每天用足够的时间来平衡色谱柱，您就会在处理问题方面获得最大的"补偿"，而且您的色谱柱的寿命也会变得更长！------ 一定得做！ &&& 新的色谱柱在使用之前应该在您自己的液相色谱仪上进行性能测试，即使用色谱柱附带的检验报告上测试条件和样品来测定该色谱柱的柱效。并且，在以后的使用中，应时常对色谱柱进行测试。
平衡色谱柱 &&& 反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的。请一定确保您所使用的流动相和乙腈/水互溶。由于色谱柱在储存或运输过程中可能会干掉，因此在用流动相分析样品之前，应使用10－20倍柱体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱；如果您所使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用纯水"过渡"。&&& 硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在正庚烷中的。如果该色谱柱需要使用含水的流动相，请在使用流动相之前用乙醇或异丙醇平衡如何平衡色谱柱？ &&& 平衡过程中，将流速缓慢地提高用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线（缓冲盐或离子对试剂度如果较低，则需要较长的时间来平衡）色谱柱的再生 　　&&& 进行色谱柱再生时，应使用一个谦价的泵，我们建议最好不使用您的高效液相色谱仪上的泵。 建议用来冲洗的溶剂体积注意：
&&& 在对NH2改性的色谱柱进行再生时，由于NH2可能成铵根离子的形式存在，因此应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗，然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。
**如果简单的有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质，用0.05M稀硫酸冲洗非常有效。色谱柱的维护 1．使用预柱保护分析柱（硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度）2．大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2－7.5，尽量不超过该色谱柱的pH范围3．避免流动相组成及极性的剧烈变化4．流动相使用前必须经脱气和过滤处理5．如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕柱子冲洗干净，并保存大乙腈中6．压力升高是需要更换预柱的信号
卡套柱的安装（不加预柱） 1．将卡套架套入柱芯2．将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽，使柱芯高于夹套3．将已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高过夹套片4．将卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手拧紧5．然后依同样的顺序连接好柱子的另一端6．连接到液相色谱仪，PEEK接头手拧即可；若为不锈钢接头应使用专用扳手注意：使用卡套柱时，两端的卡套应时刻连接在柱芯上。不管您是平衡色谱柱或是清洗，任何时候都不能将卡套取下来，否则会造成填料的流失。 卡套柱的安装 （加预柱）1．将卡套架套入柱芯2．将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽，使夹套高于柱芯3．将已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高过夹套片4．将"子弹头"预柱放入卡套片内5．将卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手拧紧6．然后依同样的顺序连接好柱子的另一端
总而言之1)柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动； 2)当柱子和色谱仪连接时， 阀件或管路一定要清洗干净； 3)要注意流动相的脱气； 4)避免使用高粘度的溶剂作为流动相； 5)进样样品要提纯； 6)严格控制进样量； 7)每天分析工作结束后，要清洗进样阀中残留的样品； 8)每天分析测定结束后，都要用适当的溶剂来清洗柱； 9)若分析柱长期不使用，应用适当有机溶剂保存并封闭；
&日期：日 - 来自[]栏目
一、仪器的安装对环境的要求
１、 电源电压(２２０V)：
&&& 有条件的情况下，最好使用照明电，此电压比较稳定,对仪器的性能稳定性较好，在没有办法的时候，必须要用动力线路供电时，就要采取相应的办法克服或减少由于电机频繁启动，停止运行时对电网电压波动的影响(电机是感性负载，停止和启动能产生很强的干扰尖脉冲电压)。如请电工师傅单独从动力变压器零线以及负载较轻一些的火线上单独引线至实验室，这样可以大大减少对仪器的干扰，在经济上允许时，最好使用交流稳压器。总之，电压最低不能超过１９８V，最高不超过２３０V为好。
２、对实验室的要求：
A、 室内最好有防尘设施，仪器工作时产生大量的热量，通过仪器的风扇散热，这样就有可能将周围的灰尘带入机内，在静电的作用下，附于电路上，时间长了，特别是南方，多雨季节比较潮湿，有可能给仪器工作造成不良的影响。B、 对实验室温度的要求是温度变化相对要很小。特别是太阳光线不要直射于仪器上，否则仪器将会出现不稳定的情况。如流动相内可能产生肉眼看不到的气泡，进入系统内时，基线稳定性变差。柱子温度变化，会使保留时间有所变化，对分析的结果有一定的影响。紫外检测器的稳定时间以及工作中的稳定性都与环境温度的恒定有很大的关系。有条件时，最好安装空调。注意，空调机供电不要与仪器供电用同一线路。C、 地线，消除干扰。提高仪器稳定性，保证人身安全。
二、P200II型高压恒流泵在工作中常见的一些故障及排除方法（共六个问题）
1、 压力显示值忽高忽低无规律的跳动
&&& 引起这种现象的主要原因是系统内存在气泡。此时需要仔细检查输液管与泵头下阀是否拧紧，四氟管有无裂纹等，因为液体在流动时，在流经处产生微小的负压，空气会进入系统。当检查完确认以后，将放空阀逆时针旋转一圈左右后，用手按住运行键，此时，泵以最高的流速从排空阀流出，气泡随之流出。当泵头经过清洗后，或者更换流动相时，必须要经过这一相操作。此法效果不佳时，可以将主泵头上阀的压帽松开一点（约三分之一圈左右）存在单向阀内的气泡就可以排除。当仪器是新购买或较长时间没有使用，有时也会出现此类现象，当确认输液管一切正常时，上述情况也操作过时，效果仍不佳，让泵运转一段时间，也可以达到目的。这是因为宝石阀球、座表面没有充分的被流动相全部浸润，在吸液、排液过程中密封不严，产生倒流现象引起压力、流量不稳定。对流动相而言，要求充分脱气（超声波），最好现用现脱气，不要放置时间过长，否则空气会慢慢的溶解进去。装流动相的瓶子不要受太阳光线的直射，最好放在高一点的地方（高于泵的位置）这样一但有气泡很难进入系统中去（气泡上升）。
2、 泵运转后，压力显示为零（即没有流量）
&&& 如果出现这样的情况时，就要考虑操作方法是否有问题。如输液管在接到泵的入口前，管内是否充满了流动相，接头是否拧紧了，过滤头是否有阻塞情况，或者是否插入到流动相内。也可以用注射器从放空阀出口将液体抽出等。还有当输液管从一个流动相瓶转移到另外一个流动相瓶时，必须注意泵应处于停机状态，必须杜绝泵在运转时进行此操作。
3、 恒流泵漏液：分两部分
a、 流动相从主、副泵头的冲洗管中流出时，其原因大多数是密封圈内壁有污物，宝石杆附有污物引起漏液，此时经过清洗即可消除漏液现象。如果漏液现象不是很严重，保留时间没有变化，还是可以继续实用的，但应在短时间内进行处理。流动相必须要进行抽滤，以除去微小的杂质（肉眼很难分辨）。过滤用的滤膜如果质量不好时，流动相内可能会出现絮状物的现象，时间长了，附着在密封圈、宝石杆上时，也可能造成漏液。如果使用缓冲液，工作完后没有冲洗或冲洗不正确不完全，结晶的盐类将密封圈、宝石杆磨损引起泵漏液，是无法进行修复的。所以，用后必须进行冲洗，即将冲洗完毕之前，用注射器将泵头的冲洗管内的流动相冲洗干净。恒流泵用的时间较长，正常磨损产生漏液情况时，需要更换相应的部件。b、 流动相从泵头与泵体连接处漏液。泵头与泵体之间的垫片是PEEK材料的，由于长期的高压、低压（常压）作用，弹性降低，密封性差引起。另一原因是反复多次清洗泵头也能引起漏液。不过此种现象很少才会出现，可以用内六角扳手将两个螺丝均匀的扭紧，以不漏液为准。
4、 压力显示（柱前压）过高，因素有下列几种情况：
A、在线过滤器内烧结不锈钢网阻塞，阻力增大引起。流动相处理的不理想或者瓶子不洁，长期累计而形成的。如果把柱子取下，正常情况压力显示为零，阻塞后压力可以上升至20Mpa以上，此时可以看到不锈钢网入口面上有一层污物附在上面，可以用6%--10%硝酸溶液进行超声清洗，时间20分钟即可。B、进样阀阻塞引起压力显示增高：进样阀转子的材料比较软，分析的样品处理不当（有颗粒），时间长了将孔道阻塞。转子与定子之间磨擦产生的粉末，进样注射针头段面不光洁均可引起转子、定子磨损，严重时漏液。将柱子取下，阀出口（接柱子端）流动相应呈线状射出（流量在1ml/min以上），如果是一滴一滴向外流出，则孔道有阻塞的地方，需要超声清洗。C、柱子本身压力增大：柱子使用时间较长，压力会有不同程度的升高 ，这是正常情况。当分析的样品没有经过处理（过滤），时间一长，杂志会积累在柱子端的筛网上（烧结不锈钢）引起压力升高。判断方法：取下柱子，压力显示为零，否则应考虑柱子有问题。解决方法：取下筛网超声清洗。D、紫外检测器管子或池体阻塞引起压力显示升高：主要原因是选用了质量较差的柱子所致，填料流出将管路阻塞。解决问题的方法是超声清洗。注：柱前压力显示过高的基本检查步骤：1、 取下柱子，观察压力显示情况，如果不显示零时，问题可能出现在进样阀上或在线过滤器上。2、 去掉进样阀，还不显示零，就可以断定问题出现在在线过滤器上。E、流量设定显示，有时会自行上升到4.99ml/，分3种情况：1、 产生这种情况的直接原因是电源电压瞬间过低太大，引起电路工作异常。如果电源和动力线是同一条线路，电机或负载较大的设备启动、停止，瞬间电流很大，引起了电压降低，产生上述现象。最好用照明电来供电，有必要时，采用交流稳压器进行稳压。2、 如果排除电压过低引起的上述情况，很有可能是仪器本身的问题，内部供电电压由于元器件损坏或性能变差而降低，这时候就需要专业人员进行检测。3、 面板膜设订键在长期使用使得接触面凹陷，造成接触不良导致结果。F、恒流泵自行启动、停止工作，分3种情况：1、 恒流泵上运行键、停机键长期反复按压，凹陷，导致内部触点有时会因轻微振动而接通又断开。或引线端脏了，引起漏电，也可以产生此现象。2、 本身仪器电路工作异常，时好时坏引起此现象。3、 220V供电电压瞬间有较大的干扰脉冲引起此现象。&&& 以上3种情况需要仔细判断才能确认，第一种情况时，更换新的面膜开关或用酒精棉球擦拭引线领子导电条；第二种情况时需专业人员检修；第三情况时需要改善供电电压的质量，采用照明电供电，不要与负载较大的电器共用一个电源。
三、恒流泵泵头的清洗方法步骤（以实际操作为准）：
1、 将所有的连接管拆下。2、 先取下副泵头。步骤：凸轮处于最低点，泵头向里推进一些同时顺时针旋转90度，即可拔出副泵头。3、 主泵头方法同上，只是旋转时是逆时针方向旋转90度，即可拔出。4、 手按住泵头的推套，将固定螺丝松开，慢慢将推套取下（不要突然松手，以防止内部弹簧将宝石杆弹出摔坏处）。5、 宝石杆平行取出。6、 用内六角螺丝扳手松开泵头端面的两个螺丝，即可把泵体、定位套分开。7、 仔细检查密封圈，宝石推杆有无损伤、划痕（宝石杆轴向划伤）。8、 超声清洗（宝石杆可以用绸子布粘一些溶剂擦洗干净）完成后，密封圈内用绸子布卷成一尖卷插进内径中轻轻旋转，将附着内壁的污物擦净，再清洗干净为止。9、 单向阀一般不需要清洗，如果要清洗，在拆卸过程中注意做好拆卸步骤的记录，位置、方向，垫片的方向等情况。10、 安装方法与拆卸方法相反。注意两个内六角螺丝要均匀的一下一下扭紧，防止变形（密封圈、垫片等）。注：另外一种简便的清洗方法：连接管不必拆下来，用内六角扳手将泵头端面的螺丝杆扭开取下来，水平方向将泵体轻轻取下，定位套也水平取下，以防止宝石杆折断，然后按上述的有关步骤进行清洗。
四、紫外检测器日常易出现的故障现象及判断的方法、排除方法。
1、 基线噪声：三种情况引起
a、 氘灯寿命。氘灯寿命到了时，基线不稳定有噪声产生。氘灯发射出的光的强度不稳定，就象日光灯寿命终止时亮度在不断变化。计算一下使用的时间或看一下计时器即可判断。现象：基线呈或上或下的无规则变化。b、 检测池内有气泡。流动相流动时，引起微小气泡的抖动，光强随着变化（气体与流动相对波长的吸收度不同）。排除方法：将池子液体出口处用吸耳球的任何部位堵住，此时，压力显示会增加一点，气泡被压缩很小很小，然后突然松开，气泡会突然膨胀随液体流出，反复多次即可排除。c、 池子内污染。有微小的颗粒随流动相的流动在晃动，引起吸收值的变化。检查方法：取下池子，用吸耳球吹净池内的液体，在阳光下观察池内情况，必要时拆开清洗。污染物的来源大致是样品长期累积、柱填料流出等。以上三种情况可以这样进行判断：泵停止运转，分别观察参比值 R、测量值S的稳定性，方法是分别按下参比键、测量键不动，显示值在变化（R值和S值），可以判断氘灯是否有问题，寿命是否终止期到了。如果R值很稳定，S值不稳定（此时泵正常运转）则判断池体内有气泡或污染。
2、 基线漂移
a、 溶解在流动相中的气体在池体内突然减压，产生气泡（微小）逐渐增大，逐渐使吸收度改变引起漂移。排除方法同上述b。b、 环境温度变化较大，使仪器内的温度随之变化，电力工作点改变引起漂移。流动相、柱子随温度的变化也会引起漂移。应尽量减小温度的变化。c、 柱子长期大量不断的进样品，有些比较重的组份会慢慢不断的溜出，形成漂移，这时候需要对柱子进行清洗。流动相中加入缓冲液时，用完后冲洗不彻底，再开机时也会出现基线漂移的现象。*以上现象的判断必须保证积分仪、工作站等设备工作正常。
3、 检测器不能正常调零。
a、 器本身电路故障，如氘灯不启辉，调零键开关接触不上均可出现调零故障（外接调零试一下是否正常调零）。b、 池体污染严重，如石英片内外污物遮挡，使透过率大大降低，S值很小，调零电路无法进行工作。c、 流动相本身的质量问题，缓冲液配错成份均能引起S值的改变（举例）d、 氘灯寿命，能量降低、S值下降等引起不调零。但是绝大多数情况是基线不稳定。
4、 仪器灵敏度突然下降。
a、 检测波长旋扭是否指在所需要的波长上（有可能无意之中改变了波长的位置）。b、 流量是否正确。c、 积分仪、工作站工作情况是否正常（这种情况一般不易发生）。
五、仪器使用中应注意的几个问题。
1、 测量值S最佳的位置（即能量最强）调节：用手按住测量值键，逆时针方向调节至所需要的工作波长，记下显示的数值大小。然后再顺时针方向调至所需要的一个工作波长，记下显示的数值大小。记住显示数值大的那个调节方向，在今后工作中改变波长即可选用此种方式，这样能量较强，波长较准。这是因为传动机构机械加工组装差别引起不一致性，所以需要找出方向。
2、 紫外检测器不要频繁的开机、关机。氘灯据有关资料介绍，每启辉一次，寿命就要降低，大约是正常工作时的2&3小时的时间。在开机时，氘灯灯丝由常温状态突然升高到几百度，灯丝表面的电子发射物质会不同程度的脱落一点（温度突然变化），久而久之，降低了寿命，就象日光灯一样不能反复开关。短时间不工作时，不要关机，可以把泵停止工作，节省流动相。
六、池体的清洗。
&&&用较宽的螺丝刀，逆时针旋转不压帽拆下来，取出石英片，聚四氟乙烯垫片，清洗干净。用注射器将池体内孔里冲洗干净，即可。安装时，先用手将压帽旋进去与池体成一平面后，在用螺丝刀扭紧。这样防止石英片未进入槽内，压碎石英片。
七、氘灯的更换及调整方法。
&&&波长旋转到254nm处，左手按住测量键不放，右手戴上较厚的线手套（氘灯外壳温度可达300摄氏度），左右、上下调节氘灯的位置（要缓慢地进行）使显示值最大，最后扭紧螺丝即可。*注意，灯的紫外线发射孔周围最好全部在上机前用绸布擦洗干净，不留任何的指纹及污物，否则影响光的能量。
八、输液管翻边的方法。
&&& 使用专用的翻边器。
&日期：日 - 来自[]栏目
　　氨基柱是同时可以用于正相条件和反相条件的这一点很多用户都已经知道；但是要注意到的是：正相溶剂和反相溶剂往往是不互溶的，对这一点的忽略可能会带给使用者一些麻烦。　　对于新购买到的柱子，首先请注意打开分析测试说明书，了解柱子的保存溶剂。如果保存溶剂与你将要使用的流动相极性不同不会互溶，请先用异丙醇过渡。过渡过程中注意因异丙醇粘度较大，会导致柱压很高，适当调低流速即可。如果要使用的流动相中还含有缓冲盐类，建议在用分析流动相之前，先用不含缓冲盐的同比例流动相过渡，这样可避免缓冲盐在分析柱内的析出。柱效检测：&&& 我用于判断一个用户是否有经验的指标之一，是用户是否习惯配制一些柱效检测标准溶液。说到柱效检测，我可以向大家提供一个方法，而且很通用，你也可以用同样的标准溶液和流动相来检测硅胶柱和氰基柱。流动相：10％乙酸乙酯＋90％正己烷 流速1.0标准溶液：乙苯（如乙苯找不动就用甲苯代替呗）＋苯甲酸甲酯检测波长254nm&&& 这个方法特别适用于新购柱子（新购柱子往往保存在正相溶剂中）时即进行检测，如有问题，可及时与供应商沟通。也适合在柱子在准备放置相当长一段时间之前进行充分清洗后进行检测作为记录留档。在平常的使用过程中，如果分析物是固定重复的，我们当然可以从对分析物的分离分析情况来作出判断；但如果分析物和分析条件不同时，定期检测柱效可以避免柱效下降导致分离不佳再分析查找原因这样浪费人力物力的过程。不过特别要注意的是，当氨基柱（或氰基柱）在反相条件中使用时，如用该条件检测，请注意流动相的换相过渡问题。氨基柱的使用：&&& 需要注意的是，氨基柱的键合官能团氨丙基要比C18,C8柱的键合官能团C18,C8要容易水解，所以首先要做好其使用寿命稍逊的心理准备，特别是当你的使用条件是反相条件下时。&&& 反相条件下使用时，要特别注意控制PH值范围，PH值越低越有发生水解的危险，流动相中水的比例越高当然也越有发生水解的危险。所以，在使用后以及准备长时间放置该柱时，必要的清洗和将氨基柱保存于纯的有机溶剂中是很好的保养措施。&&& 有一种情况是，当使用氨基柱进行酸性物质如果汁的分析时（分析其中的糖份），酸性物质的存在意味着质子的存在，可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化，导致使用一段时间后对于某些类的分析物保留性质有所改变或表现在柱效下降。这时，Kromasil专家所给的建议是：用5-10倍的柱体积的含0.5- 1.0％NH3的50-50乙腈-水溶液冲洗该柱（冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨），之后再进行分析这类酸性分析物时建议在流动相中略微添加少许氨如0.1％。氨基柱的清洗&&& 简单说起来，正相条件下使用的氨基柱你就参照硅胶柱的清洗方法；反相条件下使用的氨基柱你就参照C18的清洗方法。平时在正相条件下使用：&&& 首先用50倍柱体积的异丙醇清洗，因异丙醇粘度较大可适当放低流速；之后，用50倍的甲醇清洗；之后，用异丙醇过渡回到平常使用的正相流动相，即可。平时在反相条件下使用：&&& 缓冲盐应及时冲洗，以及不能直接用纯甲醇冲洗缓冲盐等，属常识就不作特别交待了。用50倍纯甲醇冲洗；之后，用异丙醇过渡后，用二氯甲烷冲洗色谱柱；之后，再用异丙醇过渡回来到甲醇条件下。这些清洗方法，主要是针对当样品中有杂质逐步吸附累积到填料上时的处理方法，色谱柱表现行为为诸如柱压增高柱效降低等LUNA氨基柱的使用方法1.氨基柱既可以正相使用，也可以反相使用，但是要注意到的是：正相溶剂和反相溶剂往往是不互溶的，正常情况新氨基柱保存在正相环境中，例如LUNA氨基柱保存在正己烷-乙腈（99：1）中。2. 正相使用2.1&&& 新柱子可直接用流动相。推荐先用正己烷-乙腈（99：1）以0.5ml/min的流速冲10倍柱体积，再根据流动相选用极性相近的氯仿或二氯甲烷以相同的流速冲10倍柱体积，最后换成流动相。2.2&&& 正相使用时，不宜分析含醛基、羰基的化合物，不可用于还原糖的分析；流动相要彻底脱气，并不得含有羰基化合物和过氧化物（质量不好的乙醚、四氢呋喃含有少量）。2.3 任何时候更换流动相时都要确保新流动相与柱子原保存液可互溶。3 反相使用3.1&&& 先用正己烷-乙腈（99：1）以0.5ml/min的流速冲10倍柱体积，再依次以相同的流速相同的用量用氯仿、异丙醇、甲醇、甲醇-水（50：50）冲柱子。3.2&&& 以0.5ml/min的流速用30倍柱体积的pH11.0的氢氧化钠（LUNA）水溶液冲柱子（注意pH值切不可超过11.0），立即用水（0.5ml/min的流速，30倍柱体积）冲洗，再换成流动相。3.3 &&& 配制流动相时，应各组分分别量取，比例较小的组分要精密量取，需调pH值时要精密到0.1。3.4&&& 反相条件下使用时，要特别注意控制pH值范围，pH值越低越有发生水解的危险，流动相中水的比例越高当然也越有发生水解的危险。最理想的pH范围在pH3.0-7.03.5&&& 如果要使用的流动相中还含有缓冲盐类，建议在用分析流动相之前，先用不含缓冲盐的同比例流动相过渡，这样可避免缓冲盐在分析柱内的析出。3.6&&& 有一种情况是，当使用氨基柱进行酸性物质的分析时，酸性物质的存在意味着质子的存在，可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化，导致使用一段时间后对于某些类的分析物保留性质有所改变或表现在柱效下降。建议：用5-10倍的柱体积的含0.5-1.0％NH3的乙腈-水(50:50)溶液冲洗该柱（冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨），之后再进行分析这类酸性分析物时建议在流动相中略微添加少许氨如0.1％。4&&& 色谱柱的冲洗：简单说起来，正相条件下使用的氨基柱就参照硅胶柱的清洗方法；反相条件下使用的氨基柱就参照C18的清洗方法。5 色谱柱的保存5.1 &&& 正相使用时，将柱子冲洗干净后，用正己烷-乙腈（99：1）保存。5.2&&& 反相使用时，如短期不用，可用甲醇或乙腈保存；长期不用时需将甲醇依次用异丙醇、氯仿置换，最后用正己烷保存。6 色谱柱的再生6.1 &&& 方案1：依次用甲醇、异丙醇、氯仿、正己烷、氯仿、异丙醇、甲醇冲柱子（各以0.5ml/min的流速，20倍柱体积），再换流动相。这些清洗方法，主要是针对当样品中有杂质逐步吸附累积到填料上时的处理方法，色谱柱表现行为为诸如柱压增高柱效降低等。6.2&&& 方案2：NH2柱用于反相条件时，NH2键会水解，尤其是在该柱子pH范围以外，在极端酸性和碱性条件下柱寿命会下降很快，如果在这个条件下使用需要清洗一下，需要用10倍柱体积溶液冲洗，如下：95％水/5％乙腈THF四氢呋喃95％乙腈/5％水并保持95％乙腈/5％水继续冲洗，以低流速0.2-0.5mL/min过夜冲洗。6.3&&& 方案3：柱子使用一定时间后，柱效下降，老化，也可清洗一下柱子恢复柱性能,清洗时依次用10倍柱体积的下列溶液冲洗：95％水/5％乙腈THF四氢呋喃95％乙腈/5％水再走流动相即可日期：日 - 来自[]栏目
&&& 反相柱填料主要以硅胶为基质，在其表面键合非极性的十八烷基官能团（ODS）称为C18柱，其它常用的反相柱还有C8,C4,C2和苯基柱等。另外还有离子交换柱，GPC柱，聚合物填料柱等。本文重点介绍反相色谱柱的选择和使用：一、反相色谱柱的选择1．柱子的PH值使用范围&&& 反相柱优点是固定相稳定，应用广泛，可使用多种溶剂。但硅胶为基质的填料，使用时一定要注意流动相的PH范围。一般的C18柱PH值范围都在2-8，流动相的PH值小于2时，会导致键合相的水解；当PH值大于7时硅胶易溶解；经常使用缓冲液固定相要降解。一旦发生上述情况，色谱柱人口处会塌陷。同样填料各种不同牌号的色谱柱不尽相同。如果流动相PH较高或经常使用缓冲液时，建议选择PH范围大的柱子，例如戴安公司的Acclaim柱PH 2-9或Zorbax的PH 2-11. 5的柱子。2．填料的端基封尾（或称封口）&&& 把填料的残余硅羟基采用封口技术进行端基封尾，可改善对极性化合物的吸附或拖尾；含碳量增高了，有利于不易保留化合物的分离；填料稳定性好了，组分的保留时间重现性就好。如果待分析的样品属酸性或碱性的化合物，最好选用填料经端基封尾的色谱柱。二、液相色谱柱的使用&&& 色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。在做柱性能测试时要按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同。1、样品的前处理a、最好使用流动相溶解样品。b、使用预处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不 可逆吸附的杂质。c、使用0.45&m的过滤膜过滤除去微粒杂质。2、流动相的配制&&& 液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相具备以下的特点：a、流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。b、流动相与样品不产生化学反应c、流动相的黏度要尽量小，以便得到好的分离效果；降低柱压降，延长泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。e、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。 f、在流动相配制好后，一定要进行脱气。除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。3、流动相流速的选择&&& 因柱效是柱中流动相线性流速的函数，使用不同的流速可得到不同的柱效。对于一根特定的色谱柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。对内径为4.6mm的色谱柱，流速一般选择1ml／min，对于内径为4.0mm柱，流速0.8ml／min为佳。当选用最佳流速时，分析时间可能延长。可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间(如使用反相柱时，可适当增加甲醇或乙腈的含量)。注意：a．含水流动相最好在实验前配制，尤其是夏天使用缓冲 溶液作为流动相不要过夜。最好加入叠氮化钠，防止细菌生长。b．流动相要求使用0.45 &m滤膜过滤，除去微粒杂质。c．使用HPLC级溶剂配制流动相，使用合适的流动相可延长色谱柱的使用寿命，提高柱性能。三． 色谱柱的维护1. 色谱柱的平衡 &&& 反相色谱柱由工厂测试后是保存在乙腈/水中的。新柱应先使用10－20倍柱体积的甲醇或乙腈冲洗色谱柱。请一定确保您分析样品所使用的流动相和乙腈/水互溶。 每天用足够的时间以流动相来平衡色谱柱，您就会在处理问题方面获得最大的&补偿&，而且您的色谱柱的寿命也会变得更长！操作步骤：a. 平衡开始时将流速缓慢地提高，用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线（缓冲盐或离子对试剂流速如果较低，则需要较长的时间来平衡）b. 如果使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用纯水&过渡&即每天分析开始前必须先用纯水冲洗30分钟以上再用缓冲盐流动相平衡； 分析结束后必须先用纯水冲洗30分钟以上除去缓冲盐之后再用甲醇冲洗30分钟保护柱子。2． 色谱柱的再生&&& 长期使用的色谱柱，往往柱效会下降（柱子的理论塔板数减低）。可以对色谱柱进行再生，在有条件的实验室应使用一个廉价的泵进行柱子的再生。　 建议用来冲洗柱子的溶剂体积色谱柱尺寸 柱体积 所用溶剂的体积125-4mm 1.6ml 30ml250-4 mm 3.2ml 60ml250-10mm 20ml 400ml选择再生方法：极性固定相（如Si，NH2* ，DIOL基色谱填料）的再生：正庚烷&氯仿&乙酸乙酯&丙酮&乙醇&水**非极性固定相（如反相色谱填料RP－18，RP－8，CN等）的再生： 水&乙腈&氯仿（或异丙醇）&乙腈&水注意：a. 在对NH2改性的色谱柱进行再生时，由于NH2可能以铵根离子的形式存在，因此应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗，然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。 b. 0.05M稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱，如果简单的用有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质，在水洗后加用0.05M稀硫酸冲洗非常有效。3. 色谱柱的维护 a．使用预柱保护分析柱（硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度）b．大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2－7.5，尽量不超过该色谱柱的pH范围c．避免流动相组成及极性的剧烈变化d．流动相使用前必须经脱气和过滤处理e．如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕柱子冲洗干净，并保存于甲醇或乙腈中f．氯化物的溶剂对其有一定的腐蚀性，故使用时要注意，柱及连接管内不能长时间存留此类溶剂，以避免腐蚀。日期：日 - 来自[]栏目
色谱柱的平衡和使用 &&& 反向色谱柱在经过出厂测试后是保存在甲醇（或乙腈）/水中的。请一定确保您所使用的流动相和甲醇（或乙腈）/水互溶，由于色谱柱在运输过程中可能会干掉，因此在用流动相分析样品之前，应使用分10-20倍的体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱：如果您所使用的流动...
分享这篇日志的人也喜欢
热门日志推荐
人人最热标签
分享这篇日志的人常去
北京千橡网景科技发展有限公司：
文网文[号··京公网安备号·甲测资字
文化部监督电子邮箱：wlwh@··
文明办网文明上网举报电话： 举报邮箱：&&&&&&&&&&&&
请输入手机号，完成注册
请输入验证码
密码必须由6-20个字符组成
下载人人客户端
品评校花校草，体验校园广场