qPCR array - applications and normalisation strategies
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有哪位知道microRNA RT-PCR标准品怎么制作吗，谢谢
提问者采纳
就得到一系列的标准品了直接把你要检测的那一段扩增出来构建到质粒载体上，梯度稀释，换算拷贝数，然后测OD值
提问者评价
好的，非常感谢
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【求助】MicroRNA RT-PCR 加尾法引物设计
【求助】MicroRNA RT-PCR 加尾法引物设计
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本人实验室菜鸟，想做MicroRNA的RT-PCR。买的TAKARA的MicroRNA的反转录试剂盒和SYBR GREEN。反转录试剂盒是polyA尾法。说明书上写反转录不需要引物；qPCR是需要试剂盒中提供的mRQ 3’ Primer，和自己合成的miRNAspecific, 5’ primer。说明书上说We recommend that the entire sequence of your mature miRNA (21 –23 nt) be used as your miRNA specific, 5’ primer。我要做mir-27b，mature mir-27b的序列为UUCACAGUGGCUAAGUUCUGC。根据说明书上写的，我做qPCR时的5’端特异性引物就是UUCACAGUGGCUAAGUUCUGC吗？（还是应该把U改成T？）我直接把这个序列给厂家，要他们给我合成就行吗？本人愚钝，恳请各位大侠帮助，谢谢~~~
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实验室新手，恳请大家能够出手相助~~~
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mRQ 3’ Primer序列是什么 求答案
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please琳子 mRQ 3’ Primer序列是什么 求答案试剂盒里的。应该就是3‘端的引物。不知道序列。文献上有的就写引物是由试剂盒提供，而没在文章中提及序列。
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反转录没有反转录引物？？怎么会呢，而且qPCR时5&#39;引物也不能是整条序列啊，这个要根据实际情况调整的，给你推荐一个microRNA实验指南看看吧，/maindoc/microrna_detailes.pdf，里面讲的很清楚，不清楚的可以一起探讨。
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芝麻c 反转录没有反转录引物？？怎么会呢，而且qPCR时5&#39;引物也不能是整条序列啊，这个要根据实际情况调整的，给你推荐一个microRNA实验指南看看吧，/maindoc/microrna_detailes.pdf，里面讲的很清楚，不清楚的可以一起探讨。 谢谢你 ，我已经做了。 就是用的TAKARA的试剂盒。 TAKARA的MicroRNA试剂盒用的就是miR-Q技术（你给我发的pdf）。 我没有说清楚，里边含义oligo（dT）引物。但是qPCR时确实是MicroRNA本身的全部序列。 是根据它试剂盒的说明。 可能不同的试剂盒在这方面有所不同吧。
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哦，我没用过takara的，但根据你的描述，感觉如果是整条microrna序列的话那样引物就太固定了，像TM值什么的都不好调节，而且他这也相当于单向特异引物，可能还是会有非特异扩增（rna模板为水时的对照）。你可以先做一下结果看看。
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