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【推荐】关于ELISA试剂盒
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这个帖子发布于6年零236天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
最近，站上关于ELISA试剂盒的讨论帖子非常多，今天也发表一下自己的一些看法，对ELISA的见解有不对的地方，希望指正或者直接拍砖。其实很多客户上当受骗都和网络有关系，如果你不是在百度或者google上找试剂，而是认真看看帖子，可能会改变你原来的选择。
首先，谈一下市场。首先RnD和Bender等一些知名品牌的ELISA试剂盒还是很值得信赖的，也得到了市场的认可，特别是RnD的盒子，我们卖的很好，就是价格好贵，经费不是很充裕的实验室难消费的起。国内的厂家，以前我读书的时候，晶美做的很好，也受到了客户的好评，后来听说，因为资金链的问题，解散了，真是可惜。现在我们市场推荐给客户的都是上海吉泰和深圳达科为的盒子，质量在灵敏度上和RnD的盒子还是有很大差距，但是有一点是可以肯定的，盒子反映的结果是公正客观的。还有一个缺点就是这两个厂家可供选择的盒子种类比较少，主要集中在炎症细胞因子上。
第二，谈一下如何灵活应用ELISA这个检测方法以及如何去挑选ELISA试剂盒。ELISA这个方法的原理，大家都很清楚，网上的资料一大堆。可真正用起来的时候，有时候就有点犯糊涂，我谈一下自己的理解。
1、有些客户会用OVA（卵清蛋白）做一些哮喘，过敏性肠炎的模型，后来会检测粘膜特异性的sIgA以及血清里面IgG，IgE等指标。当客户向我咨询购买这几个指标的盒子的时候，我很肯定地说这些指标的检测要你自己特制，不会有商品化的盒子出售的。当baidu，google一下，页面出来大量的商品化的盒子，千篇一律的说明书时候，我真的是蒙了，我怀疑自己跟不上时代了。我这里不去评论这些盒子的真假，我仍然建议做这些检测指标的战友，选择sigma公司V级别的OVA，然后用这个来造模，自己包板摸条件，用OD值来比较抗体含量的变化。
2、对于一些小分子的检测，比如前列腺素、糖皮质激素的检测，我的理解是要用竞争法ELISA去检测，也要购买采用这个方法的盒子。一般细胞因子的检测，都是采用常规的夹心法ELISA检测，因为因子分子量比较大，一般10几个KD左右，很容易找到两个或者多个抗原表位。而小分子很难找到两个不同的表位，也就决定了包被抗体和检测抗体无法同时结合小分子并固相化。解决方案就是酶标板上包被二抗，每个孔加入一定量的酶标的小分子，然后加样品，再加不带标记的检测抗体，显色底物。样品的目的小分子的含量越高，吸光度越低。
3、对于胰岛素的检测，我还是推荐millpore 旗下LInco公司的检测试剂盒，不管是放免还是ELISA，据说专利权在他们手中。 最近看了资料，瑞典Mercodia公司的胰岛素检测试剂盒也是得到市场的认可的。对于ox-ldl的检测，Mercodia公司也是很牛的。
4、NO的检测，一般都是采用经典的Greiss法，现在市场上竟然有NO ELISA试剂盒，真是彻夜未眠也搞不明白。还有做氧化应激指标MDA的检测，我还是推荐大家用碧云天或者进口的检测试剂盒，而不是ELISA试剂盒。
5、我主要的客户是医学院校，做实验面向的种属主要是人，大鼠和小鼠，现在市面上鸡、牛、马、羊、兔各种指标的盒子都有售，真不知道这些抗体是怎么来的，。据我所了解，这些炎症指标还是有很大种属特异性的。
6、ELISA检测方法简单，灵敏度高，我个人觉得ELISA最适合检测血清或者培养上清的细胞因子、胰岛素、激素等分泌型的小分子蛋白的定量检测；病原体抗原的定性与定量；评估自己制备的血清抗体的效价等。好多客户有个误区，拿来一个指标就想当然地尝试用ELISA去检测，我还是建议多动脑，该检测活性的检测活性，该做western的做western。
第三 谈一下上海吉泰的ELISA检测试剂盒，厂家是上海依克赛，应用这个公司的产品，很多客户也发表了SCI文章，如果我没有记错的话，mouse TGF-beta1 这个盒子发表在nature immunology上面，25分多的杂志。这个厂家产的盒子，是我公司最主推的盒子，给我的感觉是灵敏度不够高，个位数pg级达不到，血清细胞因子的检出率比较低，在估计范围内。可能随着国内研发技术的不断改进，我想应该会慢慢解决这个问题的。
先写这么多，也是糊里糊涂，希望感兴趣的网友批评指正。如果哪位商家看到，也想和我们一起研发生产，也可以联系我，我个人力量太薄。
不知道邀请谁？试试他们
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jim0347 编辑于
收起全部有料回复
上海吉泰、达科为、欣博盛这3个品牌的国产elisa试剂盒还是比较值得信赖的，虽然检测灵敏度会差点，但好歹检测出来的结果是真实的结果，另外就是这三家的elisa试剂盒的产品线都比较少，不外乎几个因子等常见指标的。丁香通商户里上海N多公司、武汉N多公司宣称的几万条，几千条产品线的，真是什么都敢写到产品线里啊，反正除了极其廉价的显色、终止是真的，恐怕试剂盒里就没真的了。打了个ADL,GBD，现在商家学乖了，不写品牌了，换个五颜六色的包装盒，跟手机盒似的，现贴标签，只要你叫上名来，他啥都有，不外乎一张不干胶贴纸嘛。麻烦几位斑竹老大，仔细看看那些个商家的产品线，他要是进口分装的，你让他说分装哪个的，他要是自己多的，麻烦聊聊技术问题吧，服了这帮人，乌烟瘴气的elisa市场。
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鱼小 编辑于
丁香园版主
如果你能编辑一下，好好的排个版，那会非常的不错。
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正在困惑当中啊，想检测血清中的IGF-1,2，还有GH，Leptin这些激素，不知道用什么好。大多数是用Elisa吧，感觉有点小贵，如果效果好，价钱多花点也就算了，就怕买了回来检测不出什么好的效果。或者误差太大之类的。正四处询问过程中呢。
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谢谢您的介绍。
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想知道去甲肾上腺素，肾上腺素ELISA的检测原理。有没有战友能提供文献Westermann J, Hubl W, Kaiser N, Salewski L, Simple, rapid and sensitive determination of epinephrineand norepinephrine in urine and plasma by non-competitive enzyme immunoassay, compared withHPLC method. Clin. Lab., 48: 61-71 (2002)
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国内ELISA做的最好的应该是上海吉泰，其次是达科为，这两个公司最大的特点就是质量有保证，灵敏度和特异性都很好，不像其它国产的一味低价，但是效果很差，根本测不出来东西，大家要避免上当
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很有个人见解啊顶一下
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写的非常好，顶一下，强烈推荐给初级做实验的人，别盲目啥玩意都想用elisa方法检测出来，多查查国外文献才是。这些乱七八糟的需求部分助长了elisa假货市场的泛滥，尤其是二线市场，几乎哪个实验室都能找到假elisa试剂盒
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上海吉泰、达科为、欣博盛这3个品牌的国产elisa试剂盒还是比较值得信赖的，虽然检测灵敏度会差点，但好歹检测出来的结果是真实的结果，另外就是这三家的elisa试剂盒的产品线都比较少，不外乎几个因子等常见指标的。丁香通商户里上海N多公司、武汉N多公司宣称的几万条，几千条产品线的，真是什么都敢写到产品线里啊，反正除了极其廉价的显色、终止是真的，恐怕试剂盒里就没真的了。打了个ADL,GBD，现在商家学乖了，不写品牌了，换个五颜六色的包装盒，跟手机盒似的，现贴标签，只要你叫上名来，他啥都有，不外乎一张不干胶贴纸嘛。麻烦几位斑竹老大，仔细看看那些个商家的产品线，他要是进口分装的，你让他说分装哪个的，他要是自己多的，麻烦聊聊技术问题吧，服了这帮人，乌烟瘴气的elisa市场。
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鱼小 编辑于
谢谢楼主！这阶段正在找能够检测犬体内的甘精胰岛素的试剂盒，酶联免疫，但是找了一圈都没谱，想请教下楼主能否推荐下？甘精胰岛素做为试验药皮下注射进犬体内。万分感激！
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谁可以告诉我，现在各大高新区实验室用的那些试剂盒多一点，不是医院用的ELISA试剂盒，谢谢！
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RnD Bender 多一些；国产的 吉泰 达科为 都可以
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独自 谁可以告诉我，现在各大高新区实验室用的那些试剂盒多一点，不是医院用的ELISA试剂盒，谢谢！我觉得假货应该更多一些，
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实用的好贴，我也正在做实验找试剂盒，看了这篇文章，觉的很实用，感谢作者的分享哦 。就是听说现在RND进口分装的很多都不真，有朋友实验室买了6个，只有3个做了出来。另外想请教下战友们 做大鼠结肠的VEGF免疫组化，希望朋友们推荐一下可靠又实惠点的试剂盒。小女子先谢过le
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遥杏林 编辑于
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呵呵，这个帖子很好嘛。没想到会被这样。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。
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分装的盒子，有些牌子的还是比较真实的，有些完全是搞假。
好像都有些 SCI 文章引用，质量应该还可以吧。
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鱼小 编辑于
素年锦时 正在困惑当中啊，想检测血清中的IGF-1,2，还有GH，Leptin这些激素，不知道用什么好。大多数是用Elisa吧，感觉有点小贵，如果效果好，价钱多花点也就算了，就怕买了回来检测不出什么好的效果。或者误差太大之类的。正四处询问过程中呢。大家都有你这种想法的，想钱花的有所价值，检测出结果，可以发布一下
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鱼小 编辑于
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帖子沉了，自己顶一下
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看到这个帖子真开心，我马上要检测大鼠的胰岛素、瘦素、胃饥饿素和血糖了，大家说的吉泰、达科为可以信赖吗？我师兄用的是其他的国产货，效果非常不好，我正愁我用什么公司的呢。
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本来DSL公司激素类elisa产品很好，种类又多价格还相当便宜，只是几年前被某Y给收购后停产了好多产品，从此就只能去其他公司买贵很多的盒子了，太可惜了。什么丹麦、瑞典、奥地利、芬兰这些地方的试剂盒就更贵了哪个不要10000大洋，以这些国家的高福利、高消费自然不算什么，到我们这就只能望洋兴叹了(特别是个别只有某公司才有的产品)。。。
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我刚去那几家公司看了一下，怎么没有我要的ELISA试剂盒啊？
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1楼说了他们只有常见的细胞因子类elisa。哎，测大鼠，打折后平均一个5000乘以4等于20000，所谓的分装市场能不好么
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大鼠的胰岛素，吉泰还是有的，我还没有验证过质量怎么样，就不发表评论了。另外两个指标看看进口的吧。
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鱼小 编辑于
我想买人糖盏蛋白的ELISA试剂盒，进口的就查到TAKARA的，很贵，国产的倒是有几个，不知哪个可信？华美的怎么样？
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不知各位对Promega的试剂盒有什么看法，现在国外做实验用的多吗？检测灵敏度高吗？
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丁香园准中级站友
这个贴很有用，马克
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马克，，，，，，，，
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关于丁香园|/|/|/|/|/|
//|//|//|//|//|
【讨论】在ELISA试剂盒方面有多年经验，欢迎大家共同讨论在ELISA实际过程中
简简单单2006 wrote:你这样做可以，但是要先封闭，再加样品，也可以自己标记抗体多克隆抗体包被---封闭--加样品(血清)----单克隆抗体－HRP--洗涤--显色--终止---读数单克隆抗体包被---封闭--加样品(血清)----多克隆抗体－HRP--洗涤--显色--终止---读数多谢了！！各位大侠，本人目前刚刚从事ELISA试剂盒研发工作，有些疑问想请教一下：1 请问为什么有的试剂盒要求反应过夜，而有的则只需要1h？反应时间不同是由什么决定的呢？2 稀释的抗体如何保持其稳定性？3 显色体系（加H2O2后）的稳定性如何保持？4 如何克服批间差异较大的缺陷？或者可否提供一些试剂盒开发方面的资料？希望不吝赐教！谢谢！米巴格里鲁 wrote:各位大侠，本人目前刚刚从事ELISA试剂盒研发工作，有些疑问想请教一下：1 请问为什么有的试剂盒要求反应过夜，而有的则只需要1h？反应时间不同是由什么决定的呢？2 稀释的抗体如何保持其稳定性？3 显色体系（加H2O2后）的稳定性如何保持？4 如何克服批间差异较大的缺陷？或者可否提供一些试剂盒开发方面的资料？希望不吝赐教！谢谢！这个实际和试剂盒研发时确定的反应工艺有关，一般37度1小时足够了。稀释道抗体的话，一般都会在稀释液中增加一些无关蛋白，使稀释液有一定的蛋白浓度，也可以添加一些蛋白稳定剂，但关键还是看抗体本身的稳定性怎样。一般目前国内的显色系统都是将TMB（OPD）和过氧化氢放开保存的。批间差异大的问题，第一就是要原料质量过关，原料的批和批之间差异不能太大，还有就是用于生产的工艺要简单，重复性好，这样可以尽量减少批间差异你好，我现在也在做一个ＥＬＩＳＡ试剂盒，但是测出的血清的ＯＤ值经常出现低于０管的情况，有人说是基质效应，但是我不知道怎么觉得，望您帮帮我谢谢！谢谢简简单单2006战友的回复！还有几个问题请教：1 在稀释抗体中加入的蛋白稳定剂是什么？2 在试剂盒的研发中，您认为什么是最重要的？是抗体吗？3 ELISA检测的灵敏度是由抗体的特性决定的，那么有否可能通过优化各种条件使得成型的试剂盒的灵敏度得到较大的提高？4 显色系统中为什么不用OPD呢？它比TMB灵敏呀？再次感谢简简单单2006战友的关注！请斑竹给他加分！米巴格里鲁 wrote:谢谢简简单单2006战友的回复！还有几个问题请教：1 在稀释抗体中加入的蛋白稳定剂是什么？2 在试剂盒的研发中，您认为什么是最重要的？是抗体吗？3 ELISA检测的灵敏度是由抗体的特性决定的，那么有否可能通过优化各种条件使得成型的试剂盒的灵敏度得到较大的提高？4 显色系统中为什么不用OPD呢？它比TMB灵敏呀？再次感谢简简单单2006战友的关注！请斑竹给他加分！1）一般就先用一些无关蛋白，如BSA等，如果不行可以添加少量甘油，如果还不行则需购买专门的稳定剂了。2）原料最重要，只要是原料无论抗体和抗原都很重要。3）检测的灵敏度主要是由原料决定的，但可以通过调整浓度以及其它条件进行改善。4）现在的国内商品试剂盒都使用TMB了，TMB实际上比OPD灵敏，相对来说OPD比较稳定，但是OPD有致癌性。风雨の人生 wrote:你好，我现在也在做一个ＥＬＩＳＡ试剂盒，但是测出的血清的ＯＤ值经常出现低于０管的情况，有人说是基质效应，但是我不知道怎么觉得，望您帮帮我谢谢！这要看你具体低多少了，如果低的不多的话，的确可能是基质效应我想做夹心法测抗原最低检出限，因为只是初步探索，而且是新手，所以想选择一些便宜又容易出结果的抗原抗体进行验证性实验，请问选择何种抗原抗体比较合适？还有想请问的就是传染病方面的ELISA，比如乙肝表面抗原等，一般的实验室是否不允许做？谢谢！FASTLINKR酶标记试剂盒 产品特点：戊二醛法标记繁琐，标记产物不均一，标记率低，反应条件不易控制，聚合体较多易产生空间位阻从而导致抗原抗体失活，造成大量的抗原抗体浪费。过碘酸钠法（或高碘酸钠法）同样是操作繁琐，条件较为强烈，易导致抗原抗体失活，标记率低，多聚体较多，且本底高。本酶标记试剂盒采用独特的偶联剂，可以用来标记抗原或抗体，标记方法简便快速，抗原抗体用量少，标记周期短，标记全过程仅需2个小时；标记产物均一，多聚体少，从而最大程度保持抗原抗体的活性；标记完后无需透析即时使用，标记率高，可大于95%；本底低；试剂内含有辣根过氧化物酶和抗原抗体的稳定剂，标记同时并对抗原、抗体及酶进行稳定化处理。适用范围：适用于辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶（AP）、β半乳糖苷酶以及亲和素的标记包装规格：5mg ×10
168元 5mg ×20
258元5mg ×50
568元试剂组成：REAGENT Ⅰ
抗原、抗体、HRP等标记酶的缓冲溶液REAGENT Ⅱ
偶联剂溶媒 REAGENT Ⅲ
偶联剂（5mg/份）REAGENT Ⅳ
终止液操作步骤（以HRP为例）：
1. 称取5mg HRP；按照抗原与HRP摩尔比为1：1，抗体与HRP摩尔比为1：3来准备抗原或抗体；将二者混合，然后加入REAGENTⅠ 300 μl，充分溶解，混匀。2. 取一份REAGENT Ⅲ（偶联剂），加入50 μl REGENT Ⅱ，充分溶解混匀。3. 将第1步的酶与抗原（或抗体）混合液和第2步的偶联剂溶液混合，混匀，4℃冰箱过夜或室温放置2～4小时(4℃过夜的标记率较高)。4. 加入REAGENT Ⅳ 100 μl，混匀、放置一小时，终止反应。5. 2000 rpm/min离心5分钟，取上清。为了避免材料损失，可以向沉淀中再加入1ml REAGENT Ⅰ，重悬沉淀，离心，取上清。合并两次上清液，即为酶标物。6. 酶标物加50%甘油（或BSA）及防腐剂，4℃保存备用。注：如果抗原（或抗体）为溶液状态，按比例加入HRP溶解混匀后，以1M盐酸或碳酸钠溶液调pH值为7.5～8.0，然后按步骤2，3，4，5，6操作。注意事项：1. 抗原抗体如果是存在于硫酸铵、甘氨酸或Tris缓冲液中，需以PBS（pH 7.6）缓冲液充分透析，也可以超滤离心管进行超滤，以除去过多盐类。2. 务必在抗原（或抗体）和所标记的酶充分溶解混匀后再加偶联剂。3. REAGENT Ⅲ偶联剂于-20℃保存，其他试剂4℃保存。4.本试剂仅用于科学研究，体外诊断试剂；禁用于其他用途，如食品、化妆品、药品等等保质期：一年（见瓶签）
Fastlink酶标记试剂盒（A型）.pdf (166.27k)简简单单2006 老师:
你好!我现在在做间接双抗体夹心ELISA法,即兔源多抗包板 4度过夜,
5%BSA封闭 4度过夜,
加待测抗原(人血清或兔血清) 37度1h,
鼠源单抗检测 37度 1h,
羊抗鼠IgG-HRP酶标二抗 37度 1h,
底物显色 5min
已经做了1个多月的棋盘滴定.但是PBS空白对照经常有颜色.如果没有颜色时候 结果比较不是很有规律性,曾经有几次测出同一孔p/n比值&2.1,以此孔条件检测阳性和阴性血清,肉眼观测阴性和阳性有区别,但阴性本底教高.想降低阴性本底.
最近多次结果pbs空白对照均有颜色,实验无法进展下去,请老师帮忙推测下问题原因,有无解决办法
也出现过显色液加过10分钟后整块板都没有颜色(所有条件一样), ;(这个是怎么回事啊?PS:我洗板都是5min/次,4次,拍板也很用力(pbs老有颜色,总担心是自己没洗好),会不会将包被的蛋白给洗掉??我稀释液用pbs ph7.4,有朋友说用pbst tween-20 0.5%做稀释液更好,会降低非特异性反应,是不是可以采取下?实验老是不稳定,头脑有点晕,所以发的帖子逻辑也有点乱,希望包涵!请问简简单单2006，我现在碰到如下的问题感到比较困惑：两个ELISA检测试剂盒（A和B）都是可定量和定性检测某病原体IgG的。A试剂盒的Cutoff值定为15国际单位，而B试剂盒的Cutoff值定为50国际单位。在这种情况下，15-50国际单位的样本怎样确定是阳性还是阴性？因为我现在要用A试剂盒来评估B试剂盒。另外，强阳性样品的IgG定量是不是应该一致？因为A试剂盒检测15国际单位的OD450nm为0.5左右，而B试剂盒检测50国际单位的OD450nm为0.3左右。期盼您的解答！！简简单单阁下，请对IgM作为检测试剂用于建立ELISA方法的可行性、优缺点等作一评论。小弟现正在做一种定量检测乙肝两对半的仪器，老板想知道低浓度核心抗体诊断的意义，请问有哪位有相关资料，不胜感激！简简单单2006老师：我是做ELISA的新手，我现在要用单克隆抗体做水貂犬瘟热的ELISA试验，由于没有做过，这些天查资料后有些想法，有两个方案，请您指教一下。但是间接ELISA的抗原，我没有确定，不知道用什么好。下面是我的间接ELISA和双抗夹心ELISA。间接ELISA：第一步：包被抗原：用包被缓冲液稀释抗原至最适浓度，加于微反应板每个凹孔中,4℃过夜或37℃水浴2～3小时,贮存冰箱第二步：洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液（含0.05%吐温-20）洗3次，每次5分钟第三步：加被检标本：每凹孔加入用含有0.05%吐温-20的稀释缓冲液稀释的被检血清各0.2ml，37℃，作用1～2小时第四步：洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液（含0.05%吐温-20）洗3次，每次5分钟第五步：加入酶结合物：每凹孔加入稀释缓冲液稀释的辣根过氧化物酶－单克隆抗体结合物0.2ml 37℃作用1～2小时第六步：洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液（含0.05%吐温-20）洗3次，每次5分钟第七步：加入0.2ml底物溶液于每个凹孔,(O.P.D)，室温作用30分钟（另作一空白对照，0.4ml底物加0.1ml终止剂）。第八步：加终止剂：每凹孔加2M H2SO4 0.05ml。第九步：观察记录结果：用酶标比色计测定（O.P.D用492nm）O.D值。双抗夹心ELISA：第一步：包被抗体：用包被缓冲液稀释单克隆抗体至最适浓度，每凹孔加0.3ml，4℃过夜，或37℃水浴3小时，贮存冰箱第二步：洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液（含0.05%吐温-20）洗3次，每次5分钟第三步：每凹孔加入0.2ml用稀释缓冲液稀释的含抗原的被检标本（请问能否用血清），37℃作用1～2小时。第四步：洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液（含0.05%吐温-20）洗3次，每次5分钟第五步：加入0.2ml用稀释缓冲液稀释的辣根过氧化物酶标记特异性抗体（兔抗貂IgG）溶液（可否用多克隆抗体），37℃作用1～2小时或由预试实验确定作用时间。第六步：洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液（含0.05%吐温-20）洗3次，每次5分钟第七步：加入0.2ml底物溶液于每个凹孔,(O.P.D)，室温作用30分钟（另作一空白对照，0.4ml底物加0.1ml终止剂）。第八步：加终止剂：每凹孔加2M H2SO40.05ml。第九步：观察记录结果：用酶标比色计测定（O.P.D用492nm）O.D值我的邮箱是,QQ,注明ELISA即可，我每天在线，非常感谢！请教
自制夹心试剂盒可以很好的测标准参考品
测血清的时候od450值 非常高 在1.0
而且差别不大
把标准品融在阴性血清内 曲线值 1.5 -2.0 请问 如何才能去除血清干扰
使试剂能正常的测定血清各位前辈，
我想请问一下，怎么算出临界值和标准差的阿？还有它的标准曲线是依据什么画出来的阿？简简单单2006 :
你好.我现在要做测量人体血清和培养细胞上清液的IgA1浓度.准备用ELISA来做.但是市面上没有该类的试剂盒,需要我自己定购抗体做包被.我初做这方面的实验,很多具体问题不明白,特想向你请教.我的问题是:
1,我预计采用双抗体夹心法.定购抗体分别为:同一种属HRP标记和未标记的抗人IgA1,比如鼠抗人的IgA1,HRP标记鼠抗人的IgA1.这两种抗体合适吗??
2,我查了很多资料和公司,没有找到同一家公司生产的HRP标记和未标记的抗人IgA1.SBA有HRP标记鼠抗人的IgA1,但是没有未标记的鼠抗人的IgA1---SANTA有.我使用不同公司的两种抗体,有影响没有??
3,你知道哪里有IgA1的标准血清买吗???我一直没有查到.
4,自己包被做ELISA,需要注意哪些问题呢??
多谢帮助,不甚感激.我的EMIAL是:前辈：
你好，我在做ELISA时，底物的量称错了，多了10倍，我的底物用的是OPD,我想问一下，影响大吗？本人为新手，向高手请教一个问题。标准品经过双对数变换后为一条直线，经过检验raq=0.95,p&0.005,标准品可以嘛？我的elisa实验样品吸光值普遍低，且样品按5倍稀释，数值没有没有规律，忽高忽低,为什么？急!本人为新手，向高手请教一个问题。标准品经过双对数变换后为一条直线，经过检验raq=0.95,p&0.005,标准品可以嘛？我的elisa实验样品吸光值普遍低，且样品按5倍稀释，数值没有没有规律，忽高忽低,为什么？急!本人为新手，向高手请教一个问题。标准品经过双对数变换后为一条直线，经过检验raq=0.95,p&0.005,标准品可以嘛？我的elisa实验样品吸光值普遍低，且样品按5倍稀释，数值没有没有规律，忽高忽低,为什么？急!我现在刚毕业，就也入行抗体方面的工作了，主要做ELISA,经常联系，多多指教！QQ:（注明ELISA）！您好！我用ELISA试剂盒做FT3、FT4、TSH许多次结果会出现:⑴单项FT3↑；⑵FT3↑、FT4↑、TSH正常;⑶FT3↑、FT4↑、TSH↑请问：上述结果可靠吗？采用ELISA法定量的方法学可靠吗？请教简简单单2006老师：1、我现在准备自己标记抗体，用饱和硫酸铵法纯化的抗体用于标记，纯度一般能符合要求吗？2、我现在正在做一个双抗夹心检测抗原的试剂盒，目前处于原料可用性检验阶段。现在包被的抗体是自己用饱和硫酸铵法纯化的，方阵试验结果现实该抗体经纯化后1：2000稀释为最适包被浓度，方阵试验出现的峰也说明抗体的活性也较好，但就是检测抗原的灵敏度上不去，我分析有可能有两方面主要原因A：包被抗体和抗原的结合能力不够B：因为酶标抗体是自己纯化后自己标记的，可能存在标记不够确实或标记效率不高的情况，导致检测抗原的灵敏度上不去。您认为我这样的分析对吗？请您给我点意见，谢谢！3、能否提供一个比较标准的HRP标记方法？不胜感激！请教简简单单2006老师：
试剂公司提供的标准蛋白为重组蛋白，与病人血清检测的目的蛋白是否有差异，我用试剂公司提供的试剂盒怎么也检测不出病人血清的目的蛋白，郁闷啊！有人说两者的差异可能有影响，是吗？如果真是这样，我该怎么解决？很急想请教一下，包被elisa 板时 1%BSA封闭时加多少？是在37度烤干吗？
用的时候不用烤干吗？一抗必须用 碳酸盐缓冲也稀释吗？急
谢谢 ！！请教简简单单2006老师：试剂公司提供的标准蛋白为重组蛋白，与病人血清检测的目的蛋白是否有差异，我用试剂公司提供的试剂盒怎么也检测不出病人血清的目的蛋白，郁闷啊！有人说两者的差异可能有影响，是吗？如果真是这样，我该怎么解决？很急您好前辈:我准备做ELISA,用于检测IL-6,IL-1,TNF-A等因子,请帮忙指教流程,另外试剂购买情况也请指点.谢谢..CN你好前辈
我想用肝组织做免疫组化,因为血清不够.但是以前从来没接触过,不知怎么做,希望能给个详细点的介绍,非常感谢!!!!!!!!!!大侠 你好 我正准备做大鼠血清的ELISA,尚属菜鸟.试剂已购买,也看过说明书了.但仍是不太明白.尤其是样品稀释.请大侠指点,帮忙拟的操作方案.先谢过!楼主你好！　　我现在做ELISA试剂盒,有许多问题还不是很明白,想请问一下一般商业化的ELISA试剂盒检测抗原的都是什么方法,直接法可以吗?间接法也可以用于测抗原吗?对酶免不了解，请问一个基本的问题，如果我想用ELISA竞争法测定一种激素的水平，购买的商品试剂盒，是不是要专门标明是用做竞争法的呢？各位，我准备测一种抗体，需要自己包被抗原，是不是结果就不能画出标准曲线，得出具体的含量，只能粗略从光密度值进行比较。请指教，谢谢！我是一个新手，刚订了一个ELISA 试剂盒，做了十几个标本，测OD值均是负的，连标准品也是负的，空白对照OD值是０．标准品随着浓度增加OD值越小，我要用标准品做曲线，我不知道负值怎么理解，怎么做曲线？请各位老师指教，谢谢!怎么没人理我，我好急啊！各位老师指教一下吧！
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