Tb~(3+)-钛铁试剂络合物荧光猝灭法测定含磷酸基辅酶--《分析科学学报》2007年02期
Tb~(3+)-钛铁试剂络合物荧光猝灭法测定含磷酸基辅酶
【摘要】：含磷酸基辅酶磷酸吡哆醛(PALP)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)、烟酰胺腺嘌呤磷酸二核苷酸(NADP)、黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)可显著猝灭铽-钛铁试剂(Tb3+-TR)络合物的荧光,其荧光猝灭值△F=F0-F分别与PALP、NAD、NADP和FAD的浓度呈线性关系。分别对测定条件进行了优化,并研究了干扰物质情况,建立了Tb3+-TR络合物荧光探针灵敏测定PALP、NAD、NADP和FAD的方法。PALP、NAD、NADP和FAD的检出限分别为:1.1×10-7mol/L、6.4×10-8mol/L、1.6×10-8mol/L和1.15×10-8mol/L。
【作者单位】：
【关键词】：
【分类号】：O657.3【正文快照】：
辅酶是一类具有特殊化学结构和功能的化合物,它与酶蛋白一起组成全酶。一般来说,全酶中的辅酶决定了酶所催化的反应专一性,而酶蛋白则决定了酶所催化的底物专一性。从性质上看,辅酶或具有氧化还原性质,或具有转移基团的能力。因此,每一种辅酶都可以特定地催化某一类型的反应
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文档介绍：
1分光光度法测定络合物的组成及稳定常数(综合型)实验目的1、掌握分光光度法测定络合物组成及稳定常数的基本原理和方法。2、计算络合反应的标准自由能变化。3、学会使用分光光度计。实验原理溶液中金属离子 M 和配位体 L 形成 MLn 络合物。其反应式为: MLnnLM
,当达到平衡时,其络合稳定常数为:nLMMLnK]][[][ ………(1-1)式中: K 为络合物的稳定常数, ][MLn 、][M 、][L 分别为络合平衡时络合物、金属离子和配位体的浓度(严格的说(1-1)式中各浓度值应以活度来代替),n 为络合物的配位数。显然,如果通过实验能测得(1-1)式中右边各项的浓度及 n 值,则就能算得 K 值。本实验采用分光光度法来测定这些参数。1.分光光度法的实验原理让可见光中各种波长的单色光分别地、依次透过溶液,其中某些波长的光即被吸收,使得透过的光形成了吸收谱带(或称吸收曲线),因而可以对不同的物质进行鉴定分析,这是定性分析的基础。根据朗伯—比耳定律,入射光强 0I 与投射光强 I 之间有如下关系:klceII 0………(1-2)DklcII0ln ………(1-3)式中:D 称为光密度(或吸光度);k 为吸光系数,对于一定溶质,溶剂及一定波长的入射光 k 为常数;c 为溶液的浓度;l 为比色皿(液层)厚度;0II称透光率。从(1-3)式看出,在固定液层厚度l 和入射光波长的条件下,光密度 D 与溶液浓度成正比。选择入射光波长,使它对被测物质即具有一定的灵敏度,又使溶液中其它物质的干扰为最小,做被测物质的 CD
标准工作曲线,然后测定被测溶液的光密度,根据光密度的大小即可在标准工作曲线上求得相应的浓度值,这是定量分析的基础。2.络合物组成的测定本实验采用等摩尔连续变化法测定络合物的组成,其原理如下:在保持总摩尔数不变的情况下,依次改变体系中两组分摩尔分数的比值,配制一系列摩尔分数不同的溶液,测量这一系列溶液的光密度 D 值。做光密度 D -摩尔分数 x 曲线如图 5-2 所示,从曲线上光密度的极大之 maxD 所对应的摩尔分数值,即可求出 n 值。2为了配溶液时方便,通常取相同摩尔浓度的 M 溶液和 L 溶液,在维持总体积不变的条件下,按不同的体积比配成一系列混合物溶液。这样,它们的体积比也就是摩尔分数之比。设 x 为 maxD 时所取 L 溶液的体积分数,即:LMLVVVx M 溶液的体积分数为 x1 ,则配位数为:xxn1……(1-4)若溶液中只有络合物 MLn 具有颜色,则溶液的光密度 D 和 MLn 的含量成正比,作 D - x 图,从曲线上的极大位置即可求出 n 值。若配成的溶液中除络合物外,尚有金属离子 M 及配位体 L 与络合物在同一波长中也存在着一定程度的吸收,此时所观察到的光密度 D 并不是完全由络合物 MLn 吸收所引起,必须加以校正。其校正方法如下:作出实验测得的光密度 D 对溶液组成(包括金属离子浓度和配位体离子浓度为 0 的两点)的图。连接金属离子浓度为 0 及配位体浓度为 0 的两点的直线如图 5-3 所示,直线上所表示的不同组成光密度数值 0D 可以认为是由金属离子 M 和配位体 L 吸收所引起,因此,把实验所观察到的光密度数值'D 减去对应组成上该直线读出的光密度数值 0D ,所得到的差值 0'DDD
就是该溶液组成下浓度的光密度数值。作此光密度 xD
的曲线,曲线极大点所对应的溶液的组成就是络合物组成。用此方法测定络合物组成时,必须在所选择的波长范围内只有 MLn 一种络合物有吸收,而金属离子 M 和配位体 L 等都不吸收或很少吸收,只有在这种情况下 xD
曲线上极大点所对应的组成才是络合物组成。3.稀释法测定络合物稳定常数设开始时金属离子 M 和配位体 L 的浓度分别 a 和 b,而达到络合平衡时络合物浓度为 x 则:nnxbxaxK))((
…(1-5)由于光密度已经过上述方法校正,因此可认为校正后溶液光密度正比于络合物浓度。如果两个不同浓度的 M 金属离子和配位体总浓度相同(总摩尔数)条件下,在同一坐标上分别作光密度对两个不同总摩尔数的溶液组成曲线。在这两条曲线上找出光密度相同的任意两点如图 5-4 所示,则在此两点上所对应的溶液的络合物浓度应相同。设对应于两条曲线的起始金属离子浓度及配位体浓度分别为 1a 1b , 2a 2b ,则nnnxbxaxnxbxaxK))(())(( 2211
………(1-6)解上述方程可得 x ,然后即可计算络合物稳定常数 K 。仪器和试剂72 型分光光度计 1 套容量瓶(100ml) 13 个移液管(50ml) 1 支(250ml) 2 个(25ml) 1 支烧杯(250ml) 1 个(10ml) 2 支(100ml) 2 个钛鉄试剂(1,2-二羟基苯,3,5-二黄酸钠)分析纯 0.005M硫酸高铁铵(NH4Fe(SO4)212H2O)分析纯 0.005MPH=2.1 HCL 缓冲液3实验步骤1、用 0.005M 钛鉄试剂溶液和 0.005M 硫酸高铁铵溶液按下表制备 11 个待测溶液的样品然后依次将各样品加蒸馏水稀释至 100ml2、测定络合物 MLn 的最大吸收波长 max用 6 号样品测定其吸收曲线,以蒸馏水为参比液,用分光光度计测定波长由小到大的光密度值。做波长—光密度曲线,找出吸收曲线的最大吸收峰所对应的波长 max 数值。3、以蒸馏水为参比液,测定 11 个样品在波长 max 下的光密度值。4、配制 0.0025M 的硫酸高铁铵及 0.0025M 钛鉄试剂溶液各 100ml。移取 0.005M 硫酸高铁铵溶液 50ml 于 100ml 容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度。同样方法配制 0.0025M 钛鉄试剂溶液 100ml。5、用 0.0025M 钛鉄试剂溶液和 0.0025M 的硫酸高铁铵溶液按实验步骤 1 配制第二组待测溶液,并测定其在波长 max 下的光密度值。数据记录和处理1、将所得数据列表。2、做最大吸收峰曲线 D 。3、作两组溶液的光密度 D 对溶液组成 x 的 xD
曲线。4、按上述方法进行校正,求出两组溶液中络合物的校正光密度数值 0DDD
。5、作两组溶液的 xD
图,于同一坐标上。6、找出曲线最大值下相应于 nxx1的数值,从n 的数值即可得到络合物组成 MLn 。7、从图上找出二组溶液中任意相同光密度的二点所对应的溶液组成(即求出 1a 1b , 2a2b 数值)。8、根据(1-6)是求出 x 的数值。9、从 x 数值算出络合物稳定常数。10、利用稳KRTG ln0 计算该反应的标准自由能变化。思考题1、试分析影响络合物稳定常数的因素。2、为什么要控制溶液的 PH 值。参考文献[1] 罗澄明,向明礼,物理化学实验(第四版), 高等教育出版社,2004 年版[2] 北京大学等校,物理化学实验(第四版), 北京大学出版社,2002 年版溶液编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11硫酸高铁铵(ml) 0 1 2 3 4 5 6 71
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分光光度法测的配合物的稳定常数
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分光光度法测的配合物的稳定常数
一、目的与要求
1．掌握连续法测定配合物组成及稳定常数的方法； 2．掌握分光光度计的使用方法； 3．用分光光度法中的连续变化法测的Fe+3与钛铁试剂形成配合物的组成及稳定常数。 二、实验原理 溶液中金属离子M和配位体L形成配合物，其反应式为： 当达到络合平衡时：
式中：K为配合物稳定常数；CM 为络合平衡时金属离子的浓度（严格应为活度）；CL 为络合平衡时的配位体浓度；CMLn 为络合平衡时的配合物浓度；n为配合物的配位数。 配合物稳定常数不仅反映了它在溶液中的热力学稳定性，而且对配合物的实际应用，特别是在分析化学方法中具有重要的参考价值。 显然，如能通过实验测得公式中右边各项浓度及n值，则就能算得K值。本实验采用分光光度来测定上述这些参数。 应用迭代法求解（x）
平衡 (a-x)
x≥0、(a-x)≥0、 (b-nx)≥0
即0≤x≤a，且 0≤x≤b/n
a为a1、a2中较小者，b为b1、b2中较小者，然后a与b/n再进行比较哪个较小，即可确定x的合理范围，在该范围内取一x0进行迭代求x。 三、仪器与药品 1. 紫外可见分光光度计； 2.硫酸铁铵（AR）、铁钛试剂（AR）； 3.0.0025M硫酸铁铵溶液；0.0025M铁钛试剂溶液；H2SO4溶液； 4.醋酸—醋酸铵缓冲溶液； 5.移液管、容量瓶；等等。 四、实验步骤 第一组溶液(容量瓶50mL) 第二组溶液(容量瓶100mL) 吸光度的测定
四个比色皿装入蒸馏水，放置于R，待数显稳定后，按
键，自动调零。保留R比色皿，另三个比色皿分别放置于S1~S2，待数显稳定后，按
键，自动调零。S1~S2比色皿蒸馏水倒掉，依次装入被测溶液，在
方式下，每按一次
键输出并打印一次数据。
方式时，按
方式即可。 * * 预热 配制硫酸铁铵-铁钛试剂 配制具体待测溶液 分光光度计调零 设定波长 测定溶液的吸光度 15 15 15 15 15 15 15 15 15 15 15 缓冲溶液ml数 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 铁钛试剂ml数 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 硫酸铁铵ml数 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 溶液编号 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 缓冲溶液ml数 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 铁钛试剂ml数 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 硫酸铁铵ml数 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 溶液编号 ASB.O100%T ASB.O100%T DATA START/STOP DATA MODE 2 ENTER DATA *
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铜-氨基酸络合物的紫外光谱性质及其应用--络合物组成及稳定常数的测定
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