义 : （ 1） 急 性 病 毒 性 肝 炎 ALT 异 常 ， 阳 性 率 为 80% -100%， 是 病 毒 性 肝 炎 的 重 要 检 查 指 标 。 急 性 乙 型 肝 炎 ALT 升 高 显 著 ， 若 较 高 的 水 平 持 续 数 月 ，甚 至 于 数 年 ，表 明 转 为 慢 性 。重 症 肝 炎 和 亚 急 性 肝 炎 时 ， 一 度 上 升 的 ALT 在 症 状 恶 化 时 有 酶 活 性 降 低 ， 出 现 血 清 胆 红 素 和 ALT 变 化 分 离 的 现 象 ， 可 能 是 肝 坏 死 的 征 兆 。 含磷酸吡哆醛 10～ 35U/L 10～ 50U/L（ 2）慢 性 肝 炎 、肝 硬 化 ALT 轻 度 上 升 或 正 常 ，血 清 AST〉ALT。 当 慢 性 肝 炎 、 肝 硬 化 患 者 ALT 正 常 而 甲 胎 蛋 白 升 高 时 ， 要 警 惕 并 发原发性肝癌的可能。 （ 3）其 他 原 因 致 肝 功 能 损 害 心 功 能 不 全 致 肝 淤 血 ，可 有 ALT 升 高 .当 心 功 能 好 转 时 ， ALT 周 恢 复 正 常 :脂 肪 肝 、 胆 管 炎 、 药 物 性 肝 脏 损 害 等 ALT 将 升 高 。 8. 附 注 ： ⑴ 干 扰 因 素 ：当 标 本 中 胆 红 素 ≤ 40mg/dl，血 红 蛋 白 ≤ 100mg/dl, 抗 坏 血 酸 ≤ 50mg/dl,乳 糜 ＜1.6%时 对 检 测 结 果 没 有 影 响 。 ⑵ 方 法 局 限 性 ： 本 试 剂 线 性 上 限 为 600U/L ， 如 样 品 测 定 值 超 过 上 限 时 ， 应 将 样 品 用 0.9％ 氯 化 钠 溶 液 作 1:1 稀 释 ， 重 新 测 定 ， 结 果 乘 以 2。 ⑶危急值报告：无危急值。 ⑷ 注 意 事 项 : ① 正 常 新 生 儿 ALT 水 平 比 成 年 人 约 高 2 倍 ,出 生 后 约 3 个 月 降 至 成 年 人 的 水 平 .新 生 儿 ,尤 其 未 成 熟 儿 ， 细 胞 膜 通 透 性 肝 较 大 ,ALT 从 肝 细 胞 渗 入 血 浆 较 多 ,使 血 清 ALT 水 平 升 高 .② 如 果 试 剂 空 白 吸 光 度 下 降 至 1.0,表 明 NADH 己 下 降 50%左 右 ， 不 能 保 证 ALT 测 定 的 线 性 范 围 。 试 剂 盒 贮 存 到 有 效 期 末 时 ,必 须 做 试 剂 空 白 吸 光 度 测 定 .若 试 剂 空 白 吸 光 度 小 于 1.0 时 ,应 视 为 过 期 试 剂 ,不 能 再 使 用 .③ ALT 测 定 中 存 在 两 个 副 反 应 ； a:血 清 中 存 在 的 α - 酮 酸 (如 丙 酮 酸 )能 消 耗 NADH; 丙 酮 酸 + NADH + H +LDH乳 酸 + NAD +b:血 清 中 谷 氨 酸 脱 氢 酶 (GLDH) 增 高 时 ， 在 有 氨 存 在 的 条 件 下 ， 亦 能 消 耗 NADH。 α - 酮 戊 二 酸 + NADH + H + +NH4 +GLDHL- 谷 氨 酸 + NAD + + H 2 O上 述 副 反 应 都 能 消 耗 NADH ， 使 340 nm 处 吸 光 度 下 降 值 增 加 ， 使测定结果偏高。目前，推荐 双试剂法，因孵育期长，能有效地消 除 于 扰 反 应 ， 提 高 测 定 准 确 性 ， 是 ALT 测 定 的 首 选 方 法 。 双 试 剂 法 可 适 当 地 降 低 试 剂 中 LDH 的 用 量 。至 于 NH4 + 的 于 扰 ，除 严 重 肝 病 时 血 清 谷 氨 酸 脱 氢 酶 活 性 增 高 和 血 氨 增 高 时 外 ， 一 般 血 清 中 NH4 + 的 含 量 甚 徽 ， 干 扰 反 应 不 大 。 LDH 原 试 剂 往 往 是 用 饱 和 硫 酸 铵 配 制 的 ， 此 但 厂方在使用前必须经过严格的脱氨处理。 ④ IFCC 推 荐 的 试 剂 盒 中 ， 含 有 磷 酸 吡 哆 醛 (P-5&#39;-P)， 这 是 转 氨 酶 的 辅 基 ，能 使 血 清 中 ALT 显 示 最 大 活 性 。有 文 献 报 道 ，某 些 病 理 状 态 下 ，血 清 中 存 在 脱 辅 基 的 ALT 酶 蛋 白 ，当 使 用 含 P-5&#39;-P 的 底 物 时 可 使 血 清 ALT 活 性 提 高 7% ～ 55%& 变 化 幅 度 的 大 小 与 血 清 中 原 有 P - 5&#39; - P 含 量 有 关 ， 健 康 人 血 清 中 P-5&#39;-P 含 量 适 中 ， 底 物 中 P-5&#39;- P 对 增 高 ALT 活 性 作 用 不 大 。但 肾 脏 病 患 者 血 清 P -5&#39; -P 水 平 偏 低 ，底 物 中 P-5&#39;-P 可 显 著 升 高 血 清 ALT 活 性 。 ALT 测 定 中 有 的 用 磷 酸 盐 缓 冲 液 ， 有 的 用 Tris 缓 冲 液 。 据 报 道 :① NADH 在 Tris 缓 冲 液 中 稳 定 性 较 高 ;② P -5&#39;-P 在 Tris 缓 冲 液 中 ， 显 示 出 更 有 效 的 激 活 作 用 ，而 磷 酸 盐 缓 冲 液 有 延 缓 P-5&#39;-P 与 脱 辅 基 酶 蛋 白 的 结 合 作用。 9.参 考 文 献 ：9.1 叶 应 妩 、 王 毓 三 、 申 子 瑜 等 .全 国 临 床 检 验 操 作 规 程 【 第 三 版 】 东 南 大 学 出 版 社 ， 2006。 9.2 梁 淑 新 、 施 俊 英 . 临 床 检 验 操 作 技 术 系 列 丛 书 生 物 化 学 检 验 分 册 ， 军 事 医 学 出 版 社 ， 2006。郧县中医院检验科生化室作业指导书文件编号：检验科-SH-06 版本/修订号：1/0主题内容 血清天 门 冬 氨 酸 氨 基 转 移 酶 测 定生效日期： 第 22 页 共 103 页血 清 天 门 冬 氨 酸 氨 基 转 移 酶 测 定 (IFCC 推 荐 方 法 )1.实 验 原 理 ：天 门 冬 氨 酸 氨 基 转 移 酶 (AST)又 叫 谷 草 转 氨 酶 (GOT)，它 催 化 氨 基 从 特 定 的 氨 基 酸 (L-谷 氨 酸 或 L-天 门 冬 氨 酸 )转 移 到 相 应 的 酮 (α -酮 戊 二 酸 和 草 酰 乙 酸 。在 体 内 反 应 是 反 向 进 行 ，以 提 供 尿 素 循 环 的 氨 源 。 生 成 的 谷 氨 酸 在 谷 氨 酸 脱 氢 酶 作 用 下 脱 氨 ， α -酮 戊 二 酸 再 生 ， 生 成 的 氨 可 进 入 鸟 氨 酸 循 环 。 在 正 常 情 况 下 ， AST 存 在 于 各 种 组 织 细 胞 中 ，心 、肝 、骨 髓 和 肾 含 有 相 似 的 AST 量 ，因 此 酶 的 释 放 不 是 特 异 的 ， 但 酶 的 释 放 说 明 有 组 织 损 害 。 谷 草 转 氨 酶 催 化 L-天 门 冬 氨 酸 的 氨 基 转 移 与 MDH 催 化 的 反 应 偶 联 ，使 NADH 氧 化 成 NAD + 。NADH 在 340nm 处 有 特 异 吸 收 峰 ，其 被 氧 化 的 速 率 与 血 清 中 AST 的 活 性 成 正 比 ， 在 340nm 处 测 定 NADH 下 降 速 率 ,即 可 测 出 AST 活 性 单 位 。 L- 天 门 冬 氨 酸 + α - 酮 戊 二 酸 谷氨酸 NADH + 草 酰 乙 酸 + H+ MDH L-苹 果 酸 + NAD + AST 草 酰 乙 酸 + L-+ H2O 2.标 本 采 集 与 处 理 ：3 天 内 的 活 性 损 失 ：2～ 8℃ 保 存 ：&8%；15～ 25℃ 保 存 ： &10%； 标 本 稳 定 性 ： -20℃ 保 存 至 少 可 稳 定 3 个 月 。 3.实 验 试 剂 及 仪 器 ： 3.1 试 剂 ： 使 用 北 京 利 德 曼 检 测 试 剂 盒 。 试 剂 组 成 如 下成份含 80mmol/L 200mmol/L&1.2U/ml &0.8U/ml量R1:Tris 缓 冲 液 L-天 门 冬 氨 酸 LDH MDH R2: NADH0.18mmol/L 12mmol/L 3. 2a -酮 戊 二 酸仪器及参数： 3.2.1 使 用 凯 美 雅 生 化 分 析 仪 ，具 体 的 操 作 详 见 生 化 分 析 仪 作 业 指 导 书. 3.2.2 分 析 参 数 ：主波长 副波长 反应温度340nm 410nm 37℃分析方法 反应方向 S:R1:R2速率法 向下 20:200： 40延滞时间 读数时间 理论因子60S 120S 20904. 质 量 控 制 ： 在 测 定 每 一 批 标 本 前 先 做 正 常 值 和 异 常 值 来 两 个 水 平 的 质 控 品 ， 以 2S 为 质 控 警 告 限 ， 3S 为 失 控 限 ， 绘 制 质 控 图 ， 判 断 是 否在控（质控规则见生化室室内质控操作规程） 在控后方可进行标 。 本测定，若失控，查明原因并采取措施。5.计 算 方 法 ： AST(U/L)=ΔA/min×Vt×1000=ΔA/min×F式中: ΔA/min 一一每分钟吸光度变化率； e 一一 6.22 摩尔吸光系数；Vt 一一反应液总体积 (ml)； Vs 一一样品体积 (ml)； d 一一 比色杯光径 (cm) F 一一 理论因子 6. 参 考 值 范 围 ： 不含磷酸吡哆醛 女 性 &31U/L 男 性 &41U/L 7 临床意义: 天门冬氨酸氨基转移酶存在于各种组织细胞内， 以心肌含量最 尤 为 丰 富 ， 其 活 性 强 度 的 顺 序 大 致 为 心 脏 &肝 脏 &肌 肉 &肾 ， 所 以 AST 升 高 常 见 于 急 性 肝 炎 、药 物 性 肝 坏 死 、肝 癌 、肝 硬 化 、慢 性 肝 炎 和 心 肌 炎 等 ；胸 膜 炎 、肾 炎 及 肺 炎 等 含 量 轻 度 升 高 ；心 肌 梗 塞 时 AST 明 显 升 高；骨骼肌疾病如进行性肌营养不良，皮肌炎和挤压性肌肉损伤等 AST 可 升 高 。 8. 附 注 ： ⑴ 干 扰 因 素 ：当 标 本 中 胆 红 素 ≤ 40mg/dl，血 红 蛋 白 ≤ 100mg/dl, 抗 坏 血 酸 ≤ 50mg/dl,乳 糜 ＜1.6%时 对 检 测 结 果 没 有 影 响 。 ⑵ 方 法 局 限 性 ： 本 试 剂 线 性 上 限 为 600U/L ， 如 样 品 测 定 值 超 过 上 限 时 ， 应 将 样 品 用 0.9％ 氯 化 钠 溶 液 作 1:1 稀 释 ， 重 新 测 定 ， 结 果 乘 以 2。 ⑶危急值报告：无危急值。 ⑷ 注 意 事 项 : ①本 法 的 缺 点 是 标 本 AST 活 性 高 时 ， 酰 乙 酸 对 AST 草 含磷酸吡哆醛 10 ～ 40U/L 10 ～ 50U/L显 示 反 馈 抑 制 ，使 测 定 结 果 偏 低 。酮 血 症 中 乙 酰 乙 酸 及 。② 其 它 的 注 意 事 项 与 ALT 检 测 相 同 。 9.参 考 文 献 ： 9.1 叶 应 妩 、 王 毓 三 、 申 子 瑜 等 .全 国 临 床 检 验 操 作 规 程 【 第 三 版 】 东 南 大 学 出 版 社 ，
梁 淑 新 、 施 俊 英 . 临 床 检 验 操 作 技 术 系 列 丛 书 生 物 化 学 检 验 分 册 ， 军 事 医 学 出 版 社 ， 2006郧县中医院检验科 主题内容生化室作业指导书文件编号：检验科-SH-07 版本/修订号：1/0 生效日期： 第 25 页 共 103 页血清碱性磷酸酶测定血清碱性磷酸酶测定1.实验原理：碱 性 磷 酸 酶 (ALP)几 乎 存 在 于 机 体 的 各 个 组 织 ， 但 以 骨 髓 与 牙 齿 、 肾 脏 和 肝 脏 中 含 量 较 多 。 正 常 人 血 清 中 的 ALP 主 要 来 自 骨 髓 ，由 成 骨 细 胞 产 生 ，故 骨 髓 疾 患 ，特 别 是 当 有 新 骨 质 生 成 时 和 正 在 生 长 的 儿 童 期 ，血 液 内 ALP 活 力 增 高 。又 因 为 该 酶 由 肝 脏 排 泄 ，且 有 部分来自肝脏，故肝胆疾病，特别是胆道 阻塞时此酶在血中活力增 高 。 磷 酸 对 硝 基 苯 酚 P-NPP） 底 物 ， 以 （ 为 2-氨 基 -2-甲 基 -1-丙 醇 AMP） （ 为 磷 酰 基 的 受 体 物 质 ， 增 进 酶 促 反 应 速 率 。 P-NPP 在 碱 性 溶 液 中 为 无 色 ， 在 ALP 催 化 下 ， P-NPP 分 裂 出 磷 酸 基 团 ， 生 成 游 离 的 对 硝 基 苯 酚 （ P-NP） 后 者 在 碱 性 溶 液 中 转 变 成 醌 式 结 构 ， 呈 现 较 深 的 黄 色 。 在 ， 波 长 405nm 处 监 测 吸 光 度 增 高 速 率 ,计 算 出 ALP 活 性 。ALP 对硝基苯磷酸二钠 + +H 3 PO 4 2.标 本 采 集 与 处 理 ：无 特 殊 要 求 ，最 好 用 禁 食 的 标 本 以 减 少 乳 糜 血 的 干 扰 。 离 心 后 采 集 血 清 或 肝 素 抗 凝 的 血 浆 。 但 草 酸 、 柠 檬 酸 和 EDTA 能 抑 制 ALP 活 性 ， 故 不 能 用 这 些 物 质 作 抗 凝 剂 。 血 清 Z 常 温 （ 25℃ ） ALP 活 性 显 示 轻 度 升 高 ， Z 冰 箱 （ 4℃ ） 酶 活 性 也 会 缓 慢 升 高 。 冰 冻 血 清 中 ALP 活 性 下 降 ， 当 血 清 复 溶 后 ， 酶 活 性 会 慢 慢 恢 复 。 H2O 对硝基苯酚3.实 验 试 剂 及 仪 器 ： 3.1 试 剂 ： 使 用 东 欧 津 玛 检 测 试 剂 盒 。 试 剂 组 成 如 下成 R1: Mgcl 2 AMP份含 R1.0mmol/L R100mmol/L R16mmol/L量R2:对 硝 基 苯 磷 酸 盐 3.2 仪 器 及 参 数 ：3.2.1 使 用 凯 美 雅 生 化 分 析 仪 ，具 体 的 操 作 详 见 生 化 分 析 仪 作 业 指 导 书. 3.2.2 分 析 参 数 ：主波长 副波长 反应温度405nm 520nm 37℃分析方法 反应方向 S:R1:R2速率法 向上 5：200：50延滞时间 读数时间 理论因子60S 150S 27574. 质 量 控 制 ： 在 测 定 每 一 批 标 本 前 先 做 正 常 值 和 异 常 值 来 两 个 水 平 的 质 控 品 ， 以 2S 为 质 控 警 告 限 ， 3S 为 失 控 限 ， 绘 制 质 控 图 ， 判 断 是 否在控（质控规则见生化室室内质控操作规程） 在控后方可进行标 。 本测定，若失控，查明原因并采取措施。 5.计算方法： ALP(U/L) =ΔA/min×Vt×1000=ΔA/min× F式中: ΔA/min 一一每分钟吸光度变化率； e 一一 6.22 摩尔吸光系数； Vt 一一反应液总体积 (ml)； Vs 一一样品体积 (ml)； d 一一 比色杯光径 (cm) F 一一 理论因子6 参考区间37℃ ， 女 性 ： 1－ 12 岁 &12 岁 37℃ ， 男 性 ： 1－ 12 岁 12－ 15 岁 &25 岁 &750U/L 50－ 136U/L&500U/L 50－ 136U/L &500U/L7.临床意义： ⑴ 肝 胆 系 统 疾 病 ：各 种 肝 内 、肝 外 胆 管 阻 塞 疾 病 ，如 胰 头 癌 ，胆 道 道 结 石 引 起 的 胆 管 阻 塞 、 原 发 性 胆 汁 性 肝 硬 化 、 肝 内 胆 汁 淤 积 等 ， ALP 明 显 升 高 ，且 与 血 清 胆 红 素 升 高 相 平 行 ；累 积 肝 实 质 细 胞 的 肝 胆 疾 病 如 肝 硬 化 、 肝 炎 ， ALP 轻 度 升 高 。⑵ 黄 疸 的 鉴 别 诊 断 ： ALP 和 血 清 胆 红 素 、 转 氨 酶 同 时 测 定 助 于 黄 疸 鉴 别诊断 ① 胆 汁 淤 积 性 黄 疸 ， ALP 和 血 清 胆 红 素 明 显 升 高 ， 转 氨 酶 度 增 高 。 ② 肝 细 胞 性 黄 疸 ，血 清 胆 红 素 中 度 增 加 ，转 氨 酶 活 性 很 高 ，ALP 正 常 或稍高。 ③ 肝 内 局 限 性 胆 道 阻 塞 如 原 发 性 肝 癌 、 转 移 性 肝 癌 、 肝 脓 肿 等 ALP 明 显 增 高 ， ALT 无 明 显 增 高 ， 胆 红 素 大 多 正 常 。 ⑶ 骨 骼 疾 病 ：如 纤 维 性 骨 炎 、佝 偻 病 、骨 软 化 症 、成 骨 肉 瘤 及 骨 折 愈 合 期 ， ALP 升 高 。 ⑷ 生 长 中 儿 童 、 妊 娠 中 晚 期 血 清 ALP 生 理 性 增 高 。 8.附 注 ： ⑴ 方 法 局 限 性 ： 本 试 剂 线 性 上 限 为 500U/L ， 如 样 品 测 定 值 超 过 上 限 时 ， 应 将 样 品 用 0.9％ 氯 化 钠 溶 液 作 稀 释 ， 重 新 测 定 ， 结 果 乘 以 稀释倍数。 ⑵危急值报告：无危急值。 ⑶ 注 意 事 项 : ① 血 清 Z 室 温 25℃ ),ALP 活 性 显 示 轻 度 升 高 .例 如 （ 室 温 Z 6 小 时 ,酶 活 性 约 增 高 1%,Z 1― 4 天 ,酶 活 性 亦 出 现 缓 慢 地 升 高 .冰 冻 血 清 ,ALP 活 性 降 低 ,但 当 血 清 复 温 后 ,酶 活 性 会 慢 慢 恢 复 .质 控 血 清 或 冻 干 质 控 血 清 亦 呈 现 类 似 的 ALP 活 性 升 高 现 象 。 ② 如 果 试 剂 空 白 吸 光 度 ＞ 1.0,应 视 为 过 期 试 剂 ,不 能 再 使 用 . ③ ALP 活 性 与 血 清 在 反 应 液 中 所 占 体 积 分 数 有 关 .已 发 现 当 血 清 体 积 分 数 从 1/26 减 低 到 1/51 时 ，测 出 的 酶 活 性 随 之 增 高 ；但 低 于 1/51 时 ，酶 活 性 没 有进 一 步 增 加 。这 一 效 应 的 原 因 还 不 清 楚 ，可 能 是 因 为 在 较 高 稀 释 度 下 ALP 多 聚 体 解 聚 所 致 。 ④ ALP 能 水 解 多 种 天 然 存 在 的 或 合 成 的 有 机 磷 酸 酯 。在 体 内 ， ALP 的 真 正 底 物 尚 不 清 楚 。ALP 先 天 缺 陷 的 个 体 ，尿 中 大 量 排 出 磷 酸 乙 醇 胺 ，推 测 它 可 能 是 一 种 真 正 的 生 理 性 底 物 。⑤ 在 大 多 数 ALP 测 定 方 法 中 ， 释 放 出 的 磷 酸 醛 基 转 移 给 水 分 子 ， 此 时 ALP 的 酶 促 反 应 属 水 解 类 反 应 。 使 用 某 些 氨 基 醇 缓 冲 液 时 ， ALP 的 催 化 速 率 增 强 。 常 用 于 ALP 测 定 的 缓 冲 液 可 归 类 3 种 :惰 性 型 ， 如 碳 酸 缓 冲 液 ;抑 制 型 ，如 甘 氨 酸 缓 冲 液 ;激 活 型 ，如 AMP、Tris 和 DEA 等 缓 冲 液 。 激 活 型 缓 冲 液 ， 缓 冲 物 质 作 为 酶 的 一 种 底 物 (磷 酸 酰 基 的 受 体 ) 参 与 磷 酸 酸 基 的 移 换 反 应 ，因 此 能 增 进 酶 促 反 应 速 率 。使 用 最 适 浓 度 的 激 活 型 缓 冲 液 时 ， 所 测 的 ALP 活 性 要 比 使 用 惰 性 型 缓 冲 液 (如 碳 酸 盐 缓 冲 液 )时 高 2-6 倍 DEA 的 激 活 作 用 比 AMP 的 激 活 作 用 更 强 。 此 ， 因 用 不 同 缓 冲 液 测 定 ALP 活 性 时 ，其 参 考 值 不 同 。目 前 多 数 试 剂 盒 选 择 AMP 作 为 缓 冲 液 。 9.参 考 文 献 ： 9.1 叶 应 妩 、 王 毓 三 、 申 子 瑜 等 .全 国 临 床 检 验 操 作 规 程 【 第 三 版 】 东 南 大 学 出 版 社 ，
梁 淑 新 、 施 俊 英 . 临 床 检 验 操 作 技 术 系 列 丛 书 生 物 化 学 检 验 分 册 ， 军 事 医 学 出 版 社 ， 2006.郧县中医院检验科生化室作业指导书文件编号：检验科-SH-08版本/修订号：1/0 主题内容血清γ-谷氨酰转酞酶测定生效日期： 第 29 页 共 103 页血清γ-谷氨酰转酞酶测定1实验原理 γ- 谷氨酸转移酶 (γ - GT) 是一种肤转移酶，它能催化谷胱甘肽 或其他含谷氨酸基多肽上的谷氨酸基团 再转移到其他合适受体。血清中γ - GT 主要来自肝脏， 因此各种肝胆系统疾病可引起血清中 γ-GT 活力的增高。 最适 pH 因底物缓冲液种类而异。 甘氨酰甘氨酸(双甘肤)作为酶 反应的受体，可加速 反应的进行。 连续监测法 (L-γ-谷氨酰- 3-羟基-对硝基苯胺为底物)。 γ谷氨酰- 3-羟基-对硝基苯胺和双甘肽在γ- 谷氨酰转肽酶作用下，谷氨酰转移 到双甘肽分子上，同时释放出黄色的2-硝基-5 -氨基苯甲酸，其与γ-谷氨酰转 肤酶活力成正比，通过在 405 nm 处测定 2-硝基-5 -氨基苯甲酸吸光度增高的 速率的变化，可求出γ-谷氨酸转肽酶活力。 γ - 谷 氨 酰 -3-羧 基 -4-硝 基 苯 胺 +甘 氨 酰 甘 氨 酸 氨酰甘氨酰甘氨酸 + 5-氨 基 -2-硝 基 苯 甲 酸 。 γ -GT γ -谷生 成 的 5-氨 基 -2-硝 基 苯 甲 酸 在 405nm 波 长 处 有 吸 收 峰 ， 形 成 其 的 速 率 与 血 清 中 γ -GT 活 性 成 正 比 ，故 通 过 测 定 吸 光 度 增 加 的 速 率 即 可 测 出 γ -GT 的 活 性 。 2.标 本 采 集 与 处 理 ： 样 品 为 血 清 或 经 肝 素 抗 凝 的 血 浆 .溶 血 或 长 时 间 未 分 离 血 细 胞 不 影 响 γ -GT 的 测 定 . 血 清 中 γ -GT 的 活 力 , 室 温 下 或 4℃ 稳 定 7 天 ,在 冷 冻 状 态 下 可 稳 定 2 个 月 。3.实 验 试 剂 及 仪 器 ： 3.1 试 剂 ： 使 用 温 州 东 瓯 津 玛 检 测 试 剂 盒 。 试 剂 组 成 如 下成份含R100mmol/L R100mmol/L R4mmol/L量R1:Tris 缓 冲 液 双甘肽 R2:γ -谷 氨 酰 -3-羧 基 -4-硝 基 苯 胺 3.2 仪 器 及 参 数 ：3.2.1 使 用 凯 美 雅 生 化 分 析 仪 ，具 体 的 操 作 详 见 生 化 分 析 仪 作 业 指 导 书. 3.2.2 分 析 参 数 ：主波长 副波长 反应温度405nm 520nm 37℃分析方法 反应方向 S:R1:R2速率法 向上 20:200： 50延滞时间 读数时间 理论因子60S 150S 14234. 质 量 控 制 ： 在 测 定 每 一 批 标 本 前 先 做 正 常 值 和 异 常 值 来 两 个 水 平 的 质 控 品 ， 以 2S 为 质 控 警 告 限 ， 3S 为 失 控 限 ， 绘 制 质 控 图 ， 判 断是否在控（质控规则见生化室室内质控操作规程） 在控后方 。 可进行标本测定，若失控，查明原因并采取措施。 5.计算方法：ALP(U/L) =ΔA/min×Vt×1000=ΔA/min×F式中: ΔA/min 一一每分钟吸光度变化率； e 一一 6.22 摩尔吸光系数； Vt 一一反应液总体积 (ml)；Vs 一一样品体积 (ml)； d 一一 比色杯光径 (cm) F 一一 理论因子 6 参考区间: 男 性 : 11-50 U/L(37℃ ) 女 性 : 7 -32 U/L(37℃ ) 7.临 床 意 义 : γ -GT 对 各 种 肝 胆 疾 病 均 有 临 床 应 用 价 值 ， 多 由 肝 胆 疾 病均可引起升高，但升高程度不尽相同。 ⑴ 原 发 性 或 转 移 性 肝 癌 ： γ -GT 显 著 升 高 ， 且 其 活 性 与 肿 瘤 大 小 及病情严重程度呈平行关系。 ⑵ 阻 塞 性 黄 疸 ： 肝 内 外 胆 道 阻 塞 时 ， γ -GT 排 泄 受 阻 易 随 胆 汁 返 流 入 血 ， 使 血 中 γ -GT 明 显 升 高 ， 其 升 高 程 度 比 肝 癌 更 明 显 ， 且 与 血 清 胆 红 素 ALP 相 一 致 。 ⑶病毒性肝炎及肝硬化： 炎时坏死区邻近的肝细胞内此酶合成 肝 亢 进 ， 引 起 血 清 γ -GT 升 高 ， 但 上 升 幅 度 明 显 低 于 ALT， 但 在 肝 炎 恢 复 期 ， γ -GT 为 唯 一 的 仍 然 升 高 的 酶 ， 提 示 尚 未 完 全 痊 愈 ， 若 长 期 升 高，有肝坏死倾向。 ⑷ 嗜 酒 者 和 酒 精 性 肝 炎 ： 嗜 酒 者 γ -GT 可 升 高 ； 酒 精 性 肝 炎 硬 化 和 肝 炎 γ -GT 也 会 上 升 。 8.附 注 ： ⑴ 干 扰 因 素 ：苯 巴 比 妥 、苯 妥 英 、戊 巴 比 妥 、二 氯 安 替 比 林 、安 替 比 林 等 能 引 起 GGT 的 升 高 ， 大 量 饮 酒 的 人 GGT 也 升 高 。 ⑵ 方 法 局 限 性 ： 本 试 剂 线 性 上 限 为 300U/L ， 如 样 品 测 定 倍 数 值超 过 上 限 时 ， 应 将 样 品 用 0.9％ 氯 化 钠 溶 液 作 稀 释 ， 重 新 测 定 ， 结 果 乘以稀释。 ⑶危急值报告：无危急值。 ⑷注意事项: ①柠檬酸盐、草酸盐和氟化物抗凝剂含抑制酶活 10%― 15%故 不 宜 用 这 些 抗 凝 剂 。 如 果 试 剂 空 白 吸 光 度 ＞ 1.0,则 应 视 ② 为 过 期 试 剂 ,不 能 再 使 用 .③ 甘 氨 酸 对 GGT 反 应 有 抑 制 作 用 ， 用 的 肝 所 胺 肽 制 剂 中 不 应 有 甘 氨 酸 。 ④ γ -谷 氨 酰 -3-羧 基 -4-硝 基 苯 胺 由 于 分 子 具 有 羟 基 ，因 而 溶 解 度 较 前 述 底 物 为 大 ，容 易 配 制 底 物 溶 液 ，又 没 有 明 显 的 自 然 水 解 ， 所 测 得 的 GGT 活 力 段 较 高 。 因 此 ， 该 底 物 在 临 床 检 验 中 已 被 推 广 应 用 。 由 于 酶 动 力 学 的 复 杂 性 ， 同 时 有 几 个 &最 适 方 法 &被 推 荐 是 不 足 为 奇 的 。 根 据 计 算 机 进 行 &应 答 面 方 法 学 &处 理 ， 在下列范围内的测定条件，均能得到较大的 GGT 活 力 : pH7.8-8.5 ， 双 甘 肽 100- 250 mmol/L , γ -谷 氨 酰 -3-羧 基 -4-硝 基 苯 胺 6.6-10.2mmoVL,Tris -HCl 缓 冲 液 100mmol/L ， 应 液 中 血 清 与 试 反 剂 的 体 积 比 例 为 1:10.用 含 羟 基 底 物 所 测 的 参 考 值 ，要 比 用 不 含 羟 基 底 物 所 测 的 参 考 值 高 许 多 。为 了 两 者 所 测 结 果 相 近 ，便 于 比 较 ，有 些 试剂盒中有意降低含羟基底物的浓度。 9.参 考 文 献 ： 9.1 叶 应 妩 、 王 毓 三 、 申 子 瑜 等 .全 国 临 床 检 验 操 作 规 程 【 第 三 版 】 东 南 大 学 出 版 社 ，
梁 淑 新 、 施 俊 英 . 临 床 检 验 操 作 技 术 系 列 丛 书 生 物 化 学 检 验 分 册 ， 军 事 医 学 出 版 社 ， 2006郧县中医院检验科 主题内容生化室作业指导书文件编号：检验科-SH-09 版本/修订号：1/0 生效日期： 第 33 页 共 103 页血清尿素测定血清尿素测定1.实验原理：尿 素 (urea) 是 体 内 氨 基 酸 分 解 代 谢 的 最 终 产 物 之 一 ， 氨 基 酸 经 脱 氨 基 作 用 生 成 氨 ，与 糖 代 谢 产 生 的 二 氧 化 碳 ，在 肝 脏 经 鸟 氨 酸 循 环 而 合 成 尿 素 ，血 中 尿 素 的 来 源 是 肝 脏 ，而 去 路 主 要 是 通 过 肾 脏随尿排出体外。所以测定血中尿素量可粗略估计肾小球滤过功能。 尿 素 在 脲 酶 催 化 下 水 解 生 成 氨 和 二 氧 化 碳 ,氨 在 γ -酮 戊 二 酸 和 还 原 型 辅 酶 I 存 在 下 ， 经 谷 氨 酸 脱 氢 酶 催 化 生 成 谷 氨 酶 ,同 时 还 原 型 辅 酶 I 被 氧 化 成 氧 化 型 辅 酶 I， 还 原 型 辅 酶 I 在 340nm 有 吸 收 ， 其 吸光度下降速率与待测样品中尿素含量成正比。 尿素 HCO 3 － NH 4 ＋ + α - 酮 戊 二 酸 +NADH GLDH L- 谷 氨 酸 + NAD ＋ + 2H 2 O 脲酶 2 NH 4 ＋ + 2+ H2O 2 标本采集与处理： 样 品 为 血 清 或 经 肝 素 抗 凝 的 血 浆 . 血 清 、 血 浆 室 温 下 最 多 1 天 ； 4～ 8℃ 冷 藏 最 多 5 天 ； -18℃ 冷 冻 保 存 可 长 达 6 个 月 . 3.实验试剂及仪器： 3.1 试 剂 ： 使 用 四 川 迈 克 尿 素 氮 检 测 试 剂 盒 。 其 试 剂 组 成 如 下 成 а -酮 戊 二 酸 二磷酸核苷 谷氨酸脱氢酶 R2:烟 胺 腺 嘌 呤 二 核 苷 酸 脲酶 份 含 量R1:Tris 缓 冲 液120 mmol/L 7.0 mmol/L 0.6 mmol/L ≥ 1KU/L 0.25 mmol/L ≥ 6KU/L3.2 仪 器 及 参 数 ： 3.2.1 使 用 凯 美 雅 生 化 分 析 仪 ,具 体 的 操 作 详 见 生 化 分 析 仪 作 业 指 导 书. 3.2.2 分 析 参 数 ：主波长 副波长340nm 405nm分析方法 反应方向速率法 向下延滞时间 读数时间60S 120S反应温度37℃S:R1:R23:240： 604. 质量控制：在 测 定 每 一 批 标 本 前 先 做 正 常 值 和 异 常 值 来 两 个 水 平 的 质 控 品 ， 以 2S 为 质 控 警 告 限 ,3S 为 失 控 限 ,绘 制 质 控 图 ,判 断 是 否 在 控 （ 质 控 规 则 见 生 化 室 室 内 质 控 操 作 规 程 ） .在 控 后 方 可 进 行 标 本 测 定 ,若 失 控 ， 查 明 原 因 并 采 取 措 施 。5.计 算 方 法 ： 样 本 中 尿 素 的 含 量 (Urea)＝〓C 0△ At----------标 本 管 的 吸 光 度 变 化 ； △ As----------标 准 管 的 吸 光 度 变 化 C 0 ----------- 标 准 液 的 浓 度 ； Δ A==A2--A1； 6 参考区间: 血 清 或 血 浆 ： 1.8～ 7.1 mmol/L7. 临床意义:，尿 素 浓 度 受 多 种 因 素 影 响 ,分 为 生 理 性 因 素 和 病 理 性 因 素两个方面： A.生 理 性 因 素 :高 蛋 白 饮 食 可 引 起 血 清 尿 素 浓 度 开 高 ， 男 性 比 女 性 平 均 高 0.3-0.5mmol/L ， 随 着 年 龄 的 增 长 有 升 高 的 倾 向 . B.病 理 性 因 素 ： (1)肾 前 性 :最 重 要 的 原 因 是 失 水 ,引 起 血 液 浓 缩 ， 肾 血 流 量 减 少 ， 肾 小 球 滤 过 率 降 低 而 使 尿 素 潴 留 .见 于 剧 烈 呕 吐 、 幽 门 梗阻、肠梗阻和长期腹泻、肝肾综合征等。 (2)肾 性 :急 性 肾 小 球 肾 炎 、慢 性 肾 炎 、慢 性 肾 孟 肾 炎 、肾 病 晚 期 、肾 功 能 衰 竭 及 中 毒 性 肾 炎 等 .但 血 尿 素 测 定 不 能 作 为 肾 脏 疾 病 早 期 检 查 指 标 ,但 对 慢 性 肾 衰 ,尤 其 尿 毒 症 ， 其 增 高 的 程 度 与 病 情 严 重 程 度 一致。 ⑶ 肾 后 性 ：见 于 尿 路 梗 阻 ，如 尿 路 结 石 、肿 瘤 、前 列 腺 肿 瘤 和 肥 大 等 。 ⑷ 蛋 白 质 分 解 或 摄 入 过 多 :如 急 性 传 染 病 、 高 热 、 上 消 化 道 大 出 血 、 大 面 积 烧 伤 、严 重 创 伤 、大 手 术 后 和 甲 状 腺 功 能 亢 进 、高 蛋 白 饮 食 等 ， 但血肌酐一般不升高。 血尿素减少较为少见，常表示严重的肝病，如肝炎合并广泛肝坏死。 8.附 注 ： (1)干 扰 因 素 ： ① 在 测 定 过 程 中 ， 各 种 器 材 和 蒸 溜 水 应 无 氨 离 子 污 染 ，否 则 结 果 偏 高 。② 血 氨 升 高 可 使 尿 素 测 定 结 果 偏 高 ，溶 血 标本对测定有正干扰。 ⑵ 方 法 局 限 性 ： 本 试 剂 线 性 上 限 为 35 mmol/L， 如 样 品 测 定 值 超 过 上 限 时 ， 应 将 样 品 用 0.9％ 氯 化 钠 溶 液 作 1:1 稀 释 ， 重 新 测 定 ， 结 果 乘 以 2。 ⑶ 危 急 值 报 告 ： Urea&36 μ mol/L 。 ⑷ 注 意 事 项 : 如 果 试 剂 空 白 吸 光 度 ＜ 1.0 或 变 浑 浊 ,应 视 为 过 期 试 剂 , 不能再使用. 9.参 考 文 献 ： 9.1 叶 应 妩 、 王 毓 三 、 申 子 瑜 等 .全 国 临 床 检 验 操 作 规 程 【 第 三 版 】 东 南 大 学 出 版 社 ，
梁 淑 新 、 俊 英 .临 床 检 验 操 作 技 术 系 列 丛 书 生 物 化 学 检 验 分 册 ， 施 军 事 医 学 出 版 社 ， 2006.郧县中医院检验科 主题内容生化室作业指导书文件编号：检验科-SH-10 版本/修订号：1/0 生效日期：血清肌酐测定第 36 页共 103 页血清肌酐测定（碱性苦味酸法）1.实验原理：肌 酐 由 外 源 性 和 内 源 性 两 类 组 成 。 内 源 性 肌 酐 的 生 成 量 是 相 当 恒 定 的 ，每 天 每 20g 肌 肉 约 代 谢 产 生 1g 肌 酐 。血 液 中 的 肌 酐 主 要 由 肾 小 球 滤 过 排 出 体 外 ,肾 小 管 很 少 分 泌 也 基 本 上 不 吸 收 ， 故 通 常 忽 略 不 计 。 所 以 ， 在 外 源 性 肌 酐 稳 定 的 情 况 下 ,血 液 中 肌 酐 浓 度 可 以 作 为 检 测 肾 小 球 滤 过 功 能 的 指 标 之 一 。当 肾 实 质 损 害 ，肾 小 球 滤 过 率 降 低 到 肾 小 球 滤 过 率 (GFR) 的 临 界 点 后 (GFR 下 降 至 正 常 人 的 1/3 时 )， 血 肌 酐 浓 度 就 会 明 显 上 升 ， 故 测 定 血 肌 酐 浓 度 可 作 为 GFR 受 损 的 指 标 。敏 感 性 较 尿 素 好 ，但 并 非 早 期 诊 断 指 标 。肌 酐 的 化 学 速 率 法 测定是根据肌酐与苦味酸反应， 成橘红色的苦味酸肌酐复合物的拟 生 一 级 反 应 动 力 学 。在 碱 性 反 应 环 境 中 ，样 品 中 的 肌 酐 或 干 扰 物 质 和 苦 味酸的反应速度不同，选择适宜 的速率监测时间，可以提高肌酐测 定的特异性。 肌酐+苦味酸NaOH苦味酸肌酐复合物2.标本采集与处理： 样 品 为 血 清 或 经 肝 素 抗 凝 的 血 浆 . 血 清 、 血 浆 室 温 下 最 多 5 天 ； 冷 藏 最 多 30 天 ； 冷 冻 保 存 可 超 过 30 天 。 3.实验试剂及仪器： 成 份 含 量R1:NaoH 硼砂 R2:苦 味 酸0.30 mmol/L 0.10 mmol/L 49.0 mmol/L3.1 试 剂 ： 使 用 四 川 迈 克 肌 酐 检 测 试 剂 盒 。 其 试 剂 组 成 如 下 3.2 仪 器 及 参 数 ： 3.2.1 使 用 凯 美 雅 生 化 分 析 仪 ,具 体 的 操 作 详 见 生 化 分 析 仪 作 业 指 导 书. 3.2.2 分 析 参 数 ：主波长 副波长 反应温度505nm 600nm 37℃分析方法 反应方向 S:R1:R2两点法 向上 100:500:5 00延滞时间 读数时间20S 60S4. 质量控制：在 测 定 每 一 批 标 本 前 先 做 正 常 值 和 异 常 值 来 两 个 水 平 的 质 控 品 ， 以 2S 为 质 控 警 告 限 ,3S 为 失 控 限 ,绘 制 质 控 图 ,判 断 是 否 在 控 （ 质 控 规 则 见 生 化 室 室 内 质 控 操 作 规 程 ） .在 控 后 方 可 进 行 标 本 测 定 ,若 失 控 ， 查 明 原 因 并 采 取 措 施 。5.计算方法：样 本 中 肌 酐 的 含 量 CREA＝〓C 0△ At----------标 本 管 的 吸 光 度 变 化 ； △ As----------标 准 管 的 吸 光 度 变 化 ； C 0 ----------- 标 准 液 的 浓 度 ；Δ A=A2-A1 6 参考区间: 血 清 或 血 浆 ： 44.0～ 133.0μ mmol/L (男 性 ) 70.0～ 106.0μ mmol/L （ 女 性 ） 7. 临床意义: (1)反 应 GFR 减 退 的 后 期 指 标 ，当 肾 小 球 GFR 功 能 减 退 减 少 至 50%时 ， Scr 仍 可 正 常 ，患 者 Ccr 降 至 正 常 水 平 的 1/3 时 ,Scr 有 明 显 上 升 ，且 上 升 曲 线 斜 率 明 会 陡 然 变 大 ， 此 阶 段 Scr 是 氮 质 血 症 病 情 观 察 和 疗 在 效判断的有效指证。 (2)Scr 日 内 生 理 波 动 在 10%内 ，但 与 个 体 肌 肉 量 有 关 。肌 肉 发 达 者 与 消 瘦 者 Scr 生 理 浓 度 有 明 显 的 差 异 。 娠 期 间 因 生 理 原 因 GFR 可 升 高 ， 妊 但 肌 酐 生 成 生 产 速 率 不 变 ， Scr 因 血 浆 稀 释 .作 用 而 比 正 常 人 低 ， 据 调 查 多 在 35.2～ 52.8μ mmol/L.如 果 孕 妇 Scr&70.4μ mmol/L,应 视 为 升高倾向。 （ 3） 在 正 常 的 肾 血 流 量 下 ， 肌 酐 如 果 升 高 至 176～ 353μ mmol/L， 提 示 为 中 度 至 严 重 的 肾 损 害 。 所以血肌酐对晚期的肾脏疾病临床意义比较大。 尿 素 与 肌 酐 同 时 测 定 更 有 意 义 ，如 果 两 者 同 时 升 高 ，说 明 肾 脏 有 严 重 的损害。 8.附 注 ： (1)干 扰 因 素 ：干 扰 肌 酐 测 定 的 物 质 如 血 中 的 丙 酮 酸 、叶 酸 、葡 萄 糖 、 乙酰乙酸等都能在此反应中呈色， 血清作样品测定时此类物质可占 用 发 色 强 度 的 20%， 此 外 一 些 头 孢 类 药 物 也 可 产 生 正 干 扰 。 根 据 苦 味 酸法发展的出来的动力学方法， 于肌酐和非肌酐色原在反应速度上的 基 差异来避开非特异的干扰。 据干扰物质和苦味酸反应的快慢可以将 根 非 肌 酐 色 原 物 质 分 为 有 两 类 ：一 类 为 快 速 反 应 假 肌 酐 物 质 ，在 与 碱 性 苦 味 酸 混 合 后 20 秒 内 出 现 反 应 。测 定 时 设 Z 20 秒 延 迟 期 ，可 以 减 少 干 扰 。 另 一 类 为 慢 反 应 假 肌 酐 物 质 ， 在 与 碱 性 苦 味 酸 混 合 后 80～ 100 秒 才 开 始 反 应 。 这 样 在 20～ 80 秒 出 现 窗 口 期 ， 此 时 肌 酐 与 苦 味 酸 的 呈 色 占 主 导 的 地 位 。 有 研 究 发 现 窗 口 期 的 上 限 为 60 秒 。 为 了 提 高 速 率 法 的 特 异 性 ， 速 率 法 测 定 时 间 选 择 在 25～ 60 秒 期 间 。 1980 年 对 速 率法进行严格的评价后指出， 率法仍受到 a 酮酸的正干扰和胆红素 速 的负干扰。 ⑵ 方 法 局 限 性 ： 本 试 剂 的 线 性 范 围 可 达 800μ mol/L ， 如 样 品 测 定 值 超 过 上 限 时 ， 应 将 样 品 用 0.9％ 氯 化 钠 溶 液 进 行 稀 释 ， 重 新 测 定 ， 结 果乘以稀释的倍数。 ⑶ 危 急 值 报 告 ： Crea&36 μ mol/L。 ⑷ 注 意 事 项 : 如 果 试 剂 空 白 吸 光 度 &0.200 或 变 浑 浊 , 应 视 为 过 期 试 剂 ,不 能 再 使 用 . 9.参 考 文 献 ： 9.1 叶 应 妩 、 王 毓 三 、 申 子 瑜 等 .全 国 临 床 检 验 操 作 规 程 【 第 三 版 】 东 南 大 学 出 版 社 ，
梁 淑 新 、 俊 英 .临 床 检 验 操 作 技 术 系 列 丛 书 生 物 化 学 检 验 分 册 ， 施 军 事 医 学 出 版 社 ， 2006.郧县中医院检验科 主题内容生化室作业指导书文件编号：检验科-SH-11 版本/修订号：1/0 生效日期： 第 40 页 共 103 页血清尿酸测定血清尿酸测定（尿酸酶-过氧化物酶偶联法）1 实验原理：尿 酸 是 核 酸 中 嘌 呤 分 解 代 谢 的 最 终 产 物 ，其 中 大 部 分 经 肾 小 球 滤 过 排 出 ，在 肾 小 管 近 段 全 部 被 重 吸 收 。人 体 血 中 的 尿 酸 量 与 体 内的核酸的分解代谢速度、肾脏的排泄功能和食物中的核酸量有关。 正 常 成 年 人 血 中 的 尿 酸 含 量 为 2～ 6mg/dL ， 如 果 嘌 呤 代 谢 紊 乱 ， 血 中 的 尿 酸 含 量 超 过 时 ，尿 酸 以 钠 盐 的 形 式 沉 淀 在 关 节 周 围 、软 骨 及 皮 下 ，造 成 关 节 剧 烈 疼 痛 和 皮 下 结 节 ，临 床 上 称 为 通 风 。正 常 人 每 日 尿 液 排 泄 尿 酸 约 210mg/24h， 如 含 量 增 高 可 在 泌 尿 道 沉 淀 而 形 成 结 石 。 尿 酸 酶 氧 化 尿 酸 生 成 尿 囊 素 和 过 氧 化 氢 ，在 过 氧 化 物 酶 催 化 下 ，过 氧 化 氢 使 3， 5-二 氯 二 羟 苯 磺 酸 和 4-氨 基 安 替 比 林 缩 合 成 红 色 醌 类 化 合 物 。 生 成 的 醌 亚 胺 在 520 nm 波长有最大吸收，所产生的颜色强度与血清中尿酸含量成正比，再通过与同样处理的尿酸标准溶液比较， 经过计算可求出血清中尿酸的含量。 尿酸+O2+2H2ONaOH尿囊素+CO2+2H20 2H20+4-氨基安替代比林+2，4，6--三碘-3-羟基苯甲酸GOD醌亚胺+H2O2.标本采集与处理：样 品 为 血 清 或 经 肝 素 抗 凝 的 血 浆 .血 清 、血 浆 在 2～ 8℃ 可 稳 定 3 天 ,在 冰 冻 状 态 下 可 稳 定 6 个 月 . 3.实验试剂及仪器： 3.1 试 剂 ： 使 用 四 川 迈 克 尿 酸 检 测 试 剂 盒 。 其 试 剂 组 成 如 下 成 份 含 ≥ 2KU/L 量R1:4-氨 基 安 替 比 林 过氧化物酶≥ 1mmol/L抗坏血酸氧化酶 R2:尿 酸 酶 ESPAS 3.2 仪 器 及 参 数 ：≥ 1KU/L ≥ 0.5KU/L ≥ 0.5mmol/L3.2.1 使 用 凯 美 雅 生 化 分 析 仪 ,具 体 的 操 作 详 见 生 化 分 析 仪 作 业 指 导 书. 3.2.2 分 析 参 数 ：主波长 副波长 反应温度546nm 660nm 37℃分析方法 反应方向 S:R1:R2终点法 向上 8:225:754. 质量控制：在 测 定 每 一 批 标 本 前 先 做 正 常 值 和 异 常 值 来 两 个 水 平 的 质 控 品 ， 以 2S 为 质 控 警 告 限 ,3S 为 失 控 限 ,绘 制 质 控 图 ,判 断 是 否 在 控 （ 质 控 规 则 见 生 化 室 室 内 质 控 操 作 规 程 ） .在 控 后 方 可 进 行 标 本 测 定 ,若 失 控 ， 查 明 原 因 并 采 取 措 施 。 5.计算方法：样 本 中 尿 酸 的 含 量 UA＝ 〓C 0△ At----------标 本 管 的 吸 光 度 ； △ As----------标 准 管 的 吸 光 度 ； C 0 ----------- 标 准 液 的 浓 度 ； Δ A==A2 -- A1 6 参考区间: 149～ 416μ mmol/L (男 性 ) 89～ 357μ mmol/L （ 女 性 ）7. 临床意义: (1)血 清 尿 酸 测 定 对 痛 风 诊 断 最 有 帮 助 ， 痛 风 患 者 血 清 中 尿 酸 增 高 ， 但有时亦会出现正常尿酸值。 (2)在 核 酸 代 谢 增 加 时 ， 如 白 血 病 、 多 发 性 骨 髓 瘤 、 真 性 红 细 胞 增 多 症等，血清尿酸值常升高。 (3)在 肾 功 能 减 退 时 ， 常 伴 有 血 清 尿 酸 增 加 。 (4)在 氯 仿 中 毒 、 四 氯 化 碳 中 毒 及 铅 中 毒 、 子 痫 、 妊 娠 反 应 及 食 用 富 含核酸的食物等，均可引起尿酸增高。 8.附 注 ： (1)干 扰 因 素 ： ① 遇 到 高 浓 度 的 维 生 素 C 的 标 本 时 ， 可 使 测 定 结 果 偏 低 ，故 不 少 试 剂 盒 中 加 入 抗 环 血 酸 氧 化 酶 ，防 止 维 生 素 C 的 干 扰 。② 尿 酸 的 反 应 偶 联 了 Trinder 反 应 ，能 够 干 扰 其 反 应 的 物 质 ，同 样 使 尿 酸测定受到影响。 ⑵ 方 法 局 限 性 ： 本 试 剂 的 线 性 范 围 可 达 1190μ mol/L， 如 样 品 测 定 值 超 过 上 限 时 ， 应 将 样 品 用 0.9％ 氯 化 钠 溶 液 进 行 稀 释 ， 重 新 测 定 ， 结 果乘以稀释的倍数。 ⑶危急值报告： 。 ⑷ 注 意 事 项 : 如 果 试 剂 在 526nm 波 长 下 空 白 吸 光 度 应 ＜ 0.300 或 变 浑 浊 ,应 视 为 过 期 试 剂 ,不 能 再 使 用 . 9.参 考 文 献 ： 9.1 叶 应 妩 、 王 毓 三 、 申 子 瑜 等 .全 国 临 床 检 验 操 作 规 程 【 第 三 版 】 东 南 大 学 出 版 社 ， 2006.9.2 梁 淑 新 、 俊 英 .临 床 检 验 操 作 技 术 系 列 丛 书 生 物 化 学 检 验 分 册 ， 施 军 事 医 学 出 版 社 ， 2006.郧县中医院检验科 主题内容生化室作业指导书文件编号：检验科-SH-12 版本/修订号：1/0 生效日期： 第 43 页 共 103 页葡萄糖测定葡萄糖测定（氧化酶法)1.实验原理：糖 是 人 体 的 供 能 物 质 。 食 物 中 可 消 化 的 糖 类 主 要 是 淀 粉 (还 有 蔗 糖 、 乳 糖 、 葡 萄 糖 、 果 糖 、 麦 芽 糖 等 ) ， 在 肠 道 消 化 为 单 糖 吸 收 后 经 门 静 脉 人 肝 ， 后 以 葡 萄 糖 (glucose)的 形 式 经 体 循 环 运 到 然 各 组 织 器 官 ，被 细 胞 摄 取 ，以 氧 化 供 能 或 转 为 其 他 物 质 。人 体 内 主 要 的 糖 类 是 糖 原 及 葡 萄 糖 。糖 原 是 人 体 内 糖 类 的 贮 存 形 式 ，葡 萄 糖 是 糖 类的运输形式，显然血糖指人体内血液中的葡萄糖。每个个 体全天 血糖含量随进食、活动、兴奋等情况，时有波动，一般在空腹 时血 糖 较 为 恒 定 ，这 是 由 于 血 糖 的 来 源 和 去 路 保 持 动 态 平 衡 ，所 以 空 腹 血 糖的浓度能够反映糖的代谢水平，一旦糖代谢紊乱，血糖的 来源和 去路失去平衡，表现为高血糖症或低血糖症。 血糖浓度的恒定有重 要 的 生 理 意 义 。如 脑 组 织 和 血 细 胞 没 有 糖 原 储 存 ，必 须 不 断 摄 取 血 液 中 的 葡 萄 糖 来 获 取 能 量 ，若 大 脑 不 能 从 血 液 获 得 葡 萄 糖 ，则 发 生 低 血 糖 昏 迷 。血 糖 浓 度 主 要 通 过 器 官 、激 素 及 神 经 来 调 节 。肝 脏 是 调 节 血 糖 浓 度 最 主 要 的 器 官 ，是 通 过 糖 原 合 成 、糖 的 异 生 和 糖 原 分 解 来 调 节的 ;肾 脏 则 靠 肾 小 管 细 胞 对 原 尿 中 的 葡 萄 糖 重 吸 收 能 力 的 大 小 来 调 节 血 糖 浓 度 。参 与 调 节 血 糖 的 激 素 主 要 有 胰 岛 素 、肾 上 腺 素 、胰 高 血 糖 素 、肾 上 腺 皮 质 激 素 、 生 长 激 素 和 甲 状 腺 素 。除 胰 岛 素 是 降 低 血 糖 外 ，其 他 激 素 均 使 血 糖 升 高 。在 正 常 情 况 下 ，通 过 中 枢 神 经 系 统 的 调 节 ，这 两 类 激 素 相 互 对 抗 ，相 互 制 约 ，使 血 糖 的 补 充 与 消 耗 维 持 动 态 平衡，从而使血糖浓度恒定在一定的范围。1.在葡萄糖氧化酶的作用下，葡萄糖氧化生成过氧化氢和葡萄糖酸 。过 氧 化 氢 在 过 氧 化 酶 的 存 在 下 与 苯 酚 、4-氨 基 安 替 比 林 氧 化 缩 合 成 红 色 的 醌 类 化 合 物 。 此 物 质 在 505nm 处 有 最 大 的 吸 收 峰 ， 其 吸 光 度 值与葡萄糖含量成正比。 Β-D-葡萄糖 + O2 + 2H2OGODD-葡萄糖酸 + H202H20 + 4-氨基安替代比林+苯酚POD醌亚胺+H2O2.标本采集与处理:测 定 标 本 以 草 酸 钾 -氟 化 钠 抗 凝 剂 为 好 ，如 果 标 本 为 血清应尽快将血清与血细胞分离， 免因红细胞仍以无氧酵解分解葡 以 萄糖而致结果偏低。 3.实验试剂及仪器： 3.1 试 剂 ： 使 用 温 州 东 瓯 津 玛 检 测 试 剂 盒 。 其 试 剂 组 成 如 下成 R1:苯份 酚含