如何获得已知pcr获取目的基因因序列

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2011-10-23 14:19 标签： pcr获取目的基因
解决时间: 17:49
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某个基因家族由3个基因构成，已知其中一个基因的cDNA序列，如何获取另外两个基因的序列？
提问者： [] [] []
回答者： [] [] []
一级 一星助者
可以先考虑分别在数据库中搜索另两个基因的同源序列，注意要蛋白序列，然后分别比对，设计简并引物来扩增。但是由于这三者同属一个基因家族，设计得到的引物很可能无法区分这三个基因。
还有一种就是要多查查文献，看看这三个基因分别在什么环境下进行表达，然后再在各自的表达环境下培养细胞，做蛋白电泳，分别把你要的那两个基因表达出来的蛋白分离出来，做N端测序，再据此设计5&简并引物，结合3& poly-A，分别进行扩增。这种方法我没试过，据说成功率比较低，首先这三个基因的产物蛋白必须要有独特的表达条件或者其他能够进行区分的特征，然后还必须成功地将目的蛋白分离出来。但相比上一种方法会靠谱些，而且可以知道分离得到的基因的确切身份。
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历史上的今天
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一、如何获取已知目的基因的序列信息先查找其蛋白相关信息,了解该基因编码产物的基本情况与功能（www.expasy.org）进一步查找其核酸相关序列信息，常用数据库：Genebank、EBI、DDBJ
二、目的基因cDNA序列的获取方法cDNA文库扫描RT-PCR人工合成组织RNA的提取-在匀浆器中加工冷冻的组织-通过注射器加工冷冻的组织-在液氮中将组织研磨成粉末-在液氮中研磨组织至粉末状，细胞裂解更完全，产量比前二者多一倍。-合适的RNA提取方法加上合适的组织处理方法，才能够获得最佳的提取效果
RNA提取两要素忌讳贪多 ：不能指望1ml Trizol 提取100mg以上组织，一般50mg用1mlTrizol较合适速战速决 ：尽量缩短提取时间，不要完全照搬Protocol,比如匀浆后如果',
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已知大鼠脑组织中蛋白质的DNA序列，如何设计实验，克隆大鼠的基因并得到重组蛋白
提问者采纳
连入载体转化表达宿主提取脑组织的基因组，设计引物，PCR
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，用PCR技术（是获取已知DNA序列的主要方法）提取目的基因并用其原理进行扩增，希望可以帮到您。2目的基因与载体（例如质粒）的连接目的基因片段与载体经DNA连接酶连接3导入宿主细胞（例如大肠杆菌）进行表达将重组载体导入宿主细胞进行表达步骤不是很详细。用限制性核酸内切酶水解基因与载体形成粘性末端或平末端、提取目的基因片段PCR引物设计，1已知DNA序列
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