求大神帮忙分析一下质粒电泳图谱酶切电泳结果图谱

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2016-12-28 12:11 标签： 质粒双酶切电泳图
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本帖最后由 bm 于
16:53 编辑
质粒用的是pPICZaA,第一张是质粒以及酶切之后的电泳图,第二张是鉴定的结果！由于做的时候都是按照老师的步骤来做的，并且是第一次做，所以不知道该怎么分析这种图！请各位帮帮我吧！
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该用户从未签到
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吼吼 为什么照片是反的
您好噢，现在好了，刚上传的时候没注意，我不知道该怎么分析！要写论文的&
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小妹妹，先把图片用软件处理一下哦。这个实验结果很好。提的质粒酶切后条带单一，PCR结果引物二聚体也不多，不错。你用的Marker是lamataDNA/hindIII酶切的吗？目的条带挺大的哦，不低于5000吧？好好想想从不同角度分析。如条带大小，浓度，左右对照，和Marker对照，浓度差别的原因，酶切位点分析，PCR条件分析。。。。。。
该用户从未签到
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做得比我强多了，我都P不出来……
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效果很理想，建议把照片再处理一下就OK了
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呵呵，学习下。
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生物秀举人
该用户从未签到
你第一张的酶切是单酶切，还是双酶切啊，但是只要PCR扩增出来，就表明重组载体构建成功
该用户从未签到
照相的时候多细心一些，，焦距啊大小啊什么的都再调调，提的还是不错的，不过为什么要用大孔的胶呢？ 小孔的上样量3ul就可以了（少量提取）
呵呵，还专门加了Rnase吧
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质粒双酶切后的电泳图，求高手解答
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比较亮的两个条带是目的条带，但不知道为什么后面会有那么多杂带，求高手解答，感激不尽！
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质粒酶切除了你想要的产物，还有其他片段啊& &
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是呢，那两个比较亮的条带是我要的，剩下的条带不知道如何解释。。。
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片段内部也有酶切位点？
星活性？&&
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我也觉得是不是内部有位点，但是如果内部有位点就不会得到目的条带了
平头还是粘性？
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请不要无意义地灌水
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两个都是粘性的。。。我是将质粒转化到大肠杆菌中，铺板摇菌后大量提取质粒，再双酶切质粒，跑电泳。。。不知道是不是大提质粒的时候有基因组DNA的污染。。。
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都有可能，准备减少酶的量，缩短酶切时间试试
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如果是试剂盒应该不会吧
你切了多久？
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我是用试剂盒提的质粒，说明书说切1到16小时，以前小提质粒做过两次酶切，一次消化过夜了，一次时间比较紧，估计就一个多小时， 都没出现过这种条带。这次消化了8个小时。。。大提的质粒比小提的浓度高很多，所以酶切体系配的不一样，不知道是不是有什么问题。质粒浓度在0.4到0.8之间，20μl酶切体系：两种酶（10u/μl）分别1.0μl，质粒1.0μl.
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可以同时做单酶切&&排除看看
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弱弱地问一下，质粒单酶切会跑出三个条带么，以前做过一次单酶切，没太看懂。。。
当然可以三个条带。复制中间体。google一下。&
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1 酶切只要1小时。
2 电泳的时候加上单酶切和没有酶切的做为对照。
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我一般切2H
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灰常感谢！
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谢谢哈，这次切了两个小时，结果还不错
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酶切真的看人品
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怎么提的质粒，居然有基因组污染。气死人了。你师兄师姐不骂你的？
Powered bypUC19质粒用EcoRⅠ酶切后电泳结果分析请问右边数第五条带中各个条带都是什么类型的DNA
你连marker都没说,是切好的载体还是提取的质粒也没说,切的是原载体还是插入序列的载体也没说……那你自己看啊~pUC19质粒在2500bp左右,EcoRⅠ酶切位点仅为一个.质粒呈线性时,电泳位置大概在2500bp左右,如果质粒提取的好,那提取出来的质粒会是超螺旋.超螺旋在电泳中跑得快,会在2500bp前面,所以看上去会是比较小的条带.而提取过程不好的话,在超螺旋后面会有两条带,一条为开环质粒（2500bp左右）,一条为复制中间体（>2500bp）酶切后,因为EcoRⅠ只有一个酶切位点,所以不能切出较小的带来,只有将超螺旋的质粒切成开环.但看你图上似乎有一条较小的条带,故而猜测你们在载体中插入了片段,最前面那条（最下面）就是你们利用EcoRⅠ酶切后插入的条带,后面那坨,应该是没切完的超螺旋（酶量加少了,且切的时间较短）,最后那条带,是切完以后的载体.
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