蛋白酶抑制剂混合物药物的筛选方法有哪些?

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2012-02-27 13:32 标签： 蛋白酶抑制剂混合物
HIV-1蛋白酶的表达、纯化及其抑制剂体外筛选方法的建立--《Virologica Sinica》2006年02期
HIV-1蛋白酶的表达、纯化及其抑制剂体外筛选方法的建立
【摘要】：从HIV-1IIIB病毒RNA经RT-PCR得到HIV-1蛋白酶编码序列,克隆到pet28a质粒中构建HIV-1蛋白酶表达载体。阳性克隆转染E.coliBL21DE3,经IPTG诱导,蛋白酶以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白量的40%。包涵体经TritonX-100洗涤后溶解于8M尿素,溶解后的蛋白溶液经sephacyls-200H.R分子筛柱纯化后纯度达到90%以上,收集蛋白酶峰稀释复性并通过超滤进行浓缩。经检测,纯化的蛋白酶具有较高的活性。用荧光标记的蛋白酶底物检测不同浓度indinavir对蛋白酶活性的影响,表明该方法可以用于蛋白酶抑制剂的筛选。
【作者单位】：
【关键词】：
【基金】：
【分类号】：R346【正文快照】：
艾滋病在过去20多年里已经造成2000多万人死亡,目前全世界HIV感染者已达4000万人。由于HAART(Highly active antiretroviral therapy)的应用,从1998年起,美国HIV感染者的死亡率逐年下降。然而,由于HIV易变异,耐药性和药物毒副作用等问题日趋严重[1,2],促使人们不断寻找新的抗H
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具有蛋白酶抑制剂活性成分中药的筛选
摘　要：蛋白酶抑制剂（proteinase inhibitor，PI）泛指具有抑制胰蛋白酶活性作用的一类物质，广泛存在于动、植物和微生物中。蛋白酶抑制剂在体内能与相应蛋白酶的活性部位和变构部位结合，抑制酶的催化活性或阻止酶原转化为有活性的酶，使体内蛋白酶抑制剂一蛋白水解酶形成一定的动态平衡，在生物的生理体系以及一系列的生理病理过程中起着关键性的调控作用，是生物体内免疫系统的重要组成部分。蛋白酶抑制剂有广泛的生物学活性和作用，在临床治疗上也有很多用途，如抗炎、抗感染作用，抗癌、抗肿瘤、抗真菌作用等。最令人瞩目的是在HIV和肿瘤治疗中的应用。在众多抗HIV药物中，蛋白酶抑制剂是重要的一员。但在临床应用中，化学合成的蛋白酶抑制剂生物利用度较低，在延长患者生命的同时也不可避免的产生一些副作用，包括血脂异常、脂肪异常分布、胰岛素抵抗、使冠心病的危险性显著增加、容易产生耐药性、单独使用效果不明显，在治疗艾滋病中需与其他抗艾滋病药物联合使用即所谓的鸡尾酒疗法，且生产成本高，价格昂贵，难以推广。以天然植物活性物质为有效成分的植物源蛋白酶抑制剂具有环境兼容性好、
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