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下列植物细胞中结合水的相对含量最大的是
A．休眠的蚕豆子叶细胞
B．玉米的胚乳细胞
C．洋葱根尖分生区的细胞
D．成熟柑橘的果肉细胞
结合水是水与细胞内的其他物质相结合形成的，能与水结合的主要是一些亲水性物质。结合水是细胞结构的主要组成成分，大约占细胞内全部水分的4.5％。由此可见，结合水在细胞内的含量是较少的。题目中提供的四个选项中，蚕豆由于处于休眠状态，其细胞内的自由水大量散失，因此结合水的相对含量就增加了。而其他结构的细胞都是处于正常状态的活细胞，其细胞内自由水的含量都远高于休眠细胞中的含量，而结合水的相对含量就比较低了。
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备课中心教案课件试卷下载《自由水和结合水的转化》_精选优秀范文十篇
自由水和结合水的转化
自由水和结合水的转化
范文一：比例自由水和结合水的自由水和结合水的区分不是绝对的，两者在一定条件下可以相互转化。在不同状态下，自由水与结合水的比例也是变化的。1.水的存在形式与器官形态的关系：心肌、血液和脑总的含水量差不多，脑的含水量甚至超过血液，但心肌呈固态、脑呈半固态，而血液呈液态。为什么会出现这样的问题呢？关键还是各个器官中自由水与结合水的相对比例不同。心肌中，自由水/结合水比值较小，而脑中自由水/结合水比值比心肌大，血液中的这个比值更大。【例题】经研究发现，人体血液中的含水量是83％，而心肌中的含水量是78％，两者相差不大，但两种组织的形态相差甚远，其原因是（
C ）A．血液中含自由水多，脑组织中含结合水多B．血液中含自由水少，脑组织中含结合水少C．血液中自由水与结合水的比例大于脑组织D．脑组织中结合水多于自由水2.水的存在形式与新陈代谢的关系：在新陈代谢旺盛的区域，由于新陈代谢需要水的参与，同时还能够产生水，代谢所需要的物质需要不停的运输来，代谢产物需要不停的运输走。因此，代谢旺盛的地方，自由水相对含量一般比较高，而代谢缓慢的地方，自由水的相对比例则比较低。这一现象也表现在种子中，当我们把种子晒干，种子中减少的主要是自由水，原生质呈半凝固的凝胶状态，生理活性降到最低，种子代谢缓慢，处于休眠状态。而当种子没有被晒干或干种子吸收水分后，自由水增多，新陈代谢就明显加快。【例题】当生物体新陈代谢旺盛，生长迅速时，生物体内（C）A．结合水/自由水的比值与此无关B．结合水/自由水的比值会生高C．结合水/自由水的比值会降低D．结合水/自由水的比值会不变3.水的存在形式与抗逆性的关系：秋冬季节到来时，由于温度降低，植物吸收水的能力下降。同时，植物体内的大分子有机物水解，变成小分子，自由水比例下降，结合水比例升高，使得植物体内的溶液浓度加大，冰点下降，抗寒能力增强。很多富含淀粉的植物（如红薯）在冬季变甜就与此有关。【例题】当严寒的冬季到来时，植物体会通过调整改变自身的一些生理状态以适应环境的变化，其中水的变化是（
B ）A．结合水/自由水的比值与此无关B．结合水/自由水的比值会升高C．结合水/自由水的比值会降低D．结合水/自由水的比值会不变原文地址：
范文二：1结合水和自由水必修一
一 组成生物体的化学成分1 .生物体内水的两种存在形式是什么？2.结合水有什么作用？
3.自由水有什么作用？ 4.总水量、结合水量、自由水量有什么关系？ 5.结合水和自由水是否可以相互转化？
6.在代谢旺盛的细胞中哪种水较多？ 7．在休眠的细胞中哪种水较多？ 8.植物蒸腾作用散失的水是什么水 ？9.质壁分离时从液泡中出来的水是什么水？ 10.无机盐为什么对于生命活动是必不可少的？ 11.磷酸是合成哪些复杂化合物所必需的？ 12.缺铁为什么会导致贫血？13.血钙过低会引起动物抽搐，这说明无机盐的什么作用？ 14.无机盐离子为什么对于维持细胞的形态有重要作用？ 15.糖类的元素组成有哪些？
16.糖类可分为哪几大类？ 17．重要的单糖有哪些？作用是什么？18甘蔗和甜菜中含有哪种重要的二糖？
19.发芽和谷粒中含有哪种重要的二糖？ 20.动物的乳汁中含有哪种重要的二糖？21.水稻、小麦等谷类作物的种子中含有的多糖是什么？ 22植物细胞壁中的多糖是什么？（是否包括果胶？） 23肝脏和肌肉细胞中的多糖是什么？ 24糖类的主要作用是什么？25.葡萄糖氧化分解时放出的能量能否用于生命活动？ 26.脂类的元素组成有哪些？
27.脂类包括哪几大类？ 28.生物体内储存能量的脂类物质是什么？它还有什么作用？29.磷脂有什么作用？
30.固醇类包括哪些物质？
31.固醇类物质有何作用？32.我们学过的哪种细胞结构中没有蛋白质？（细胞壁）33.蛋白质的基本单位是什么？
34.蛋白质的基本单位有多少种？ 35.蛋白质的化学结构是什么？36.氨基酸的共同特点是什么？（结构通式）37.甘氨酸的R基是什么？
38.丙氨酸的R基是什么？ 39.什么叫缩合？
40.什么叫肽键？（化学式）41.什么叫二肽？（形成二肽的反应式）
42.什么叫多肽？43.蛋白质的多样性是由哪些因素决定的？
44.蛋白质多样性的根本原因是什么？45.蛋白质的功能是什么？
46.我们学过的哪些激素是蛋白质？ 47.核酸的元素组成有哪些？核酸的基本单位是什么？ 48．核酸分为哪些类型？
49. 核酸的功能是什么？ 50. DNA的基本单位是什么？由哪些分子组成？结构特点？ 51.RNA的基本单位是什么？由哪些分子组成？结构特点？52.DNA在真核细胞中如何分布？
53.RNA在真核细胞中如何分布？ 54.DNA在原核细胞中如何分布？
55.DNA在噬菌体中如何分布？1结合水和自由水2.结合水：细胞结构的重要组成成分 3.自由水：（1）细胞内良好溶剂
（2）运输养料和废物（3）许多生化反应有水的参与4.总水量=结合水量+自由水量。例如：心肌和血液 5.自由水与结合水的关系：自由水和结合水可相互转化 6.代谢活动旺盛，细胞内 7.休眠的细胞中，8.
9. 自由水 10（1）细胞中许多有机物的重要组成成分（2）维持细胞和生物体的生命活动有重要作用
（3）维持细胞的酸碱平衡
（4）维持细胞的渗透压 11.DNA、RNA、ATP12.Fe是血红蛋白的组成成分，缺Fe，血红蛋白减少，红细胞减少 13.维持生命活动 14.维持细胞的渗透压26—3133.氨基酸是组成蛋白质的基本单位34.在生物体中组成蛋白质的氨基酸约有20种，有8种氨基酸是人体不能合成的； 35.氨基酸二肽三肽多肽多肽链一条或若干条多肽链盘曲折叠蛋白质36.
∣（氨基） NH2—C—COOH（羧基）
∣R（侧链基团） 38.丙氨酸R基：—CH3 39. 缩合：一个氨基酸分子的氨基（—NH2）和另一个氨基酸分子的羧基（—COOH）相连接，同时失去一分子的水。40.连接两个氨基酸分子的化学键叫做肽键（—NH—CO—）41.
∣ ║ ∣NH2—C—COOH + NH2—C—1—C—C—N—C—R2
COOH 由两个氨基酸分子缩合而成的化合物42.由多个氨基酸分子缩合而成的化合物，含有多个肽链的化合物43.组成蛋白质的氨基酸数目、种类、排列顺序不同的肽链折叠形成的空间结构不同。44.DNA分子的多样性45.①结构蛋白，如肌肉、头发、蛛丝等；②催化作用，唾液淀粉酶、胃蛋白酶等绝大多数酶；
③运输作用，如血红蛋白；
④调节作用，如胰岛素等；
⑤免疫作用，如抗体。46.胰岛素，生长激素 47—51核酸是细胞内携带遗传信息的物质，在生物体的遗传，变异和蛋白质的生物合成中具有重要的作用。 样的，DNA分子具有多样性。②每个DNA分子中4种脱氧核苷酸的比率和排列顺序数特定的，其特定的脱氧核苷酸排列顺序代表特定的遗传信息。③只含有RNA一种核酸的是病毒，其核糖核苷酸排列顺序也具有多样性和特异性。实验观察DNA和RNA在细胞中的分布（1）实验原理：DNA主要分布在细胞核内，RNA主要存在于细胞质中。甲基绿和吡罗红两种染色剂就对DNA和RNA的亲和力不同，甲基绿使DNA呈现绿色，吡罗红使RNA呈现红色。盐酸能改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞，同时使染色体中的DNA与蛋白质分离，有利于DNA与染色剂结合。
（2）实验结论：DNA主要分布在细胞核中，RNA主要分布在细胞质中。 核苷酸是核酸的基本组成单位即组成核酸分子的单体，一个核苷酸是由一分子含氮碱基、一分子五碳糖和一分子磷酸组成。根据五碳糖的不同，可以将核苷酸分为脱氧核苷酸和核糖核苷酸52.主要分布咋细胞核，少量分布在细胞质（叶绿体、线粒体）53.主要分布在细胞质 54.拟核、质粒 55.噬菌体中间56.RNA种类：mRNA、tRNA、rRNA阅读详情：
范文三：第一节自由水和结合水第一节
自由水和结合水人体MRI主要对象实际上是水分子，人体组织中80％的水存在于细胞内，15％存在于组织细胞外间隙，5％存在于血浆中。MRI对组织中水的变化非常敏感，因此有必要研究水的MRI信号特点。人体组织中的水有自由水和结合水之分。所谓自由水是指分子游离而不与其他组织分子相结合的水，自由水的自然运动频率很高，明显高于质子的进动频率。而在大分子蛋白质周围也依附着一些水分子，形成水化层，这些水分子被称为结合水，结合水由于依附于大分子，其自然运动频率将明显降低而更接近于质子的进动频率。因此自由水的T1值很长，而结合水可使组织的T1值缩短。组织中如自由水的成份增加，在T1WI将表现为信号强度降低，如脑水肿等。如果是结合水的比例增加，在T1WI上则可表现为信号强度相对增加，甚至表现为高信号，如含粘液成份的囊肿、脓肿中粘稠的脓液等。脓肿或有些肿瘤如星形细胞瘤，因为囊液或脓液中除自由水外还有结合水存在，因此在T1WI上其信号强度将不同程度高于基本由自由水构成的脑脊液。阅读详情：
范文四：自由水与结合水的差别自由水与结合水的差别（两方面）结合水，又称为束缚水、固定水，通常是指存在于溶质或其他非水组分附近的、与溶质分子之间通过化学键结合的那一部分水。依据它们的结合强度差异，又将结合水分为构成水、临近水和多层水。自由水，又称相体水，是指没有被非水物质化学结合的水。自由水可分为三类：滞化水、毛细管和自由流动水。水分活度的定义在比较高于和低于冻结温度的水分活度时应注意三个重要的区别。水分吸附等温线对于获取以下信息是十分有益的：①在浓缩和干燥过程中，样品除去水分的难易程度与水分活度有关；②配置混合食品必须避免水分在配料之间的转移；③测定包装材料的阻湿性；④测定什么样的水分含量能够抑制微生物的生长，可评定食品的生物稳定性； ⑤预测食品的化学和物理稳定性与水分含量的关系。碳水化合物它们的经验式都符合通式 CmH2nOn即Cm(H2O)n，后来发现一些不属于碳水化合物的分子也有同样的元素组成比例，如乙酸C2H4O2，而一些碳水化合物如脱氧核糖（C5H10O4）则不符合这些比例。如何判定手性碳原子？如何区分 а—∕β—型D—∕L—型旋光性定义？糖溶液的变旋现象？如何判定还原性糖？非还原糖？直链淀粉和支链淀粉构成的主要区别？淀粉的糊化和老化的机理？举例说明。各种褐变是不是一种褐变？举例：如红烧肉和面包。褐变分为非酶褐变和酶促褐变，各种褐变的过程？防止非酶褐变的方法？什么叫同质多晶？油脂的乳化特性？O∕W W∕O的区分？举例。脂类对食品品质的影响？水解反应自动氧化的定义 举例。过氧化值的定义？抑制自动氧化的方法？油脂的精炼过程？脂质与可塑性的关系？脂质对风味的影响？膳食脂类在食品中其他重要的作用？区分20个氨基酸从极性﹑非极性，正电荷、负电荷四个方面。蛋白质一级结构是指由共价键结合在一起的氨基酸残基的排列顺序。蛋白质的二级结构是多肽链某些片段的氨基酸残基周期性的空间排列，它不包括与其他链段之间的相互关系和侧链构象。蛋白质的主要二级结构是螺旋结构、β结构和在聚脯氨酸或胶原蛋白中发现的其他结构，还有无规卷曲集结构。螺旋结构、β—折叠结构？蛋白质的三级结构：当含有二级结构的线性蛋白质进一步折叠成紧密的三维形式，便形成了蛋白质的三级结构。蛋白质的四级结构：是指含有多于一条多肽链蛋白质分子的空间排列。蛋白质的四级结构是具有三级结构的蛋白质亚单位通过非共价键缔合的结果。血红蛋白分子由四条多肽链缔合而成，它是蛋白质四级结构的典型实例。肌红蛋白就只有一条具有三级结构的多肽链，而没有四级结构。蛋白质的沉淀作用定义？蛋白质胶体溶液的稳定因素主要是由于蛋白质的水化作用和同一ＰＨ条件下所带的同性电荷相互排斥的作用。如果利用外界条件，设法破坏蛋白质胶体溶液的这两种稳定因素，那么它就会失去稳定性，蛋白质就会凝集沉淀而析出。这种作用称为蛋白质的沉淀作用。 影响蛋白质沉淀作用的因素？①盐析②有机溶剂沉淀反应③重金属沉淀反应④生物碱沉淀剂的沉淀反应蛋白质的变性作用定义？蛋白质的变性是指在各种物理和化学因素处理时，其构象会发生不同程度的改变。蛋白质的变性只涉及二级、三级或四级结构的改变，并不伴随一级结构中肽键的断裂，其根本原因是蛋白质二级和三级结构确定的分子构象是不稳定的。导致蛋白质变性的因素？物理因素：温度、机械处理、液压、辐射、界面。化学因素：酸和碱、金属、有机溶剂、表面活性剂、有机化合物水溶液。蛋白质改性的方法？见练习本Ｖｃ、ＶＡ、Ｂ族，的活性形式和生理形式？常量元素的定义：每天需要量在１００ｍｇ以上者，在人体含量较多的有钙、镁、钾、纳、硫、磷、氯等七种元素，占人体总灰分的６０％~８０％。微量元素的定义：每天需要量仅数毫克者，有铁、碘、铜、锌、硒、锰、铬、钼、镍、钒、锡、氟、硅等近二十种元素。生物利用率：可以定义为代谢过程中可被利用的营养素的量与摄入的营养素的量额比值。 矿物质缺乏的症状？矿物质的生理功能：①矿物质是构成人体组织的重要原料。②矿物质能维持渗透压，对体液移动和储留过程起重要作用，使组织保留一定量的水分，并保持平衡。③矿物质能维持体液的中和性，保持酸碱平衡。④矿物质能维持神经肌肉兴奋性。⑤矿物质参与酶的构成。⑥矿物质是酶的活化剂。区分食品酸碱性：①碱性食品：大豆、甘薯、马铃薯、萝卜、芜菁、胡萝卜、洋葱、番茄、苹果、柑橘类、红砂糖、海带、牛乳、血液。②酸性食品；精米、糙米、大麦、面粉、燕麦粥、玉米、精米饭、白面包、蚕豆、鸡蛋、肉类、鱼类、干酪。酶的辅助因子定义：从酶的组成来看，有些酶仅由蛋白质或核糖核酸组成，这种酶称为单成分酶。而有些酶除了蛋白质或核糖核酸以外，还需要有其他非生物大分子，这种酶称为双成分酶。蛋白类酶中的纯蛋白质部分称为酶蛋白。核酸类酶中的核糖核酸部分称为酶ＲＮＡ。其他非生物大分子部分称为酶的辅助因子。 双成分酶需要有辅助因子存在才具有催化功能。酶活力单位：每１ｍｉｎ催化１μmol的底物转化为产物的酶量定义为１个酶活力单位。 Km、Vmax的意义？从酶促反应动力学角度解释竞争性抑制作用、非竞争性抑制作用及反竞争性抑制作用。（见练习本）固定化酶是指在一定空间内呈闭锁状态存在的酶，能连续的进行反应，反应后的酶可以回收重复使用。酶固定化的方法：非共价结合法、化学结合法、包埋法。酶对食品品质的影响：①对颜色的影响②对风味的影响③对质地的影响④对营养价值的影响酶促褐变的机理？酶促褐变的控制？（见练习本）发色基团：是一类在紫外线及可见光区域内能产生强烈吸收的原子团。助色基团：这些基团单独存在并不在紫外及可见光区内产生吸收，但与发色基团连接在一起时，能使发色基团的吸收波段向长波方向移动，这样的基团称为助色基团。 叶绿素a中含有Mg防止叶绿素损失的方法有下面几种：①中和酸②高温瞬时处理③将叶绿素转化为脱植醇叶绿素④绿色再生看p257页类胡萝卜素在人和其他动物中主要是作为维生素A的前体物质。相乘作用：有时一种物质的味感会因为另一物感的存在而显著加强。消杀作用：一种物质减弱或抑制另一种物质味感的现象。变调作用：有时两种物质的相互影响甚至会使味感改变。疲劳作用：当长时间受到某味感物的刺激后，再吃相同的味感物质时，会感到味感强度下降。香气理论值举例果蔬香气形成途径：举例①果蔬体内生物合成。②前处理过程酶直接或间接催化。③不同加工处理与贮藏过程的酶与非酶作用。食品香气调控的方法：①酶调控食品香气的方法。②微生物②调控食品的方法。③稳定和掩蔽香气的方法。④增强食品香气的方法。食品分离方法：蒸馏法、溶剂萃取法、吹扫—捕集法、超临界流体萃取法、固相微萃取法、全蒸发法和分子蒸馏法等。食品鉴定方法：气相—质谱色谱联用仪（GC—MS）法、红外光谱法、核磁共振法、等。 食品中有害成分的分布阅读详情：
范文五：C.结合水与自由水的比值会降低;C．结合水与自由水的比值会降低；
D．结合水与自由水的比值不变19．生物大分子在生物体生命活动中具有重要的作用。碳原子本身的化学性质，使它能够通过化学键连接成链状或环状，从而形成生物大分子。以上事实可以说明（
）①碳元素参与生物体内所有化合物的组成②地球上的生命是在碳元素的基础上建立起来的③碳元素是各种大分子化合物中数量最多的元素④碳元素是组成生物体有机化合物的最基本元素A．②③④
D．①②④20．氨基酸自动分析仪测定几种肽类化合物的氨基酸数目如下表：肽类化合物①②③④⑤⑥名称催产素牛加压素血管舒张素平滑肌舒张素猪促黑色素细胞激素人促黑色素细胞激素氨基酸数目9个9个9个10个13个22个据表格分析，可以归纳以下几点结论，其中不正确的是（
）A．表中①②③的氨基酸数目虽然相同，但其生理作用彼此不同B．表中③与④、⑤与⑥虽然功能相似，但各具专一性C．⑥中常见的氨基酸最多22种D．假如构成这六类化合物的每一种氨基酸的平均相对分子质量均为m，则⑤的相对分子质量比④的相对分子质量多21．下列对生物体中有关化合物的鉴定实验不正确的是(
)选项鉴定对象试剂颜色水浴加热生物材料A淀粉碘液蓝色无脱色的材料B还原糖斐林试剂砖红色需要含糖量高的白色植物组织C蛋白质双缩脲试剂紫色不需要豆浆、牛奶、鸡蛋清D脂肪苏丹Ⅲ染液橘黄色不需要花生油22．若以鸡蛋蛋白液为材料进行蛋白质鉴定实验，发现蛋白液与双缩脲试剂发生反应后会粘固在试管壁上。下列关于这一现象形成原因的描述中正确的是（
）A．鸡蛋蛋白液稀释不够，搅拌不匀B．只添加了双缩脲试剂A，未添加双缩脲试剂BC．鸡蛋蛋白液不是合适的实验材料D．蛋白液与双缩脲试剂的反应时间不够长23.用甲基绿吡罗红染液对人口腔上皮细胞进行染色，结果发现细胞核呈绿色，细胞质呈红色。下列解释中正确的是（
）A．甲基绿、吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力相同B．细胞核由DNA构成，细胞质由RNA构成C．真核细胞中，DNA不分布在细胞质基质中，RNA不分布在细胞核中D．该实验的结果反映了DNA和RNA在真核细胞中的分布状态24.下列是有关显微镜使用的叙述，前一项是操作，后一项是目的，其中正确的是（
）A．转动转换器——换用不同放大倍数的目镜B．调节细准焦螺旋——调节视野亮度C．调节光圈——调节视野的大小D．调节反光镜——调节视野的亮度阅读详情：
范文六：由三价铁和水催化酰胺的转酰胺作用由三价铁和水催化酰胺的转酰胺作用摘要：在此主要描述脂肪胺和芳香胺（一级和二级）和一些一级，二级，三级酰胺之间的高效转化。该反应在多少量的不同三价铁水合盐存在下进行，反应结果表明水的存在是至关重要的。这一方法学也可应用于尿素和邻苯二甲酰亚胺，以此证明该反应广泛且多样的底物范围。该反应的实例是合成名称的分子内应用，该物质是地尔硫卓及其结构相关药物的双环核心。提出这个解释水作用的合理机理是基于对由过渡金属如铜和铝催化的转酰胺反应的实验观察和之前的机理构想。该方法学对其他已有方法有明显改善。该反应可以在空气中进行，使用。引用氨基存在于大量自然存在的复杂结构中，比如多肽、蛋白质、生物碱。而且，酰胺在有机合成中是极其重要的构筑体。对于许多重要化合物，包括医药，农药和有机材料，他们作为先驱者。我们掌握了许多合成酰胺的方法，这些方法在文献中也有记载，除了一些特殊的人名反应，还包括羧酸衍生物（除酰胺）和胺类或氨反应，腈的水合作用，胺和醛或醇反应。然而，由于酰胺羰基的弱亲电特性，与亲核试剂的反应通常需要强烈的反应条件，使转酰胺反应成为非典型合成酰胺的方法。
酰胺的胺基交换是一个概念简单但是罕见的有机转换，主要由于酰胺温和的反应条件。一些文献报道了最新的聪明的转酰胺反应，包括其他用多相和均相催化。然而，即使这些方法有效，这些方法也存在一些特定的实验问题。比如？。在该论文的准备期间，我们发表了第一个由三价铁催化的转酰胺反应。然而，该方法限制使用一级酰胺和一级胺，至少使用一种液体试剂溶解反应混合物，否则，试剂不能接触到多孔固体催化剂。由于受到一些出乎意料结果的启发，我们因此提出一种高效，高选择，实验简便，易于操作的转酰胺方法。另外，该方法可用邻苯二甲酰亚胺制备一级胺，对于对称和非对称尿素的构造，该方法可能用于有机催化剂的合成。结果与讨论：在我们用斯克洛浦法合成喹啉的研究中，为了避免使用路线一中的硝基苯，我们探索使用了许多不同的氧化剂。当我们希望从硫酸盐和氧化剂中取得联合效果，我们的第一选择是硫酸铁。奇怪的是，一个小时之后，苯胺已被完全消耗，但是产物是N-苯基甲酰胺。路线一：用DMF处理，苯胺意料之外的甲酰化。甘油 B(OH)3
FeSO4H2SO4
回流甘油 B(OH)3
FeSO4H2SO4DMF
回流这一偶然的结果促使我们小心地研究转酰胺反应。文献记载硼酸作为转酰胺反应的催化剂，因此，我们决定完成同样的反应，却避免使用甘油，硫酸，硫酸铁。回流三天之后，只有部分的苯胺得以转化（表一）。因此，我们用30mol %的硫酸铁替代硼酸。反应8小时之后，我们观察到完全的转化，并且甲酰化产物的产率达60%。表1：催化剂的确定条件DMF
60 虽然产物由TLC检测，但是转化量非常少。这一初步的结果表明三价铁有助于转酰胺反应的发生。然而，甘油中硫酸铁，硼酸，硫酸的结合是更有效的催化体系。基于以上结果，我们决定使用其他酰胺作为反应物而不是溶剂，使用其他三价铁盐，观察该反应是否发生。相应地，在六水合三氯化铁存在下，我们完成了苯胺和反应活性高的甲酰胺之间的反应。该反应采用不同溶剂以确定最佳反应条件。表二的结果表明，该反应采用任何三价铁盐都能作用，一级酰胺效果更佳。关于溶剂方面，有一点是很明确的，就反应时间而言，芳香族的非极性溶剂可以达到更好的效果。尽管如此，如果必要的话（由于反应试剂的溶解性），该反应可以在极性质子溶剂中进行（序号7），极性非质子溶剂，比如乙腈（序号2），以及未失活的醚类（序号2），但是长时间的反应是必需的。使用高沸点的溶剂所得产物产率很低，也会产生一些未确定的极性产物（序号6和8）。序号3和5表明在反应过程中水扮演重要的角色，并且短时间内，对于产物的完全转化，水的存在是必要的。在第一个实验中（路线一中的第二个反应），甘油和硫酸的存在确保水的存在。因此，我们决定用水合氯化铁和未经纯化的商业甲苯。 表2：最佳反应溶剂序
1,2-二氯乙烷
80所有这些实验都是使用5mol %的催化剂，使用2和1mol %催化剂也达很好的效果，但是反应时间会长一点。？这一反应使用无水甲苯和无水氯化铁。最佳过程的另一步是找到最佳的三价铁来源。相应地，我们决定使用一些活性弱的酰胺（乙酰胺）和一种脂肪族的伯胺（苄胺）反应。因为文献中通常将该反应描述为更有挑战性的转酰胺反应。表三说明，水合硝酸铁和氯化铁（序号1和2）所得产率更，所需反应时间更短。然而，当使用硝酸铁时，产物易纯化。因此，我们决定在随后的研究中使用水合硝酸铁。表3：转酰胺反应中最佳三价铁盐的确定序
Fe(NO3)3·9H2O
FeCl3·9H2O
NDbb反应混合物中加入aA 30 mol %的水。反应产物不能通过原料混合物的1H NMR检测。但是，通过TLC分析可见。转酰胺和其他交换反应是平衡反应，需要一个驱动力推动反应朝目标产物进行。以上例子表明，在反应过程中，低沸点的胺或氨交换并释放，这些物质的释放促进平衡并使得最初原料完全转化。当我们使用能产生大量液体胺的酰胺，人们预想反应试剂中一种物质过量是必需的。关于转酰胺过程中三价铁使用的报告中提到，将酰胺和胺的摩尔比从1:1.1变为1.1:1会造成产率下降。在我们的实验中，无论过量的酰胺还是过量的胺，都不会对产率产生较大的影响（详见表4和表5）。然而，大大过量的原料会缩短反应时间。化学计量的反应试剂仅用于同高活性酰胺的反应，否则，反应时间太长，产率太低（详见表5的序号1和6）。为缩短反应时间，我们决定使用1.7当量的酰胺和1当量的胺。虽然酰胺通常比胺昂贵，由于当地立法，酰胺比胺更易获得。因此，我们通常使用过量的酰胺。实验在氩气保护中进行证明了氧气对于反应时间和反应产率没有影响，也不会参与反应过程。表4：酰胺和胺的最佳摩尔比选择序
胺的含量（当量）
酰胺的含量（当量）
3.5 a所有产物的产率都大于98%，经纯化和确定纯度后，这些物质通过1H NMR得以确定。b在氩气保护下反应时间和产率都无改变。表5：苄胺和不同酰胺的反应产物序 号
时 间（h）
产 率(%)这些产物的a产率是在化学计量的反应试剂存在下反应6天得到的。那些产物的b产率和时间是使用1.7当量的酰胺和1.0当量的胺反应得到的.在这一阶段，我们想要证明这类反应的普遍性。因此，我们在甲苯中加入5 mol % Fe(NO3)3·9H2O（详见表2，表3），1.0当量的苄胺，1.7当量的酰胺。如表5所示，在该反应条件下，所有酰胺都很活泼。使用更加活泼的一级酰胺，甲酰胺（序号2），2小时后，可得到定量的甲酰化产物。相反，使用活性较低的苄胺（序号1）需要38小时得到产率为66%的离析纯物质。当使用过量的胺时，产率和时间都差不多。当使用化学计量的反应试剂，产率会略微降低。大概是因为除了释放的胺的蒸发，没有其他驱动力促使达到化学平衡。二级胺（序号3）和三级胺，DMF(序号4)活性相当。因为N,N-Methylenediacetamide可以从乙酰胺11大量制备，故我们可以选择使用N,N-Methylenediacetamide。尿素的活性普遍比酰胺低，通过上述所有转酰胺方法也可以得到高产率的物质。对于该转酰胺反应，只有Cu(AcO)2才能起催化作用。值得强调的一点是，邻苯二甲酰亚胺同样很活泼，这一结果正如文献报道一样，代表一种保护伯胺的有效方法。如表2和表5，作为甲酰化方法，这一方法学是很有吸引力的。表6代表芳香族和脂肪族的一级和二级胺甲酰化的反应结果。芳香族的伯胺（形成化合物3,13a和13b）和芳杂环的伯胺（形成化合物13d和13e）也可以反应得很好。一个特殊的反应是用邻氨基苯硫醇作亲核试剂合成化合物13c。奇怪的是，所得的产物是苯并噻唑（83%），表明最初的甲酰化产物已经脱水生成单独的杂环。正如预料一样，无阻碍的二级胺极易发生甲酰化作用（生成13f, 13g, 13h, 和13i）。 然而，使用有阻碍的胺，如二环己基胺，会造成产率(化合物13j)略微下降。获得化合物13k的反应表明在醇存在时对胺表现出完全选择性。游离的氨基酸不会发生反应，然而，优先的酯化反应和使用1.0当量能产生游离酯的三乙胺都能得到期望的高产率甲酰化产物（化合物13l和13m)。就反应时间而言，使用乙酰胺的乙酰化反应稍微不那么有效，这一方法对于同各种各样的胺的反应仍然是有效的，同样也能得到良好收益（表7）。根据文献，以金属为中心和芳香酰胺为酰胺配体的配合物比那些由脂肪族酰胺形成的配合物更稳定。先不讨论其稳定性，有文献已经报道了关于使用均相过渡金属的转酰胺反应，使用芳香胺时产率仅达到大约30%9j。在我们的实验中，我们使用伯胺（表5序号1）和联氨（路线二）得到产率良好的产物。但是，使用二级胺时，所得产物的产率极低。虽然人们已经证明这一方法的普遍性，但是一些问题仍然是未知的。能够使用相对分子质量更大的酰胺吗？很明显，当一些气体胺产生，则很容易促进反应平衡。然而，为了使这一反应更通用和普遍，我们需要证明当更大的液态胺发生交换时，这类催化剂仍然起作用。因此，我们决定探究甲酰吡咯烷(13f)和苄胺（5）的反应。为了促使平衡移动，我们使用过量胺（1.7当量）。令人满意的是，我们分离得到了收益良好的目标产物（路线三）。基于表5的结果，我们决定用邻苯二甲酰亚胺保护伯胺来研究该类反应。当需要双官能团的胺且必须保护一级氮时，该类反应是极其有用的。例如，对于乙醇胺的情况，有文献报道，使用摩尔比为1:1的邻苯二甲酸酐和胺可得到产物的产率大约为85%。在我们的实验中，我们使用便宜的邻苯二甲酰亚胺得到收益为95%的目标产物20a(表8)，它也可以同含支链的胺（化合物20b）,含氮的胺（化合物20c），和氨基酸酯（化合物20d）反应。表6：使用三价铁，胺的甲酰化。使用aDMF做甲酰化试剂。因为底物在甲苯中的溶解性差，故该反应在CH3CN中进行。我们正在探究用该反应合成对称和非对称脲。相比于其他转酰胺反应，尿素同一级芳胺和脂肪伯胺的反应能取得极好的结果（表4, 序号5和化合物 22a)。奇怪的是，即使存在大大过量的胺或大量的催化剂，尿素同二级脂肪胺反应只生成单取代产物22c。使用该方案利用一锅法合成非对称脲，生成产物22c。在这种情况下，我们加入1.3当量的哌啶和1.0当量的尿素，当根据TLC检测到反应完成后，我们又加入1.0当量的苄胺和5 mol %额外的催化剂。有趣的是，首先尿素同伯胺的反应得到相同产率的非对称胺（表9）。表7：胺同乙酰胺和三价铁的乙酰化反应a该反应在对二甲苯中进行。最后，我们决定利用该反应使2-aminothiophenol2-氨基硫代苯酚（23）和丙烯酰胺（24）发生分子内反应。两组分的直接反应得到产率仅为11%的杂环化合物26。然而，产率为14%的the open substrate（迈克尔加成的产物）25孤立存在。这一结果表明含硫的亲核试剂的迈克尔加成反应比转酰胺反应快。根据相应的文献报告，由三价铁诱导，硫和氮通过迈克尔加成相互反应。然而，任何由氮加成生成的产物都不是独立存在的。路线二：苯甲酰胺和联氨的转酰胺反应。路线三：造成这一反常结果的因素主要有两个。第一，在该反应条件下，2-氨基硫代苯酚(23)不稳定。三价铁的催化使之在空气中被氧化。然而，当我们将2-氨基硫代苯酚和三价铁盐混合时，我们无法鉴别产物。第二，在该条件下，丙烯酰胺早已聚合。为了解决这些问题并在分子内应用我们的方法，我们决定使用已知方法诱导硫亲核试剂和丙烯酰胺发生迈克尔加成，因此要避免聚合，我们能分离出产率为77%的额外产物。通过该方法，我们避免了氧化问题。正如预料的一样，转酰胺反应是成功的，使用10 mol %的三价铁，可以分离48%的杂环产物26。 现在存在一种合成地尔硫卓及其类似物的可能办法。该反应的机理尚未阐明，然而，我们提出了一种机理路线，该路线基于Stahl及其合作者的前期研究。Only one-third of the iron coordination sphere is shown for clarity.阅读详情：
范文七：自由水和束缚水测定植物组织中自由水和束缚水含量的测定植物组织中的水分以自由水和束缚水两种不同的状态存在。自由水与束缚水含量的高低与植物的生长及抗性有密切关系。自由水／束缚水比值高时，植物组织或器官的代谢活动旺盛，生长也较快，抗逆性较弱；反之，则生长较缓慢，但抗性较强。因此，自由水和束缚水的相对含量可以作为植物组织代谢活动及抗逆性强弱的重要指标。一、原理自由水未被细胞原生质胶体颗粒吸附而可以自由移动、蒸发和结冰，也可以作为溶剂。束缚水则被细胞原生质胶体颗粒吸附而不易移动，因而不易被夺取，也不能作为溶剂。基于上述特点以及水分依据水势差而移动的原理，将植物组织浸入高浓度（低水势）的糖溶液中一定时间后，自由水可全部扩散到糖液中，组织中便留下束缚水。自由水扩散到糖液后（相当于增加了溶液中溶剂）便增加了糖液的重量，同时降低了糖液的浓度。测定此降低了的糖液的浓度，再根据原先已知的高浓度糖液的浓度及重量，可求出浓度降低了的糖液的重量。用浓度降低了的糖液的重量减去原来高浓度糖液的重量，即为植物组织中的自由水的重量（即扩散到高浓度糖液中的水的重量）。最后，用同样的植物组织的总含水量减去此自由水的含量即是植物组织中束缚水的含量。二、试剂与仪器设备（一）材料白菜叶片（二）试剂重量百分浓度为 60 ％～ 65 ％的蔗糖溶液：用托盘天平称取蔗糖 60 ～ 65 g ，置于烧杯中，加蒸馏水 40 ～ 35 g ，使溶液总重量为 100 g ，溶解后备用。（三）仪器设备测糖仪，分析天平或电子天平（感量 0.1 mg ），注射器，打孔器（直径 0.5 cm 2 左右），烧杯（200ml），量筒。三、实验步骤1. 植物组织中自由水含量的测定（ 1 ）注射器称重W 1。（ 2 ）选取部位、长势、叶龄一致有代表性的叶片数片，用打孔器打取小圆片 50 片（注意避开粗大的叶脉），装到注射器中，盖紧并精确称重W 2。（ 3 ）加入 60 ％～ 65 ％的蔗糖溶液 5 mL 左右，再分别准确称重W 3。（ 4 ）反复抽气30分钟。用测糖仪分别测定抽气后（C2）及原糖液（C1）的浓度。 可由下式算出：植物组织中自由水的含量（%）= [（W3-W2）*（C1-C2）/C2 ] / （W2-W1）* 1002. 植物组织中总含水量的测定（1）选取部位、长势、叶龄一致有代表性的叶片数片，用打孔器打取小圆片 50 片（注意避开粗大的叶脉），精确称重W4。（2）将小圆片在烘箱中105度下杀青15分钟，再于80-90度下烘干至恒重，精确称重W5。可由下式算出：植物组织中总含水量（%）=
（W4-W5） / W4* 1003. 植物组织中束缚水含量的计算植物组织中束缚水的含量 = 组织中总含水量 – 组织中自由水含量4. 两人一组，每组取幼叶或老叶（与相邻组不同）做实验重复三次，求平均值，并与相邻组的结果进行比较做统计分析（t测验）。[ 思考题 ]1 ．测定植物组织中自由水和束缚水含量有何意义 ?2 ．自由水／束缚水比值的大小与植物生长、代谢活动及抗性关系如何 ?阅读详情：
范文八：蒸汽锅炉软化水设备的由硬水转软水的原理蒸汽锅炉软化水设备的由硬水转软水的原理蒸汽锅炉软化水设备概述蒸汽锅炉所使用的软化水设备采用离子交换技术对原水进行深度的处理，去除掉水中含有的钙、镁离子，使其硬水转换为所需的软水，经净化后的水符合国家规定的卫生标准，满足企业对用水的要求。技术资料来源于莱特莱德合肥锅炉软化水设备工程公司
锅炉软化水设备的工作原理软化设备就是采用阳树脂对水进行软化，主要目的是让阳树脂吸附水中的钙、镁离子(形成水垢的主要成分)、降低水的硬度，并可以进行树脂再生，循环使用。全自动软水器是将软水器运行及再生的每一个步骤实现自动控制，并采用时间、流量或其它感应器等方式来启动再生。锅炉软化水设备的实用性非常强，只要是有锅炉的地方就可用到软化水设备对水进行处理，可延长锅炉的使用寿命，为企业降低成本。经过处理后的水进入锅炉，产生的水垢也会很少，为工艺的安全进行做出了贡献。软化水设备的应用范围十分广泛，无论是化工、医药、锅炉等用水还是家庭生活用水，都有很好的应用。阅读详情：
范文九：由硬水转软水的蒸汽锅炉软化水设备的原理由硬水转软水的蒸汽锅炉软化水设备的原理蒸汽锅炉软化水设备概述蒸汽锅炉所使用的软化水设备采用离子交换技术对原水进行深度的处理，去除掉水中含有的钙、镁离子，使其硬水转换为所需的软水，经净化后的水符合国家规定的卫生标准，满足企业对用水的要求。技术资料来源于莱特莱德合肥锅炉软化水设备工程公司
锅炉软化水设备的工作原理软化设备就是采用阳树脂对水进行软化，主要目的是让阳树脂吸附水中的钙、镁离子(形成水垢的主要成分)、降低水的硬度，并可以进行树脂再生，循环使用。全自动软水器是将软水器运行及再生的每一个步骤实现自动控制，并采用时间、流量或其它感应器等方式来启动再生。锅炉软化水设备的实用性非常强，只要是有锅炉的地方就可用到软化水设备对水进行处理，可延长锅炉的使用寿命，为企业降低成本。经过处理后的水进入锅炉，产生的水垢也会很少，为工艺的安全进行做出了贡献。软化水设备的应用范围十分广泛，无论是化工、医药、锅炉等用水还是家庭生活用水，都有很好的应用。阅读详情：
范文十：水涝胁迫下欧李丙二醛和氧自由基的变化摘
要：对水涝胁迫下欧李丙二醛和氧自由基含量变化进行初步研究，以期获得欧李植物在成都地区的生长情况，为探讨欧李植物的抗逆性提供理论基础。以双组份分光度法测定丙二醛的含量，提取液与TBA在沸水浴中反应后，分别测定450，532和600 nm波长下的吸光度值;利用O-2.与羟胺反应生成NO2-，NO2-在对氨基苯磺酸和a-萘胺作用下，生成粉红色的偶氮染料，检测植物叶片中O-2.含量。结果显示，水涝胁迫下欧李生长期中，丙二醛含量呈上升趋势;水涝胁迫下欧李氧自由基含量也增加。研究认为随水涝胁迫程度的增加，欧李内氧自由基含量增加，氧化脂膜，导致丙二醛含量增加。关键词：欧李;丙二醛;膜脂过氧化;氧自由基;水涝中图分类号：S793.9
文献标识码：A
DOI 编码：10.3969/j.issn.15.12.004Changes of Malondialdehyde and Oxygen Free Radicals in Prunus humilis Bunge Leaves under Waterlogging StessZHANG Hai-ping1， CHENG Xiao-ai2（1. Dingxiang County State Forest， Shanxi Province， Dingxiang， Shanxi 035400， C 2. Taigu County Agricultural Commission， Shanxi Province， Taigu， Shanxi 030800， China）Abstract： MDA and oxygen free radicals were determined to obtain the growing state of Prunus humilis Bunge under waterlogging stress and provide theoretical basis for stress tolerance of Prunus humilis Bunge in Chengdu. The content of MDA was detected by two-component spectrophotometry method. The absorbance at 450， 532 and 600 nm were determined after the extract and TBA reacted in th the content of O2-. was detected through pink azo dyestuffs which were obtained by the reaction of O2-. and hydroxylamine to gain NO2-， NO2- then reacted with sulfanilic acid and a-naphthalene amine. The results showed that the content of MDA and O2-. were all increased during the waterloggin. The contents of oxygen free radicals increased and caused bilayer lipi the contents of MDA also increased during the waterlogging because MDA was the product of bilayer lipid membrane oxidation.Key words： Prunus humilis B membran
waterlogging欧李[1]（又称钙果）Prunus humilis Bunge为蔷薇科樱桃属矮生樱桃亚属的一种野生灌木果树，主要分布在中西部的山西、河北、陕西、内蒙等干旱地区。植株高0.3～1.5 m，抗寒，耐旱，适应性强。经济价值极高，用途非常广泛。可食用，仁可入药，茎可作饲料。果实呈红色，呈扁圆形、枣圆形、尖桩形不等，酸甜适中，味道可口，富含维生素A、维生素B2、维生素B12、维生素C、维生素E，微量元素氮、钾、钙、铁、锰、镁、锌、硒等，而且含有多种氨基酸，果实含糖量可达13%～19%。在环境设计、水土流失防治等方面作用较好，被列为生态林优良树种。随着植物叶片的衰老[2]，植物中各项生理指标会有变化，如核酸和蛋白质含量减少[3]、光合作用降低、叶绿素降解以及激素平衡失调等。这些指标可以反映植物衰老过程的变化。自由基从产生到衰亡的过程就是电子转移的过程[4]。在生命体系中，电子的转移是一种基本的运动，生物体内的氧最容易得到电子形成活性自由基。代谢的氧大多数与氢结合生成水，4%～5%形成超氧阴离子，后者又可形成过氧化氢，它们都属于自由基[5]。自由基有多种，如氧自由基，是指那些最外层电子轨道[6]原子、离子或分子。自由基具有高度的氧化活性，它们很不稳定，活性很高，它攻击细胞膜等膜类，与膜中的不饱和脂肪酸[7]反应，造成脂质过氧化增强。脂质过氧化产物又可分解为更多的自由基，引起自由基的连锁反应。这样，膜结构的完整性就遭到了破坏。目前发现的氧自由基基本上对植物是起负作用的。
　　通过呼吸作用进入生物体内的氧分子，参与酶促或非酶促反应[8]时，只接受一个电子后转变为超氧阴离子自由基（O-2.），O-2.既能与体内的蛋白质和核苷酸等活性物质直接作用，又能衍生为H2O2，羟自由基（.OH），单线态氧（1O2）等。.OH可以引发不饱和脂肪酸脂质（RH）过氧化反应。产生一系列自由基，例如：脂质自由基（.R）、脂氧自由基（O-2.）、脂过氧自由基（ROO.）等。基团旁边的小圆点为不成对价电子，这种基团称为自由基，带有―O―O―的是过氧化物，1O2d的电子处于激发状态。这些含有氧而比O2活泼得多的化合物，称为活性氧，部分人将它们统统归纳为氧自由基类。一切需氧生物均能产生活性氧，在其体内有一套完整的活性氧清除系统（抗氧化酶和抗氧化剂[9-10]），能将活性氧转变为活性较低的物质，基体因此受到保护。利用羟胺氧化[11]的方法可以检测出生物系统中O-2.含量。自由基清除能力则随年龄的增加而减少，有时甚至不能消除O-2.。O-2.反应能力很强，可使细胞中的多种物质发生氧化，活性氧大量积累会引发或加剧细胞膜脂过氧化作用产生MDA[12]。MDA产生则进一步加剧细胞膜的损伤，并造成细胞膜系统的损害。所以，丙二醛产生数量从一定程度上代表细胞膜脂过氧化的程度，也可以间接反映植物组织的抗氧化能力的强弱。1 材料和方法1.1 试验材料和仪器1.1.1 植物材料 试验材料为2008年从山西引种到成都的欧李。3月份移栽至花盆中，正常管理。设计为8株长势相同的欧李，分为2组：处理组和对照组，处理组用水涝胁迫处理，对照组为正常条件下进行连续168 h的观测。1.1.2 药品与试剂 试验药品：三氯乙酸、硫代巴比妥酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、石英砂;试剂：亚硝酸钠、对氨基苯磺酸、a-萘胺、盐酸羟胺及缓冲液，所用试剂都是分析纯。0.05 mol?L-1 pH 值7.8磷酸钠缓冲液：先各配制0.05 mol?L-1的磷酸氢二钠和磷酸二氢钠，将两者体积按照91.5∶8.5混合，得到目标溶液。5%三氯乙酸溶液：称5 g三氯乙酸固体，先溶解再定容至100 mL。0.5%硫代巴比妥酸溶液：称取0.5 g硫代巴比妥酸，用5%三氯乙酸溶解，定容至100 mL，得到目标溶液。1.1.3 试验仪器 CT15RT型高速冷冻离心机，上海天美生化仪器设备工程有限公司;7200 型可见光分光光度仪，尤尼柯（上海）仪器有限公司;HH-4数显恒温水浴锅，常州澳华仪器有限公司;FA2004B型电子天平，上海越平科学仪器有限公司;冰箱， 海尔;电热鼓风干燥箱（DB-210SCB/3kW），成都天宇实验设备有限公司;研钵;剪刀; 5 mL刻度离心管;刻度试管（10 mL）;镊子; 移液管（5，2，1 mL）。1.2 试验方法1.2.1 丙二醛含量的测量 （1） 丙二醛的提取。分别取欧李当年生枝条叶片，洗净擦干，剪碎，分别称取0.2 g左右于预冷过的研钵中，同时加入少量石英砂，2 mL预冷的0.05 mol?L-1 pH值7.8的磷酸缓冲液，在冰浴下研磨成匀浆，转移到5 mL刻度离心试管，用3 mL缓冲液分3次洗净研钵，清洗液合并到离心管中，于8 000转?min-1，4 ℃下离心15 min，取上清液即为丙二醛缓冲溶液。（2）丙二醛含量的测定。收集上清液用磷酸缓冲液定容到7 mL，从中取1 mL，加入5 mL 0.5%硫代巴比妥酸溶液，摇匀。将试管放入沸水浴中煮沸10 min（自试管内溶液中出现小气泡开始计时）。10 min后立即将试管取出并放入冷水浴中，冷却后，再次在4 ℃、8 000 g离心15 min（试管中若没有沉淀，可不离心）。离心后，以0.5%硫代巴比妥酸溶液为空白分别测定532，600 和450 nm处的吸光值。（3）丙二醛的数据处理方法。本试验采取的是双组分光光度法，丙二醛的浓度的计算方法为MDA浓度（μmol?L-1）=6.45（D532-D600） -0.56D450式中，D450、D532、D600分别代表450，532和600 nm波长下的光密度值。MDA含量（μmol?g-1，FW）=MDA浓度（μmol?L-1） ×提取液体积（mL）/植物组织鲜质量（g）1.2.2 氧自由基的测量 （1）亚硝酸根准曲线的制作。最先配置出浓度50 μmol?L-1的NaNO2，再稀释得到梯度浓度5，10，20，25，30，35，40，50 μmol?L-1。然后取1 mL NaNO2溶液，分别加入1 mL 17 mmol?L-1对氨基苯磺酸和1 mL 7 mmol?L-1 a-萘胺，1 mL H2O，于250 ℃中保温20 min，然后测定OD530，结果如表1。以[NO2-]和OD530值互为函数，按照试验条件用计算机做标准曲线，得出回归方程和相关系数，如图1。（2）植物提取液的制备。取欧李植物本年生叶，洗净擦干剪碎，加入2 mL的50 mmol?L-1 pH 值7.8磷酸缓冲液[含0.1 mmol?L-1 EDTA;0.3%（W/V）Triton X-100;4%（W/V）聚乙烯局吡咯烷酮（pvpp，polyvinylpolyrrolidone）]进行研磨，研磨后加1mL 50 mmol?L-1 pH值7.8磷酸缓冲液洗研钵2次，以10 500×g离心20 min，得上清液并用缓冲液定容到8 mL，即为粗酶液。（3）测定氧自由基含量。从粗酶液取1 mL，加0.5 mL 50 mmol?L-1 pH值7.8磷酸缓冲液，1 mL 1 mmol?L-1盐酸羟胺，摇匀，于250 ℃中保温1 h，然后再加入1 mL 17 mmol?L-1对氨基苯磺酸和1 mL 7 mmol?L-1 a-萘胺（冰醋酸∶水=3∶1），摇匀，于250 ℃中保存20 min，取出测定波长OD530。
　　根据测得的OD530，查亚硝酸根标准曲线图，将OD530换成亚硝酸根，然后依照羟胺与O-2.的反应式：NH2OH+2 O-2.+H+→NO2-+H2O2+H2O将[NO2-]乘以2，得到[O-2.]含量。（4）计算亚硝酸根含量和氧自由基含量。由图1（亚硝酸根标准曲线）可知，在选定工作范围内，亚硝酸根线性关系良好。亚硝酸根含量计算公式：亚硝酸根含量=由标准曲线算得亚硝酸根浓度（μmol）×8（mL）提取液总量/
（样品质量（g）×1.0测定时提取液总量 （mL））
（1）氧自由基含量=公式1算得的亚硝酸根含量×2 …4（2）2 结果与分析2.1 确定试验方法2.1.1 丙二醛测定方法的优化 方法一：取0.2 g左右样品，洗净擦干，剪成小段放入研钵，加2 mL预冷的0.05 mol?L-1磷酸缓冲液，加入石英砂，冰浴条件下研磨成匀浆，转移到试管，用3 mL缓冲液分3次洗净研钵，清洗液并入试管中。向试管中加入5 mL 0.5%硫代巴比妥酸溶液，摇匀。放入沸水浴中煮沸10 min（内液出现气泡开始计时）。10 min后，立即将试管取出并放入冷水浴中，冷却，4 ℃、8 000×g离心15 min。离心后，以0.5%硫代巴比妥酸溶液为空白测450， 532和600 nm处的吸光值。通过此方法得到如表2的数据。一般吸光度在0.2～0.8之间，可以减少系统误差。此方法测出的吸光度太大，不宜作为试验数据。说明浓度太高，需要稀释提取液。方法二：同上，只是先把研磨得到的提取液定容到20 mL，取5 mL与0.5%硫代巴比妥酸（TBA）来反应。通过此方法得到如表3的数据。可以看出此方法测出的吸光度偏大，不可作为试验数据。说明需要离心。通过以上的2个试验分析，出现这种问题的可能原因在于合并提取液的时候，应该先离心，再反应。方法三：同方法一，只是定容的时候定到7 mL，从中取1 mL与0.5%硫代巴比妥酸（TBA）来反应，通过此方法得到如表4的数据。从表4中的吸光度可以确定此方法适宜测定欧李叶片中的丙二醛含量，具体如下。分别取植物当年生枝条叶片0.2 g左右，洗净擦干，于预冷的研钵剪成小段，加2 mL预冷的0.05 mol?L-1 pH 值7.8的磷酸缓冲液，同时加石英砂，在冰浴下研磨成匀浆，转移到5 mL刻度离心试管，将研钵用3 mL缓冲液分3次洗净，清洗液并入离心管中，在8 000转?min-1，4 ℃下离心15 min，上清液即为丙二醛提取液。将上清液用磷酸缓冲液定容到7 mL，取1 mL提取液，加入5 mL 0.5%硫代巴比妥酸溶液，摇匀，在沸水浴中煮沸10 min（试管内出现小气泡开始计时）。10 min后立即将试管取出并放入冷水浴中冷却，试管中若有沉淀，按上述条件离心15 min。以0.5%硫代巴比妥酸溶液为空白分别测定532 nm、600 nm和450 nm处的吸光值。2.1.2 氧自由基测定影响因素的排除 （1）叶绿素影响。如果叶片中含有大量叶绿素将干扰测定，可在样品测定时先去掉叶绿素，再进行测定试验。去除叶绿素的过程可在研磨后进行，也可以在样品与羟胺温浴后萃取。在此过程中，提取液总量为2 mL，其他测定条件不变，结果如表5。通过分析可以知道，不做处理的试验组，结果较一致，而除去了叶绿素的试验组，得到的氧自由基含量相差很大，因为在用乙醚萃取叶绿素的时候，体积影响很大，造成试验结果误差大。不做处理的样品得到的氧自由基相对稳定，因此试验中不考虑叶绿影响。（2）体积影响。由于要经过研钵研磨，研磨后在研钵上都会留下一定的样品，使得样品提取液不为2 mL，这对试验测定可能造成较大误差，因此对体积影响做了试验。一个是研磨时加2 mL 50 mmol?L-1 pH值 7.8磷酸缓冲液后直接离心，其余条件不变。另一个是在加入2 mL 50 mmol?L-1 pH值 7.8磷酸缓冲液后用1 mL 50 mmol?L-1 pH 值7.8磷酸缓冲液清洗2次，离心后定容到4 mL，结果如表6。通过分析得到，从同一条件下取得的叶子，不考虑体积影响测定的氧自由基含量值较小，消除体积影响后测出来的氧自由基含量值较大。这表明体积对氧自由基含量测定有影响。所以确定此试验在操作方法中采用消除体积影响的条件。通过试验，经过分析，决定在试验中不考虑叶绿素的影响，要考虑体积的影响。2.2 短期水涝胁迫下丙二醛的含量变化通过测欧李丙二醛生长期变化（11左右点取样，每次做3个平行），测得丙二醛数据。由图2可知，经过水涝处理的欧李丙二醛含量在短期内都比正常生长的欧李丙二醛含量高，说明水涝胁迫确实可以促使欧李产生丙二醛。在水涝胁迫下，短期内丙二醛含量总体呈上升趋势，说明短期内水涝胁迫程度与欧李丙二醛含量呈正相关关系。2.3 短期水涝胁迫下氧自由基的含量变化由表7、图3可以看出，胁迫处理组每天的氧自由基含量都要比对照组的要高，说明水涝胁迫可以促使欧李产生氧自由基。随着时间增加，水涝胁迫程度加剧，氧自由基含量呈上升趋势，但是上升过程有波动，这是因为植物体内有自己的一套清除系统（抗氧化酶和抗氧化剂）[13]。当植物受到胁迫，体内会产生POD，POD的主要作用就是分解氧自由基[14]，而在胁迫下，氧自由基增加，相应的POD也会增加，但是氧自由基的产生能力在短时间胁迫下比POD分解能力要强，故在短时间内，欧李氧自由基含量呈波动上升的趋势。3 结论与讨论3.1 短期水涝胁迫下欧李丙二醛含量变化趋势短期内，水涝胁迫下欧李丙二醛的含量比正常生长的要高。这是因为植物受到水涝胁迫会产生氧自由基，而氧自由基作用就是氧化细胞脂膜，其产物就含有丙二醛。同时从本试验还可以看出，在本试验条件下，丙二醛的含量呈上升趋势。在短期内，随着水涝胁迫时间的增加，对植物的胁迫程度也增加，植物氧自由基量增加，导致脂膜氧化一直进行，丙二醛含量呈上升趋势。
　　3.2 短期水涝胁迫下欧李氧自由基含量变化趋势短期内，水涝胁迫下欧李氧自由基的含量比正常生长的要高，说明水涝胁迫有利于欧李产生氧自由基。水涝胁迫程度加剧，氧自由基含量将呈上升趋势，但是上升过程有波动，这是因为植物体内有自己的一套清除系统（抗氧化酶和抗氧化剂）。当植物受到胁迫时，体内会产生POD，POD的主要作用就是分解氧自由基，而在胁迫下，氧自由基增加，相应的POD也会增加，但是氧自由基的产生能力在短时间胁迫下比POD分解能力要强，故在短时间内，欧李氧自由基含量呈波动上升的趋势。参考文献：[1] 马建军，张立彬.野生欧李生长期矿质营养元素含量的变化[J].园艺学报，）：165-168.[2] 宋纯鹏.植物衰老生物学[M].北京：北大出版社，1998：33.[3] 沈成国.植物衰老生理与分子生物学[M].北京：中国农业出版社， 2001：22.[4] 陈瑗，周玫.自由基与衰老[M].北京：人民卫生出版社，.[5] 刘忠静，郭艳奎，林梢航.外源过氧化氢对干旱胁迫下温室黄瓜叶绿体超微结构和抗氧化酶的影响[J].园艺学报，2009（8）：.[6] 福井谦一.化学反应与电子轨道[M].北京：科学出版社，.[7] 李尔炀，蔡志强.生物化学[M].北京：化学工业出版社，.[8] 罗纪盛.生物化学[M].上海：华东师范大学出版社，.[9] 森谦治.生物活性物质化学：学习有机合成的思考方法[M].北京：化学工业出版社，.[10] 赵宝路.氧自由基和天然抗氧化剂[M].北京：科学出版社，2005.[11] 翟鹏，徐茂田，蒋芳婷.羟胺氧化反应活化能的测定[J].自然科学，）：166-169.[12] KAMLESH S， EFROSINI K. PEGylated Liposomal doxorubicin targeted to α5β1-expressing MDA-MB-231 breast cancer cells[J]. Langmuir， 2012， 28（10）：.[13] 程霞.欧李多酚清除自由基活性研究[J].生态学报，2007（9）：15-17.[14] 马建军，于凤鸣，杜彬张.欧李叶片过氧化物酶同工酶与叶果生理性状的相关性[J].经济林研究，2011（12）：20-23.阅读详情：