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避免污染,在超净台内操作,操作前半小时先进行紫外杀菌.所有用品高温灭菌,或者进行70%酒精擦洗.培养过程中,每隔一段时间取出一部分细胞冷冻保存,以防污染后没有细胞可以用.
提供篇文章给你《细胞悬浮培养技术生产疫苗的研究进展》，中国家禽2011第13期，下不下来你留联系方式。
Culture of Animal Cells --A Manual of Basic Technique--5th，去把这本书搜来看。
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动物细胞/组织培养常见的一些问题
核心提示：由于影响因素过多，细胞/组织培养中出现的一些问题往往很难分析并得到解决，因此被人戏称为黑色艺术或巫术。本文列举了一些动物细
由于影响因素过多，细胞/组织培养中出现的一些问题往往很难分析并得到解决，因此被人戏称为&黑色艺术&或&巫术&。本文列举了一些动物细胞/组织培养中常见的问题及解决方法。
1.培养试剂的保存：
血清：-5oC - -20oC 保存，避免反复冻融。
培养基:& 2oC & 8oC避光保存。
完全培养基: 2oC & 8oC避光保存，并在2周内用完。
尽量缩短血清和培养基见光的时间&
2.液体培养基中谷氨酰胺使用方法：
很多细胞生长要求在培养液中添加谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置于-20◦C冰冻保存，用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4◦C 冰箱储存两周以上时，应重新加入原来量的谷氨酰胺。另一种选择是使用L-谷氨酰胺的衍生物 - L-alanyl-L-glutamine dipeptide（如启维益成公司代理的GenDepot的产品Glutaplex配方中含有的成分之一） 替代L-谷氨酰胺。Glutaplex与L-谷氨酰胺相比更加稳定，降解比较慢，提高细胞的存活和生长，极大降低对细胞有毒性的氨的积累。
3.培养基中是否应加酚红：
酚红在培养基中被用来作为pH值的指示剂，中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时紫色。研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用，特别是雌激素。为避免固醇类反应，培养细胞尤其是哺乳类细胞时，应使用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时不使用加酚红的培养基。
4.使用血清应注意的问题：
1）血清第一次使用前，是否应在56oC，30分钟加热血清以灭活补体系统？
激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在进行免疫学研究、培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。实验显示，经过正确处理的热灭活血清对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞生长只有微小的促进或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率降低。而经过热处理的血清沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察像是&小黑点&，常常会让研究者误以为是血清遭受污染。而把血清放在37℃环境中又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。若非必须，可以不需要做热处理这一步。不但节省时间，更确保血清的质量。
2）通常使用的血清的种类：
新生牛血清：新出生牛5天内取血制成。小牛血清：小牛出生16周以内采血制成。胎牛血清：（进口血清）要求剖腹取胎制成。国内厂家往往不能做到，经常把出生2天以内采血称为胎牛血清。根据血清的生产工艺及血红蛋白、内毒素含量又分为：（1）特级胎牛血清：40纳米过滤，内毒素含量&10EU，&& 血红蛋白含量&10mg/dl。（2）优等胎牛血清：经过3次100纳米过滤，内毒素含量&25EU/ml，血红蛋白含量&25mg/ml。（3）标准胎牛血清：3次100纳米过滤，低内毒素，低血红蛋白含量。
3）为什么储存在冰箱中的胎牛血清会出现沉淀?&&
有些胎牛血清产品没有预老化，储存在2-8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白，如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。这应该不会影响血清的质量。建议在-20℃储存胎牛血清，避免反复冻融。
4）血清解冻后发现有絮状沉淀物出现：&
血清中沉淀物的出现有许多种原因，但最普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成。而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解冻后也会存在于血清中，也是造成沉淀物的原因之一。但这些絮状沉淀物并不影响血清本身的质量。若欲去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管内，以400g稍微离心，上清液即可接着加入培养基内一起过滤。最好不使用过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞过滤膜。
5）如何避免沉淀物的产生?&&
我们建议您在使用血清的时候，注意下列的操作: (1)解冻血清时，请按照所建议的逐步解冻法(-2℃至4℃过夜，37oC水浴解冻)。若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃)，非常容易产生沉淀物。(2)解冻血清时要随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。(3)请勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清会变得混浊，同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害，而影响血清的质量。(4)如果在高于40oC的水浴中融化并且不时常摇晃混匀，非常容易造成沉淀物增多。同样血清的热灭活也造成沉淀增多，若非必要，可以省去热灭活。(5)若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。&
5.培养用液pH对细胞生长的影响：
由于，大多数细胞培养适宜的pH为7.2-7.4，偏离此范围对细胞将产生有害的影响。各种细胞对pH的要求也不完全相同，原代培养细胞一般对pH变动耐受力差，无限细胞系耐受力强。但总体来说，细胞耐酸性比耐碱性强一些，偏酸环境中更利于细胞生长。因此，我们在配制培养用液时，可把液体的pH稍微调得偏酸一些。液体在经过0.10um或0.22um滤膜过滤时，溶液的pH还会向上浮动0.2左右。
6.培养基pH变化迅速：
培养箱中CO2浓度不正确。碳酸氢钠在培养液中浓度范围为2.0 & 3.7g/L时，CO2的浓度范围应分别为5% - 10%。
7.使用培养基时应注意的问题：&&
培养基在使用前需37oC预热。 细胞培养过程中，吸取过培养液的吸管不能再用火焰烧灼，防止残留在吸管内的培养基焦化，将有害物质带入培养液中。尽量缩短各种液体、细胞的暴露时间，减少污染机会。避免液体间、细胞间的交叉污染。配制完全培养基时，配制的量最好在2周内用完为好。
8.细胞传代消化时胰蛋白酶的使用问题：
培养细胞胰蛋白酶溶液的消化能力和溶液的pH、温度、胰酶浓度及溶液中是否含有Ca++, Mg+离子和血清等因素有关。通常情况下，pH 8.0 , 温度 37 oC 其作用能力最强。另外，钙、镁离子及血清均能大大降低其消化能力。每次进行传代消化前，一定要用无钙镁离子的PBS液或D-Hanks液反复冲洗细胞培养瓶，以便将含血清的培养基冲洗干净，这样可大大提高消化液的消化能力。通常使用的消化液浓度为：&& （1）０.０５％胰蛋白酶-ＥＤＴＡ；&& （2）０.２５％胰蛋白酶-ＥＤＴＡ。多数细胞传代消化可使用０.０５％胰蛋白酶-ＥＤＴＡ这种消化液。
第一次开瓶后应立即少量分装于无菌管中，保存于&20℃，避免反复冻融造成胰蛋白酶活性降低，并可减少污染的机会。
注意：如果选用无血清培养基（如启维益成公司代理的TNC Bio公司生产的产品 - 完全无动物成分的血清替代品XerumFreeTM与其他培养基混合配制的无血清培养基），在细胞传代时，不可使用胰蛋白酶消化，因为胰蛋白酶在无血清时可去除细胞膜表面的受体，这种情况应使用AccutaseTM消化。
9.贴壁细胞在用蛋白酶消化时不易分离：
1）培养液中存在酶的抑制剂，可使用无钙镁离子的37oC预热的Dulbecco&s PBS或胰酶-EDTA洗一遍，再消化&
2）胰酶浓度太低，使用更高浓度的胰酶，更高浓度的EDTA或不同的酶消化，37oC消化以提高酶活性
3）细胞处于铺满状态时间太长，形成细胞间的紧密连接，以后注意在细胞铺满之前进行继代培养。
10.细胞分离后形成团块：
1) 细胞分散过程太过分，如用力吹吸、酶浓度过高、消化时间过长或温度过高，酶溶液有毒性（如缓冲液pH或渗透压不正确等）以至基因组DNA从破裂的细胞中释放出来。解决方法是在细胞悬液中加入1滴无菌的1mg/ml溶于水中的DNA酶。
2)去除上清时，细胞离心的强度太大或时间太长，应使用125g, 10分钟轻微离心。
11.悬浮细胞形成团块：
1）培养液中含有钙镁离子
2）支原体污染&
3）由于过度消化造成细胞裂解，释放出基因组DNA
12.细胞不贴壁：
1）消化时间过长，细胞膜上的贴壁蛋白被去除了
2）培养基中的血清或贴壁因子（常见于无血清培养基）不足，可在培养基中加入贴壁因子或使用胶原蛋白、多聚L赖氨酸、纤连蛋白等包被的培养瓶。
3）支原体污染
13.离心动物细胞的离心速率：&&
回收动物细胞，离心速率一般为300g，5 - 10 分钟，离心强度过大将造成细胞破裂死亡。
14.细胞生长缓慢：
1）换用了不同的培养基或血清，解决方法是可比较不同培养基成分，用生长实验比较以前批次和新批次的血清， 提高接种细胞数，使细胞逐步适应新的培养基 。
2）L-谷氨酸等促进细胞生长的成分没加入，用尽或分解了。用L-alanyl-L-glutamine dipeptide（如启维益成公司代理的GenDepot的产品Glutaplex）替代L-谷氨酸&
3）支原体污染或低水平细菌或真菌污染
4）培养试剂保存不当
5）接种细胞数太少
6）细胞传代次数太多
7）细胞传代时密度太高，应在细胞铺满前的指数生长期传代
15.细胞死亡：
1）培养箱中无CO2，检查管子有无泄漏，是否需更换CO2罐，尽量减少开关培养箱的次数&
2）培养箱温度不恒定
3）抗真菌剂或抗生素浓度过高，对细胞产生毒性
4）细胞在冻存或解冻过程中被破坏
5）培养基中渗透压不正确
6）培养基中积累了有毒的代谢产物
16.细胞冷冻培养基的成份：
动物细胞冷冻保存时最常使用的冷冻培养基是含5 - 10 %DMSO (dimethyl sulfoxide) 和90 - 95 %原来细胞生长用的新鲜培养基均匀混合。注意：由于DMSO 稀释时会放出大量热能，所以不可将DMSO 直接加入细胞液中，必须使用前先行配制完成。
17.DMSO的等级及使用和保存：
&& 冷冻保存使用之DMSO 等级必须为Tissue culture grade的DMSO (如Sigma D2650)。其本身即为无菌状况，第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于4&C。避免反复冻融造成DMSO 裂解而释出有害物质，并可减少污染的机会。若要过滤DMSO，则须使用耐DMSO 的Nylon 材质滤膜。
18.冻存液中的甘油的保存：
要避光保存，见光后甘油转化为对细胞有毒性的丙烯醛。
19.细胞欲冷冻保存时注意事项：
冷冻管内细胞数目一般为1x106 cells/ml，融合瘤细胞则以5x106 cells/ml为宜。实际操作时，建议按照细胞生产商建议的细胞密度冻存。冻存传代次数低的细胞。
20.冷冻保存细胞之方法：&&&
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30-60 分钟& （-20℃ 30 分钟）& -80℃16-18 小时(或隔夜) & 液氮槽vaporphase长期储存，如细胞浸在液氮中，有可能被液氮中的微生物污染。&&&
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序的可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至&80 ℃ 以下，再放入液氮槽vapor phase长期储存。-20℃不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡。也可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，但存活率降低。
21.细胞解冻：
快速解冻，将37oC预热的培养基逐滴加入解冻的细胞。
22.支原体污染、检测及处理：&&
支原体污染在细胞培养中最常见、不易被查觉，但支原体污染可显著影响细胞功能干扰实验结果。支原体是介于细菌和病毒之间的目前所知能独立生活的最小微生物，它无细胞壁，形态呈高度多形性，最小直径0.2um，可通过滤器。课题组从国外引进细胞株/系也经常出现支原体的污染。支原体在污染细胞后，它通过影响细胞的DNA、RNA 的合成及急速消耗培养基中的氨基酸来抑制细胞的生长，并能降低细胞的融合率。因此，在运用各种细胞系进行实验研究时，首先要证明所用细胞有无支原体的污染。支原体污染后，培养基可不发生浑浊，细胞病变轻微或不明显，因此难以发现。
目前，支原体检测的方法有以下几种。（a）相差显微镜观察；（b）低张处理地衣红染色法；& （c）荧光染色法；（d）酶标法；& （e）PCR法：这是常用的一种简便的检测方法。& 此方法灵敏度高，检测耗时短，样品量小（只需50ul细胞培养用液上清），但引物及制剂费用较高。
支原体污染的处理：1）丢弃细胞，培养基及其他培养用试剂 2）重新获取未污染细胞，新鲜培养基和试剂。
编辑：songjiajie2010转基因动物--就是把人类所需要的基因转导到动物体内，使培养出的这种动物，能够生产出一些为人类所需要的物质，这种动物叫转基因动物．例如，人的生长激素能够刺激人体生长，身高增加，是一种很好的治疗侏儒症的药品．用引入基因的方法，培养出一种特殊的小鼠，在这种小鼠的奶液里，含有人类的生长激素，而且含量很高，1L小鼠奶可以提取0.5g人的生长激素．科学家培育转基因动物的主要目的之一，就是利用养殖动物来生产一些贵重的药品．各国科学家，已经把几十种基因转入动物，除小鼠外，还有小兔、猪、绵羊等，使这些动物产生胰岛素、乙型肝炎抗体（乙型肝炎疫苗）等药品．（1）科学家培育的小鼠能够产生含有“人体生长激素”的奶液，说明转基因技术在哪些方面有广阔的应用前景____．A．环境保护 B．食品工业 C．医药卫生 D．农牧业（2）“巨型小鼠”的培育技术与可以“生产出含有人体生长激素奶液的小鼠”的技术是否相同？请你列举出科学家应用这种技术还培育出哪些生物？-乐乐题库
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240位同学学习过此题，做题成功率90.0%
转基因动物--就是把人类所需要的基因转导到动物体内，使培养出的这种动物，能够生产出一些为人类所需要的物质，这种动物叫转基因动物．例如，人的生长激素能够刺激人体生长，身高增加，是一种很好的治疗侏儒症的药品．用引入基因的方法，培养出一种特殊的小鼠，在这种小鼠的奶液里，含有人类的生长激素，而且含量很高，1L小鼠奶可以提取0.5g人的生长激素．科学家培育转基因动物的主要目的之一，就是利用养殖动物来生产一些贵重的药品．各国科学家，已经把几十种基因转入动物，除小鼠外，还有小兔、猪、绵羊等，使这些动物产生胰岛素、乙型肝炎抗体（乙型肝炎疫苗）等药品．（1）科学家培育的小鼠能够产生含有“人体生长激素”的奶液，说明转基因技术在哪些方面有广阔的应用前景C&．A．环境保护&& B．食品工业&& C．医药卫生&& D．农牧业（2）“巨型小鼠”的培育技术与可以“生产出含有人体生长激素奶液的小鼠”的技术是否相同？请你列举出科学家应用这种技术还培育出哪些生物？
本题难度：一般
题型：填空题&|&来源：网络
分析与解答
习题“转基因动物--就是把人类所需要的基因转导到动物体内，使培养出的这种动物，能够生产出一些为人类所需要的物质，这种动物叫转基因动物．例如，人的生长激素能够刺激人体生长，身高增加，是一种很好的治疗侏儒症的药品．用引入...”的分析与解答如下所示：
题考查的是转基因技术的概念和应用，通过转基因技术的概念即可得到答案．
转基因技术概念：将外源基因直接导入动植物体它们的受精卵内并能在细胞中发挥作用的技术．类型包括植物转基因、动物转基因、不同生物间转基因等，转基因技术在农业生产、动物饲养和医药研究等诸多领域有着广泛的应用前景．（1）近年来体内电穿孔技术用于转基因研究的报道不断增多，在医学相关领域的优势也日趋显著，是一种有效的活体基因导入方法，转基因技术在我国生物制药领域的应用转基因技术在制药业中具有广阔的发展前景，我国的基因制药行业已经初具规模．&（2）“巨型小鼠”的培育技术与可以“生产出含有人体生长激素奶液的小鼠”的技术相同，均利用的转基因技术．转基因技术在种植业的应用转基因作物是植物转基因技术投入应用的最先成果之一．最初出现的转基因作物是为了解决一般的农业问题，如控制灾害、控制杂草和保护土壤等．随着基因技术及其设备的飞速发展，人们发现转基因技术对农作物育种方式的改变也是革命性的，最常见的转基因作物是大豆、玉米、油菜、棉花、西红柿和马铃薯．&转基因技术在养殖业中的应用将大大改变这一传统产业的原有面貌．转基因动物技术将有效提高畜禽的抗病性、品质和产量，为增加肉、蛋、奶和其他畜产品的生产提供了巨大的潜力．转基因技术在饲料工业领域也大有发展的前途．故答案为：（1）C&&（2）相同&& 例如最常见的转基因作物：大豆、玉米、油菜、棉花、西红柿和马铃薯等（列举应用这种技术培育出的其他类型的生物部分，答案要求学生说出其研究成果即可）
掌握转基因技术的原理和应用就可解答此题．
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转基因动物--就是把人类所需要的基因转导到动物体内，使培养出的这种动物，能够生产出一些为人类所需要的物质，这种动物叫转基因动物．例如，人的生长激素能够刺激人体生长，身高增加，是一种很好的治疗侏儒症的药...
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经过分析，习题“转基因动物--就是把人类所需要的基因转导到动物体内，使培养出的这种动物，能够生产出一些为人类所需要的物质，这种动物叫转基因动物．例如，人的生长激素能够刺激人体生长，身高增加，是一种很好的治疗侏儒症的药品．用引入...”主要考察你对“转基因技术的应用”
等考点的理解。
因为篇幅有限，只列出部分考点，详细请访问。
转基因技术的应用
与“转基因动物--就是把人类所需要的基因转导到动物体内，使培养出的这种动物，能够生产出一些为人类所需要的物质，这种动物叫转基因动物．例如，人的生长激素能够刺激人体生长，身高增加，是一种很好的治疗侏儒症的药品．用引入...”相似的题目：
下列是转基因植物的是&&&&大棚西瓜无籽西瓜彩色棉花太空椒
科学家对草食动物（如：牛、羊）的遗传基因进行改造，并利用这些草食动物的乳腺做“生产车间”，生产人类所需的某些药品或营养品等，这种“生产车间”叫&&&&仿生克隆转基因食品生物反应器
下列能改变生物体基因组成的是&&&&转基因技术克隆技术发酵技术植物组织培养技术
“转基因动物--就是把人类所需要的基因转导...”的最新评论
该知识点好题
1科学家把抗虫基因转入棉花中培育出新品种抗虫棉．科学家所利用的生物技术是&&&&
2目前人们不能完全接受转基因食品的主要原因是&&&&
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该知识点易错题
1下列哪种培育新品种的方法所用的时间最短&&&&
2有人构想将绿色植物的光合作用有关基因“嫁接”到人的基因组里，人就会象植物那样通过光合作用制造有机物了．实现这种构想的生物技术是&&&&
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动物细胞培养时为什么要用动物血清?
细胞培养液为什么要使用动物血清?有何作用?
，因为动物细胞的复制需要特殊的因子来辅助，而血清中含有这种辅助因子。
血清主要作用：
一方面提供营养
1)提供基本营养物质：氨基酸、维生素、无机物、脂类物质、核酸衍生物等，是细胞生长必须的物质。
2)提供激素和各种生长因子：胰岛素、肾上腺皮质激素（氢化可的松、地塞米松）、类固醇激素（雌二醇、睾酮、孕酮）等。生长因子如成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、血小板生长因子等。
3)提供结合蛋白：结合蛋白作用是携带重要地低分子量物质，如白蛋白携带维生素、脂肪、以及激素等，转铁蛋白携带铁。结合蛋白在细胞代谢过程中起重要作用。
另一方面对细胞有一定的保护作用。
1)提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤。
2)对培养中的细胞起到某些保护作用：有一些细胞，如内皮细胞、骨髓样细胞可以释放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。这种作用是偶然发现的，现在则有目的的使用血清来终止胰蛋白酶的消化作用。因为胰蛋白酶已经被广泛用于贴壁细胞的消化传代。血清蛋白形成了血清的粘度，可以保护细胞免受机械损伤，特别是在悬浮培养搅拌时，粘度起到重要作用。血清还含有一些微量元素
，因为动物细胞的复制需要特殊的因子来辅助，而血清中含有这种辅助因子。
血清主要作用：
一方面提供营养
1)提供基本营养物质：氨基酸、维生素、无机物、脂类物质、核酸衍生物等，是细胞生长必须的物质。
2)提供激素和各种生长因子：胰岛素、肾上腺皮质激素（氢化可的松、地塞米松）、类固醇激素（雌二醇、睾酮、孕酮）等。生长因子如成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、血小板生长因子等。
3)提供结合蛋白：结合蛋白作用是携带重要地低分子量物质，如白蛋白携带维生素、脂肪、以及激素等，转铁蛋白携带铁。结合蛋白在细胞代谢过程中起重要作用。
另一方面对细胞有一定的保护作用。
1)提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤。
2)对培养中的细胞起到某些保护作用：有一些细胞，如内皮细胞、骨髓样细胞可以释放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。这种作用是偶然发现的，现在则有目的的使用血清来终止胰蛋白酶的消化作用。因为胰蛋白酶已经被广泛用于贴壁细胞的消化传代。血清蛋白形成了血清的粘度，可以保护细胞免受机械损伤，特别是在悬浮培养搅拌时，粘度起到重要作用。血清还含有一些微量元素和离子，他们在代谢解毒中起重要作用，如SeO3,硒等。
细胞的复制需要特殊的因子来辅助，而血清中含有这种辅助因子。
血清主要作用：
●提供基本营养物质：氨基酸、维生素、无机物、脂类物质、核酸衍生物等，是细胞生长必须的物质。
●提供激素和各种生长因子：胰岛素、肾上腺皮质激素（氢化可的松、地塞米松）、类固醇激素（雌二醇、睾酮、孕酮）等。生长因子如成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、血小板生长因子等。
●提供结合蛋白：结合蛋白作用是携带重要地低分子量物质，如白蛋白携带维生素、脂肪、以及激素等，转铁蛋白携带铁。结合蛋白在细胞代谢过程中起重要作用。
●提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤。
●对培养中的细胞起到某些保护作用：有一些细胞，如内皮细胞、骨髓样细胞可以释放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。这种作用是偶然发现的，现在则有目的的使用血清来终止胰蛋白酶的消化作用。因为胰蛋白酶已经被广泛用于贴壁细胞的消化传代。血清蛋白形成了血清的粘度，可以保护细胞免受机械损伤，特别是在悬浮培养搅拌时，粘度起到重要作用。血清还含有一些微量元素和离子，他们在代谢解毒中起重要作用，如SeO3,硒等。
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大家还关注动物细胞培养和核移植技术学案
学习目标：
1.了解动物细胞培养的过程
2.比较动物细胞培养与植物组织培养区别
3.掌握动物体细胞核移植技术克隆动物的过程和应用前景
学习重难点：
动物细胞培养的过程。
动物体细胞核移植技术的原理。
学习过程：
【复习巩固】
1.细胞的全能性：
2.植物组织培养：
3.植物体细胞杂交：
【相关知识链接】
1.胰蛋白酶& 2.影响酶活性的因素
&&3.培养基和培养液&&&
4.植物体细胞杂交
【自主探究】
动物细胞工程常用的技术手段有____&&&&&&
____、______________、_____&&&&&&&&
___、____&&&&&&
____等。其中，_______&&&&&
____ 是其他动物细胞工程技术的基础。
一.动物细胞培养
1.为什么要进行动物细胞培养？
2.动物细胞培养概念：
动物细胞培养就是从动物机体中取出相关&&&&&&&&&&&
，将它分散成&&&&&&&&&&&&&&
，然后放在适宜的&&&&&&&&&&&
中，让这些细胞生长和增殖。
3.动物细胞培养过程：
培养动物所用的细胞大都取自__________或出生不久的__________器官或组织（因为这些组织或器官中的细胞&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&
）。将组织取出来后，先用__________等使组织分散成单个细胞，然后配置成一定浓度的&&&&&&&&&&&&&
。放在培养瓶中的具有一定浓度的细胞悬浮液在培养箱中培养的过程叫做__________；随着细胞生长的和增殖，培养瓶中的细胞越来越多，需要定期地用_________使细胞从瓶壁上脱离下来，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中培养，这称为____________。传代细胞中遗传物质没有发生改变的叫做__________；遗传物质发生了改变，并且带有________的特点，这种传代细胞叫做_________。
动物胚胎或幼
龄的器官组织
遗传物质改变
（培养条件下无限传代代）
细胞悬浮液
☆细胞株和细胞系的界定
1.幼龄与老龄动物的组织细胞比较，分化程度低的与分化程度高的组织细胞比较，哪一种更易于培养？思考一下，这是什么道理？
提示：细胞的衰老与动物机体的衰老有着密切的关系，细胞的增殖能力与供体的年龄有关，幼龄动物细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛，老龄动物则相反。所以，一般来说幼年动物的组织细胞比老年动物的组织细胞易于培养。同样，组织细胞的分化程度越低，则增殖能力越强，所以更容易培养。
2.进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分？用胃蛋白酶行吗？
提示：用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。胃蛋白酶作用的适宜pH约为2，当pH大于6时，胃蛋白酶就会失去活性。胰蛋白酶作用的适宜环境pH为7.2～8.4。多数动物细胞培养的适宜pH为7.2～7.4，胃蛋白酶在此环境中没有活性，而胰蛋白酶在此环境中活性较高，因此胰蛋白酶适宜用于细胞培养时的消化。
胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？
提示：胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。
3.什么是细胞贴壁？
⑴、概念：指培养过程中，细胞贴附在瓶壁上的现象。
⑵、培养贴附性细胞的要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒。
4.什么是接触抑制？
指贴壁细胞因为表面相互接触时导致细胞停止分裂增值的现象。
5.什么是原代培养？
指动物组织经过胰蛋白酶处理后的初次培养。一般能传代约10代，得到细胞株。细胞株的遗传物质与原细胞相比并没有发生改变。
6.什么是传代培养？
指贴壁生长的细胞（10代后）经胰蛋白酶处理后的继续培养，得到细胞系，能无限传代。
细胞系的细胞已经发生突变，基本上具有癌细胞的特性。
7.动物细胞培养要经过脱分化的过程吗？为什么？
提示：脱分化又称去分化，是指分化细胞失去特有的结构和功能变为具有未分化细胞特性的过程。植物的任何一部分，甚至单个细胞都具有长成完整植株的能力。但要发育成完整植株，必须先脱分化，脱分化的细胞具有发育成任何组织的能力，然后进行再分化，形成完整植株。植物细胞培养主要用于农林生产中的作物、苗木育种，快速繁育种苗、培育无病毒植株等，这就要求植物的组织或细胞先进行脱分化。动物细胞的培养有各种用途，一般而言，动物细胞培养不需经过脱分化过程。因高度分化的动物细胞发育潜能变窄，失去了发育成完整个体的能力，所以，动物细胞也就没有类似植物组织或细胞培养时的脱分化过程了。要想使培养的动物细胞定向分化，通常采用定向诱导动物干细胞，使其分化成所需要的组织或器官。
4.动物细胞培养的条件
动物细胞培养的条件有：
⑴&&&&&&&&&&&&&&&&
：对&&&&&&&&&&
&&&&&&&&&&&进行无菌处理，还可在培养液中添加一定量的&&&&&&&&
。此外，应定期&&&&&&&&&&&&&&
⑵&&&&&&
：合成培养基中有&&&&&&&
、&&&&&&&&&
、&&&&&&&&&&&
、&&&&&&&&&&
、&&&&&&&&&&&
等，通常需加入&&&&&&&&&&
和&&&&&&&&&&
⑶&&&&&&&&&&&&&&
：适宜温度为&&&&&&&&&&&&&&&
，适宜pH为&&&&&&&&&&
。⑷&&&&&&&&&&&&
：主要是&&&&&
　思考： 1.动物细胞培养液的成分和性质?
　提示：水、无机盐、葡萄糖、氨基酸、维生素和动物血清，属于液体培养基
2.为什么对动物细胞进行培养时通常要添加血清？
提示：血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等，其中蛋白质主要为白蛋白和球蛋白。氨基酸有多种，是细胞合成蛋白质的基本成分，其中有些氨基酸动物细胞本身不能合成（称为必需氨基酸），必须由培养液提供。血清激素有胰岛素、生长激素等及多种生长因子（如表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、类胰岛素生长因子等）；血清还含有多种未知的促细胞生长因子、促贴附因子及其他活性物质，能促进细胞的生长、增殖和贴附。因此，细胞培养时，要保证细胞能够顺利生长和增殖，一般需添加10%～20%的血清。
5.动物细胞培养技术的应用
动物细胞培养可应用于&&&&&&&&&&
（如病毒疫苗、&&&&&&&&
、&&&&&&&&&&
等），检测&&
，用于生理、病理、药理等方面的研究（如&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&
思考：请设计实验，通过细胞培养技术检测某一河流是否受污染以及污染的程度?　　
提示：可以将实验分为两大组，一组用蒸馏水配置动物细胞培养液（对照组），一组用河水配置动物细胞培养液（实验组），分别用这两种培养液培养小鼠细胞，过一段时间后，通过显微镜观察两组培养液中细胞的形态，计算畸形率，如果两组培养液中细胞的畸形率大体相等，则说明河水没有被污染，如果实验组的畸形率高于对照组，可以判断河水被污染，可以根据畸形率的大小判断污染程度，畸形率越大，污染越严重
二.动物体细胞核移植和克隆动物
1.阅读教材47页相关文字，回答：
对动物来说，为什么不能用类似植物组织培养的方法获得完整的个体？
2.动物核移植：
将动物的一个细胞的&&&
&&&&&&，移入一个已经&&&&&&&&&&&&&&&
的卵母细胞中，使其&&&&&&&&
并发育成一个&&&&&&&&&&&
，这个胚胎最终发育成动物个体。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物。可分为&&&&&&&&&&&&
和&&&&&&&&&&&&&&&&&&
3.克隆的条件：⑴具有包含物种&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&
的活细胞；⑵能有效调控细胞核发育的&&&&&&&&&&&&&
；⑶完成&&&&&&&&&&&&
的必要的环境条件。
4.体细胞核移植的过程：
&&&&①、供体体细胞经细胞培养后，提取细胞核；
&&&&②、提取卵巢卵母细胞，在其减数分裂第二次分裂中期除去细胞核，制成无核细胞质；
&&&&③、将供体核与无核卵母细胞质融合，并培养成早期胚胎；
④、将早期胚胎移植到代孕母体子宫内，发育成新个体
&1.在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？
提示：为使核移植的胚胎或动物的遗传物质全部来自有重要利用价值的动物提供的体细胞，在供体细胞的细胞核移至受体细胞之前，必须将受体细胞的遗传物质去掉或将其破坏。
2.用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，想一想，这是为什么？
提示：培养的动物细胞一般当传代至10～50代左右时，部分细胞核型可能会发生变化，其细胞遗传物质可能会发生突变，而10代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型。因此，在体细胞核移植中，为了保证供体细胞正常的遗传基础，通常采用传代10代以内的细胞。
3.你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动物，是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？
提示：克隆动物绝大部分DNA来自于供体细胞核，但其核外还有少量的DNA，即线粒体中的DNA是来自于受体卵母细胞。所以，用教材中所述的方法克隆的动物不是供核动物完全相同的复制。
此外，即便动物的遗传基础完全相同，但动物的一些行为、习性的形成与所处环境有很大关系，核供体动物生活的环境与克隆动物所生活的环境不会完全相同，其形成的行为、习性也不可能和核供体动物完全相同，从这一角度看，克隆动物不会是核供体动物100%的复制。
视野拓展：克隆羊多莉一Dolly的诞生过程
1、哪只羊可以是公羊?（B羊）
2、Dolly的性状和B羊完全相同说明什么问题?
　（生物的性状主要受细胞核控制）
3、Dolly体内的遗传物质全部来自B羊吗?为什么?
　（不是，因为A羊为Dolly提供了细胞质，所以只有核物质来自于B羊）
　　4、科学家们设计用B、C羊的目的是什么？如果只用A羊能获得一只小羊吗?（通过此设计来比较Dolly的性状和哪只羊相似，以此证明Dolly的遗传物质主要来自于B羊）
意义：克隆动物不仅可以作为生物学和医学研究的实验动物，而且对于改良动物品种获得更优秀动物个体用于生产、治疗人类疾病、保护濒危动物等，都有重要的应用价值。
5.体细胞核移植技术的应用前景：
动物体细胞核移植可用于加速家畜&&&&&&&&&&
进程，促进&&&&&&&&&&&
繁育；保护&&&&&&
生产&&&&&&&&&&&
；作为异种移植的&&&&&&&&&&&
；用于组织器官的&&&&&&&&&&&
6.体细胞核移植技术存在的问题：
克隆动物存在&&&&&&&&&&&
、&&&&&&&&&&&&
、&&&&&&&&&&&&&
【重难热点归纳】
1.植物组织培养和动物细胞培养的比较
植物组织培养
细胞全能性
固体：营养物质、激素
培育成植株
快速繁殖培育无病毒植株
动物细胞培养
液体：营养物质、动物血清
培育成细胞株或细胞系
获得细胞或细胞产品等
2.把握动物体细胞移植的特点
动物体细胞移植依据的原理还是细胞的全能性，与植物组织培养一样属于无性生殖。虽然细胞核内具有发展成为一个完整个体所需的全套基因，但动物体细胞分化程度较高，因此很难表达全能性。卵细胞体积大，易于操作，含有促使细胞核表达全能性的物质和营养条件。将体细胞核移植入去核卵细胞内，既保证了重组细胞的完整性，又能刺激体细胞核表达其全能性，发展成为一个新的个体。动物体细胞移植产生的新个体的亲本有三个：体细胞核供体、卵细胞细胞质供体、代孕母体。新个体细胞核基因型与体细胞核供体完全一样，因此新个体性状与体细胞核供体基本相同。卵细胞细胞质中也有少量的DNA，新个体性状与卵细胞细胞质供体有一些地方相同。代孕母体没有为新个体提供遗传物质，新个体性状与代孕母体基本没有联系。
【经典例题剖析】
1.为了使用于培养的动物组织细胞分散开以便配制成一定浓度的细胞悬浮液，选取来的动物组织应选用下列哪种物质处理
A.胃蛋白酶&&&&&
B.胰蛋白酶&&&&&
C.盐酸&&&&&&
D.胰脂肪酶
[解析]在动物组织细胞的间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，它们将细胞网络起来形成具有一定的弹性和韧性的组织和器官，而弹性纤维易被胰蛋白酶在中性略偏碱性环境下催化分解，而胃蛋白酶在pH为1.8左右催化效率最高，此环境动物细胞被破坏。&&&&&&&
&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&[答案]B
2.下列属于动物细胞培养与植物组织培养主要区别的是
A.培养基成分不同&&&&
B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行
C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能
D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培养成植株
[解析]考查动物细胞培养与植物组织培养的主要区别。动物细胞培养与植物组织培养有许多相似之处，也有许多不同点。其主要不同点是它们的培养基的成分不同。动物细胞培养的培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐和维生素，另外还有动物血清。植物组织培养所需要的培养基包含植物生长和发育的全部营养成分，如矿质元素、蔗糖、维生素、植物激素和有机添加物，没有动物血清。&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&
3.在克隆多利羊的过程中，下列哪项技术没有运用到
A.细胞培养技术&&&&
B.细胞核移植&&&
C.胚胎移植技术&&&
D.基因工程技术
[解析]考查克隆羊产生的过程。多利羊的培育过程是：将一只母羊（A羊）卵细胞的细胞核吸出，得到不含核的卵细胞。然后，将实验室中培养的另一只母羊（B羊）的乳腺上皮细胞的细胞核注入到无细胞核的卵细胞中并进行电刺激，这样就通过核移植技术形成了一个同时含有A羊核遗传物质和B羊细胞质的重组卵细胞。融合后的卵细胞经过体外细胞培养形成早期胚胎。然后把这个胚胎移植到第三只羊（C羊）的子宫中，让C羊为胚胎发育提供发育场所和营养物质，这个过程利用了胚胎移植技术。胚胎就在C羊子宫内发育成熟。C羊产下的羊就是克隆羊多利。从以上分析可以看出，多利产生的过程中没有使用基因工程技术。&&
&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&[答案]：D
4.1997年，美国威斯康星州的一个奶牛场有一头名叫卢辛达（Lucinda）的奶牛，年产奶量为30.8
t，创造了世界奶牛产奶量最高新纪录。目前世界各国高产奶牛场奶牛，年平均产奶量一般为十几吨，而我国奶牛产奶量年平均水平仅为3～4
（1）能利用体细胞核移植技术克隆高产奶牛卢辛达吗？请说明理由。
提示：可以用体细胞核移植技术克隆高产奶牛卢辛达。卢辛达的产奶量很高，说明它有高产奶的遗传基础，利用卢辛达的体细胞克隆的奶牛其遗传物质基本上全部来自该奶牛，其克隆牛具有高产的遗传基础，如果精心培育和饲养，有可能在世界范围内推广，克隆牛再与高产的公牛自然繁殖，可得到很多高产的后代，从而加快奶牛改良进程。
但同时需注意，该克隆牛不能无限制地推广，其数量不宜过多，尤其是在小范围内不能无限的繁殖，以避免奶牛群出现近亲繁殖而引起种质衰退。
（2）如果将克隆高产奶牛卢辛达的任务交给你，你将如何对它进行克隆？
提示：首先从卢辛达耳朵（也可用别的组织、器官，耳朵在活体上容易取）上剪取一小块组织，在体外培养获得该组织（如软骨组织）的细胞。从屠宰场取废弃的牛卵巢，抽取卵母细胞体外培养成熟。用显微针去除卵母细胞的核，再将耳细胞注入卵母细胞，用电刺激方法使卵母细胞与体细胞融合，这时供体核就进入了受体卵母细胞，再用电刺激或化学物质激活注入了体细胞核的卵母细胞，使其完成减数分裂和发育过程。核移植胚胎在体外短时间培养后，挑选正常卵裂的胚胎植入经同期发情处理的受体母牛体内。
4.体细胞核移植技术在研究和应用上还存在什么问题？请你查阅资料，了解这方面的前沿动态。
提示：在研究方面，克隆动物基因组重新编程的机制尚不清楚，克隆技术效率低，克隆动物畸形率高、死亡率高、易出现早衰等问题。这些问题尚在研究中。在应用上，生产克隆动物费用昂贵，距大规模应用还有一定距离。
知识巩固：
1．下列与动物细胞培养有关的表述中，不正确的是&&&&&&&&&&
A．培养液通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清
B．原代培养的细胞一般传至10代左右便会出现生长停滞
C．动物细胞培养一般能够传到40～50代，但其遗传物质发生了改变
D．动物细胞培养可用于检测有毒物质和获得大量自身健康细胞
2．生物技术的发展速度很快，已灭绝生物的“复生”将不再是神话。如果世界上最后一只野驴刚死亡，以下较易成功“复生”野驴的方法是&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&
A．将野驴的体细胞取出，利用组织培养技术，经脱分化、再分化，培育成新个体
B．将野驴的体细胞两两融合，再经组织培养培育成新个体
C．取出野驴的体细胞核移植到母家驴的去核卵细胞中，经孕育培养成新个体
D．将野驴的基因导入家驴的受精卵中，培育成新个体
3．一只羊的卵细胞核被另一只羊的体细胞核置换后，这个卵细胞经过多次分裂，再植入第三只羊的子宫内发育，结果产下一只羊羔。这种克隆技术具有多种用途，但是不能（&
A．有选择地繁殖某一性别的家畜&&&&&&&&&&&&
B．繁殖家畜中的优秀个体
C．用于保存物种&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&
D．改变动物的基因型
4．下列哪—项属于克隆&&&&&&&&&&&&&&
A．将鸡的某个DNA片段整合到小鼠的DNA分子中&&&&&&&&&
B．将抗药菌的某基因引入草履虫的细胞内
C．将鼠骨髓瘤细胞与经过免疫的脾细胞融合成杂交瘤细胞&&
D．将某肿瘤细胞在体外培养繁殖成一个细胞系
5．有关全能性的叙述，不正确的是&&&&&&&&
A．受精卵在自然条件下能使后代细胞形成完整个体，因此全能性最高&&&&
B．生物体内细胞由于分化全能性不能表达
C．卵细胞与受精卵一样，细胞未分化，全能性很高&&&&&&&&&&&&
D．植物细胞离体培养在一定条件下能表现出全能性
6．下列属于组织培养但不是克隆的是&&&&&&&&&&
A．将花粉离体培养成单倍体植株& B．芽发育成枝条
C．根尖分生区发育成成熟区&&&&&
D．上皮细胞无性繁殖产生的细胞群
7．动物细胞培养液和植物组织培养液的共有成分是&&
A．葡萄糖&&&&&&&&
B．蔗糖&&&&&&&
C．动物血清&&&&&&&&
8．动物细胞培养的细胞来自于&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&
A．任何个体的细胞&&&&&&&&&&&&&&&&&&
B．只能取自动物胚胎细胞
C．只能取自幼龄动物的组织细胞&&&&&&
D．胚胎或幼龄动物的器官和组织细胞
9．动物细胞工程常用的技术手段中，最基础的是&&&&&&&&
　　A.动物细胞培养　B．动物细胞融合 C．单克隆抗体 D．胚胎、核移植
10．细胞株的特点是&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&
　　A．遗传物质没有改变，可以无限传代
　　B．遗传物质发生改变，不可无限传代
　　C．遗传物质没有改变，不可无限传代
　　D．遗传物质发生改变，且有癌变特点，可以无限传代
11．关于杂交瘤细胞的不正确叙述是&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&
　　A．有双亲细胞的遗传物质　　B．不能无限增殖
　　C.可分泌特异性抗体　　　　 D．体外培养条件下可大量增殖
12.动物细胞融合技术最重要的用途是&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&
　　A.克服远源杂交不亲和　B.制各单克隆抗体　C.培育新品种　　　D.生产杂种细胞
13.在动物细胞培养中有部分细胞可能在培养条件下无限制地传代下去，这种传代细胞称之为:
A．原代培养&&&
B．传代培养&&&&
C．细胞株&&&&&&&
14.如果用动物的细胞进行克隆实验应该选择的细胞核不能是　　　　　　　　　　（& ）
A、乳腺细胞的&&
B、卵细胞的&&
C、胃腺细胞的&& D、囊胚时期的胚胎细胞的
15．（多选）美国杜克大学医疗中心的一个研究小组利用成年猪的动脉血管细胞和模拟胚胎环境的新型生物反应器,成功地在实验室里培育出新的动脉血管.这种血管的外形和功能都与真的血管一样,这一研究成果是生物组织培养领域的重大进展.下列关于以上技术的叙述中,正确的是:&
A．属于“克隆”&&&
B．可能要利用去核卵细胞&
C．关键是激发血管细胞的全能性&&&
D．关键是激发血管细胞发育成血管的潜能
16．一只羊的卵细胞核被另一只羊的体细胞核置换后，这个卵细胞经过多次分裂，再植入第三只羊的子宫内发育，结果产下一只羊羔。这种克隆技术具有多种用途，但是不能（&&
A．有选择地繁殖某一性别的家畜&&&&&&&&&&&&
B．繁殖家畜中的优秀个体
C．用于保存物种&&&
&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&D．改变动物的基因型
17．按操作目标，使用下列试剂生物处理组织细胞恰当的是&&&
A．观察植物细胞的有丝分裂：果胶酶&&&
B．处理用于细胞融合的动物细胞：胰蛋白酶
C．处理用于细胞融合的动物细胞：CaCl2&&
D．处理用于细胞融合的植物细胞：盐酸
18．有关全能性的叙述，不正确的是 （& ）
A．受精卵在自然条件下能使后代细胞形成完整个体，因此全能性最高&&&
B．生物体内细胞由于分化全能性不能表达
C．卵细胞与受精卵一样，细胞未分化，全能性很高&&&&&&&&&&&&&
D．植物细胞离体培养在一定条件下能表现出全能性
19.中国科学院动物研究所陈大元研究员带领的科研小组，首先选择了兔子卵细胞作为受体卵。他们采用了两种核移植方法，即电融合法和核直接注射法，把大熊猫的体细胞核移入兔的去核卵细胞质中。经过精心的实验，他们已得到了大熊猫的重构胚。实验结果显示，大熊猫的3种体细胞移植到兔去核卵母细胞中均可以卵裂，并进行早期发育，3种供体细胞核移植的融合率在55%~59%之间；融合后的重构卵进行培养后，囊胚率以乳腺细胞最高，而骨骼肌细胞的最低；重构囊胚细胞的染色体数目为42条，与供体（大熊猫）细胞染色体数目相同，与受体动物家兔的染色体数（44条）不同。经DNA指纹分析，也证明了重构囊胚细胞的遗传特性为大熊猫的遗传特性。实验还证明，卵细胞质使体细胞核去分化不具有特异性。大熊猫异种重构胚能否在寄母子宫着床乃至进行全程发育还是道难题，现正在深入实验。
根据以上材料，回答下列问题：
（1）下面叙述除哪项外都是动物克隆技术的益处？_____________。
A.探索异种克隆技术，拯救濒危物种
B.克隆技术与转基因技术结合，使异种器官移植成为可能
C.克隆技术的重要性在于复制出一个动物或一批生物
D.克隆技术的研究将帮助人类认识衰老过程
（2）“去分化”是指____________。
（3）细胞分化为囊胚，囊胚由许多细胞构成，其细胞增殖方式为_____________。
（4）科技预测：请预测大熊猫异种重构胚如果着床成功并顺利产生发育，其表现性状可能是_____________。
A.大熊猫的特点&&&&
B.兔子的特点C.兼有大熊猫与兔子的特点&&
D.不具生殖能力
20.年，美国科学家斯提瓦用胡萝卜根的悬浮培养细胞进行人工培养，发现单个细胞能像受精卵发育成胚一样的途径，发育成完整植株。1997年英国维尔穆特等人从白面母绵羊体内取出乳腺上皮细胞静息培养，然后把它的核移入黑面母绵羊去核的卵细胞中形成重组细胞，并将重组细胞培养成胚胎，将胚胎植入另一母羊的子宫内后获得了克隆羊多利。
阅读这段材料后，回答下列问题：
（1）文中的悬浮培养细胞和乳腺上皮细胞均为____________。
（2）斯提瓦的实验证明了____________。维尔穆特的实验证明了_____________。从细胞结构和遗传角度分析，两位科学家实验结论的得出，根本原因在于____________。
（3）斯提瓦和维尔穆特实验的差别在于____________。
（4）维尔穆特的实验技术又称为_____________________技术。该技术的经济意义在于：①_____________；②____________。
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