DNA提取的DNA样品准备_异丙醇_中国百科网
DNA提取的DNA样品准备
    DNA提取 -DNA样品准备 1.生物组织，一.最好新鲜组纳，若不能马上提取，应贮存-70℃或液氮二.液氮冷冻敲碎研磨三.组织匀浆法四.液氮匀浆法 2.培养细胞一.悬浮生长细胞：1500g离心，4℃10分种收集细胞二.单层培养细胞：可用刮棒或胰酶消化后离心收集 3.血液样品一.血液抗凝易用柠檬酸抗凝液（ACD）：柠檬酸0.48g；柠檬酸钠1.32g；右旋葡萄糖1.47g加H2O至100ml，每6ml新鲜血液加1mlACD液零度保存数天，负70度长期贮存。 4.DNA提取一.酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎细胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯DNA大小为100-150kb二.甲酰胺解聚法：破碎细胞同上，然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合，再透析获得DNA可得DNA200kb左右。三.破璃棒缠绕法：用盐酸胍裂解细胞，将裂解物铺于乙醇上，然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅，DAN沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。四.异丙醇沉淀法：基本同1法，仅用二倍容积异丙醇替代乙醇，可去除小分子RNA（在异丙醇中可溶状态）五.表面活性剂快速制备法：用Triton X-100A或NP40表面活性剂破碎细胞，然后用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉淀或透析。六.加热法快速制备：加热96℃-100℃，五分钟，然后离心后取上清，可用于PCR反应。七.碱变性快速制备：先用NaOH作用20分钟，再加HCI中和，离心后取上清，含少量DNA。[1]
5.DNA的浓缩一.固体聚乙二醇（PEG）浓缩：用透析袋外敷PEG至合适量。二.丁醇抽提浓缩：DNA溶液中水可分配到正丁醇或仲丁醇，但DNA不会。因此重复几次可显著减少DNA体积。三.乙醇或异丙醇沉淀：（1）需要阳离子盐的存在，NaAc最常用,NaCl对含SDS样品好，NH4Ac去除dNTP好。PiCl沉淀RNA好，但不能用于反转录前。（2）沉淀温度与时间；0℃一4℃，12000g，10分钟，小于100bp DNA需超速离心。四.精胺沉淀法：与DNA结合后使DNA结构凝缩沉淀，需在无盐或低盐溶液。
收录时间:日 23:52:31 来源:百科网 作者:匿名
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货号：CWZ0007S规格：96次价格：￥1498生产备案凭证编号：苏泰食药监械（准）字9号，医疗器械生产备案凭证编号：苏泰食药监械生产备号
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　　本品使用裂解液、异丙醇实现DNA和蛋白质的分离和浓缩，使DNA游离释放。磁珠可以特异地吸附DNA，通过洗涤，去除DNA以外的RNA、蛋白质等杂质。洗脱液解离吸附在磁珠上的DNA，得到纯度和浓度均很高的DNA。适用于从新鲜或冷冻的抗凝全血、血浆、血清、血沉棕黄层等样本中提取基因组DNA。本品既可进行手工操作，也可配合自动化仪器，高通量提取全血DNA。&
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【求助/交流】异丙醇沉淀DNA
不知道为什么用异丙醇沉淀DNA，静置10分钟，离心10分钟，吸取上清后，怎么不见有DNA沉淀呀？？
DNA含量少或者看一下异丙醇有没有过了保存期
挺可信的，我们用0.6体积的异丙醇，之后冰上半小时，冷冻离心，10000r/min，20min.离心完直接倒掉异丙醇，用70%乙醇洗涤沉淀，晾干，要一定没有酒精气味为止，加入TE溶解即可。
你看着楼主做实验？
:cool:我自己是这样做滴~~~
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