转座子的 问题？ | 谣言粉碎机小组 | 果壳网 科技有意思
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看到了文章说nature阐述了一种寄主-寄生虫间可发生的依靠转座子的横向基因传递（具体来说，就是一种叫长红猎蝽的靠吸食动物包括人类血液的昆虫基因组里可发现其他动物的转座子）。有人说这样的机理会导致先父遗传呢！ 本人学医不懂太多生物知识，求证？
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我印象中跨物种的横向基因传递的报道都集中在比较低等的动物和一些植物身上。复旦报道过盐肤木和蚜虫间的横向基因传递，然后那个著名的带了叶绿体的海蛞蝓也是一个例子。高等动物是否能发生这样的横向基因传递，还需要更多报道，个人觉得不太可能。
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克隆人问题的价值分析
摘　要：探讨克隆技术,除了分析其直接影响,还势必考虑到技术异化问题.作为克隆技术的一项特殊应用,"克隆人"理所当然蕴含着错综复杂的价值冲突.在此,为梳理观点分歧,规范科技创新,本文对生殖性克隆人和非生殖性克隆人两者的种种可能价值进行全面地搜索和对比,尝试着对克隆人问题进行较为科学的价值分析、判断,旨在提高人们对克隆人的科学认识,最终为引导克隆技术的健康发展作出较为合理的行为选择.&& 查看话题
电击转化的问题
新手，请问电击转化需要的质粒：
想了解将外源基因导入真核生物，如藻类、植物体内
& && & 看到有文献说转单细胞藻的，没看到同源重组的说明，就说把目的基因导入某个质粒，然后线性化质粒，然后就电击转化。请问这样可以么？不需要同源重组或者转座子的协助，只要线性化片段进入细胞了就能自己插到染色体上去么？这是什么原理呢？
UP!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!:( 这个没做过，我电转酵母的时候就是质粒直接加进去电转的。 : Originally posted by 亡佚 at
这个没做过，我电转酵母的时候就是质粒直接加进去电转的。 你好，我也在做酵母，可是一直没电转进去，涂板，要不不长，要不长一个 : Originally posted by 玲林123 at
你好，我也在做酵母，可是一直没电转进去，涂板，要不不长，要不长一个... 纳尼，我的长得挺多的啊···你是什么酵母？ : Originally posted by 亡佚 at
纳尼，我的长得挺多的啊···你是什么酵母？... 你是自己构建的质粒么？还是老师构建好的？ : Originally posted by 风吹我已散 at
你是自己构建的质粒么？还是老师构建好的？... 实验室原有的啊~ : Originally posted by 亡佚 at
实验室原有的啊~... 老师叫你转，你就转了？不清楚质粒具体的信息么，怎么构建的等等？ : Originally posted by 亡佚 at
纳尼，我的长得挺多的啊···你是什么酵母？... pPICZαA 做电转化质粒线不线性化没有太大关系，主要是你的质粒要很纯，较大的质粒比较小的质粒难转，如果做植物电转化要有专门的电转化仪，和细菌和酵母的不同 : Originally posted by 玲林123 at
pPICZαA... 没玩过这个质粒··· : Originally posted by 风吹我已散 at
老师叫你转，你就转了？不清楚质粒具体的信息么，怎么构建的等等？... 实验室的一株带GFP荧光蛋白的质粒，我是要做定位的~
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【求助/交流】酿酒酵母URA3基因敲除的问题
个人目前做酿酒酵母过表达的研究，由于所用质粒上的筛选标记是URA3(尿嘧啶)营养缺陷，而目标菌株是工业二倍体酵母。所以就根据文献利用5-FOA (5-氟乳清酸)通过PCR产物(两端带有URA3同源片段，中间为G418筛选标记的PCR产物)方法直接转化工业二倍体酵母， 一开始5-FOA浓度为0.2mg/ml 和2mg/ml 结果高浓度的平板不长，低浓度5-FOA的平板长满； 后来用利用YPD加G418筛选，结果利用SD/SD-URA培养基验证时发现都能生长；
& &接下来先测定了二倍体酵母5-FOA的抗性，发现0.5mg/ml ,1mg/ml 不能生长， 现在利用SD-URA-5-FOA-G418 平板来筛选，结果在1mg/ml 5-FOA G418浓度为120ug/ml 平板上长出菌落，但是再次利用SD/SD-URA 培养基验证时发现又全部能够生长，正常情况应该是SD不生长，只有补加URA3的SD才能生长。 请问各位虫友我的问题出在哪里？是不是应该将酵母单倍体话后再转化啊？
&&比较啰嗦 见谅！&&谢谢帮忙
1、竟然是二倍体，你敲除的时候可能只是敲除了一半，因此一开始用SD/SD-URA筛选肯定的不容易得到预期结果，应该一开始用高浓度抗生素筛选，通过抗生素筛选后，再用SD/SD-URA筛选，如果通过抗生素筛选后不能通过SD/SD-URA，说明只敲除了一半，要重新设计引物二次敲除。
2、最好不要选取工业二倍体酵母作为实验酵母，分子操作上会很麻烦，最好选用试验用的单倍体酵母。
3、酿酒酵母dropout类型现在又很多了，搞到一个URA3缺陷型的菌株也不难，何必自己敲除，费时又费力。 参考invitrogen的EBY100和pYD1质粒 旁观学习一下 请问一下，我也是要做URA3的筛选，你配培养基的时候，尿嘧啶和5-FOA高压灭菌了吗？如果没有，这两种药品，你是怎么配制的，按理化性质来说，特别不好溶解，谢谢 5-FOA 可以溶于DMSO或者50mM的NaOH ,然后过滤除菌
URA3 也需要过滤除菌 不好意思 说错了 5-FOA用DMSO 溶解
& &URA3 用50 mM NaOH溶解后过滤除菌 二者均不能高压 配成高浓度按所需量加入SD 培养基 你好！我现在遇到和你类似的问题，敲除URA3之后，在FOA上能生长，但是也能在不含尿嘧啶的培养基上能生长，因此想请教一下，我的也是二倍体！ ura可以灭菌的 URA3基因编码尿嘧啶合成途径中的重要酶：乳清酸核苷5’-磷酸脱羧酶，它能把5’-氟乳清酸（5’-FOA）转变为细胞毒性物质， 使细胞无法生长。 请问，你G418筛选产物是不是就是neo基因啊？ 请问，G418筛选产物是不是就是neo基因啊？ G418是一种氨基糖类抗生素，它通过影响80S核糖体功能而阻断蛋白质合
成，对原梭和真核等细胞都有毒性，包括细菌、酵母，植物和哺乳动物细胞，
是稳定转染最常用的选择试剂。Wach等人研究发现，来自大肠杆菌转座子Tn903
的卡那霉素抗性基因与表达调控序列来自丝状真菌Ashbyagossypii(针孢酵母)
的TEF基因相融合，所组成的kanMX元件可以在酵母细胞中表达氨基糖苷磷
酸转移酶，将G418转变成无毒形式，从而赋予酵母细胞以G418抗性 请问你做的酿酒酵母是生产什么的工业酵母啊，代号多少呢，希望进一步交流，我的是黄酒生产菌株酿酒酵母N85。 : Originally posted by yatou996512 at
请问一下，我也是要做URA3的筛选，你配培养基的时候，尿嘧啶和5-FOA高压灭菌了吗？如果没有，这两种药品，你是怎么配制的，按理化性质来说，特别不好溶解，谢谢 5-FOA在水中溶解的话，需要在50度水浴30min，才能充分溶解的，然后再过滤就可以了，尿嘧啶也是可以在水中溶解的，稍微加热下就可以溶解的，然后再过滤，以后每天添加之前，最好再加热一下混匀。:hand: 应该用单倍体进行分别敲除，然后再杂交培养基上融合形成二倍体。:hand: : Originally posted by 香蕉宝宝 at
你好！我现在遇到和你类似的问题，敲除URA3之后，在FOA上能生长，但是也能在不含尿嘧啶的培养基上能生长，因此想请教一下，我的也是二倍体！ 请问你敲的是代号多少的酿酒酵母啊，是用化转的还是电转的啊，目前也在做URA3的敲除，希望可以多多交流。 : Originally posted by susizheng at
1、竟然是二倍体，你敲除的时候可能只是敲除了一半，因此一开始用SD/SD-URA筛选肯定的不容易得到预期结果，应该一开始用高浓度抗生素筛选，通过抗生素筛选后，再用SD/SD-URA筛选，如果通过抗生素筛选后不能通过SD/S ... 我要用酿酒酵母做基因的过表达，老师说我们现在的菌株是工业菌株，是二倍体，不太好做，我最近在网上查菌株呢。ATCC 204508是很多突变株的亲代菌株，那是不是是二倍体啊？还有很多文献用到Saccharomyces cerevisiae CEN.PK113-7D，可是我在网上都查不到哪儿有卖的。。。您知道什么单倍体菌株比较适合做过表达的么？我刚接课题，很菜鸟，请见谅啊。。。 : Originally posted by 冰艺于欣然 at
我要用酿酒酵母做基因的过表达，老师说我们现在的菌株是工业菌株，是二倍体，不太好做，我最近在网上查菌株呢。ATCC 204508是很多突变株的亲代菌株，那是不是是二倍体啊？还有很多文献用到Saccharomyces cerevisia ... 你好，做酿酒酵母好像是三四年前的事了，二倍体做基因敲除是麻烦。但是做过表达并不影响啊。用二倍体做一样的，即使转进去一半一样可以表达。另外我只用过WT strain (BY4741 )这个菌株，也是二倍体的。 : Originally posted by susizheng at
你好，做酿酒酵母好像是三四年前的事了，二倍体做基因敲除是麻烦。但是做过表达并不影响啊。用二倍体做一样的，即使转进去一半一样可以表达。另外我只用过WT strain (BY4741 )这个菌株，也是二倍体的。... 你确定BY4741是两倍体？
var cpro_id = 'u1216994';
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