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北京耀盛净化工程有限公司
北京耀盛净化工程有限公司关于我们
公司名称: 北京耀盛净化工程有限公司
主营产品: 风淋室、货淋室、风淋走廊、超净台、通风厨、传递窗、、洁净棚、实验室装修，电子厂净化车间、GMP净化车间、无尘室、微生物实验室、PCR实验室、百级，千级，万级，十万级，三十万级专业人做专业事等多个领域
经营模式: 生产型,服务型
员工规模: 51 - 100 人
年营业额: 51 - 100 人
年出口额: 人民币 5000万 - 1亿元
年进口额: 人民币 500 - 1000 万元
企业成立: 2005
主要市场: 大陆,港澳台地区,东亚
商铺状态: 已开通 2 年
我公司专业做净化工程及设备，风淋室、货淋室、风淋走廊、超净台、通风厨、传递窗、、洁净棚、实验室装修，电子厂净化车间、GMP净化车间、无尘室、微生物实验室、PCR实验室、百级，千级，万级，十万级，三十万级专业人做专业事等多个领域有需要的可以联系我
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分析：阅读题干可知，本题是考查微生物的分离和培养的题目，根据选项涉及的具体内容梳理相关知识点分析判断．
解①对取样的土壤样品要在超净台上进行稀释，①正确；②分离自生固氮菌的培养基中不能加入氮源，这样可起到选择培养的作用；②错误；③对培养基要进行高压蒸汽灭菌，③错误；④本实验的接种方法可以采用点接法或平板划线法，④正确；⑤接种以后对菌种的培养时间不能太长，原因是菌落会分泌含氮化合物，引起杂菌生长，起不到选择的作用，⑤正确；故答案为：C
点评：本题的知识点是微生物的分离和培养的实验操作步骤及注意事项，主要考查学生对微生物培养技术的掌握和运用，试题难度一般．
请在这里输入关键词：
科目：高中生物
下列各项叙述错误的是（　　）
A、判断某个基因的利与害，需要结合多种环境因素进行综合考虑B、若不吃蚕豆，蚕豆的致病基因就不会对人体造成危害C、人类因缺乏古洛糖酸内酯氧化酶基因而不能合成维生素CD、苯丙酮尿症的发病率与患者的饮食无关
科目：高中生物
下列关于人体内性染色体的叙述，正确的是&（　　）①性染色体上的基因在每个体细胞中都能表达②每个细胞内的性染色体数都是相同的&&③正常情况下，男性某细胞内可能不含Y染色体④正常情况下，女性某细胞内可能不含X染色体．
A、①③B、②③C、③④D、②④
科目：高中生物
如图为反射弧模式图，下列叙述正确的是（　　）①若在a点上刺激，神经发生兴奋，从这一点向肌肉方向传播，肌肉就收缩；②如果给予相同的刺激，刺激点a与肌肉之间的距离越近，肌肉的，收缩就越强；③a点兴奋传导的方向与膜内电流的方向是一致的；④当兴奋时，神经细胞膜的离子通透性会发生急剧变化钾离子流入细胞内；⑤a处产生的兴奋不能传递给脊髓内的中间神经元．
A、②③⑤B、①②④C、①③④D、①③⑤
科目：高中生物
下列实验或过程中没有运用放射性同位素标记法的是（　　）
A、T2噬菌体侵染大肠杆菌实验B、通过检测标记基因是否表达，筛选出含有目的基因的重组DNA分子C、验证DNA的复制方式为半保留复制D、研究胰岛素的合成、运输和分泌的过程
科目：高中生物
如图为利用生物技术获得生物新品种的过程，据图回答：（1）在基因工程中，A表示，如果直接从苏云金杆菌中获得抗虫基因，①过程使用的酶区别于其他酶的特点是，B表示．（2）B→C为转基因绵羊的培育过程中，其中④用到的生物技术主要有动物细胞培养和．在动物细胞培养过程中，需让培养液中含有一定量的CO2，其主要作用是．（3）B→D过程中，若使用棉花的体细胞为受体细胞，⑤表示的生物技术是．要确定目的基因（抗虫基因）导入受体细胞后，是否能稳定遗传并表达，需进行检测和鉴定工作，请写出在个体水平上的鉴定过程：．
科目：高中生物
根据格里菲思的肺炎双球菌的转化实验，回答下列问题：（1）实验中涉及的S型细菌和R型细菌可以通过观察培养基上的菌落来区分，区分的依据是．（2）该实验（能/不能）证明DNA是转化因子，因为．（3）转化形成的S型细菌的转录是在中进行的，转录的模板是．R型细菌被转化的这种现象属于可遗传变异的．（4）如图所示，在翻译过程中，少量的信使RNA分子就可以合成大量的蛋白质，原因是．
科目：高中生物
【生物--选修3现代生物科技专题】如图是从酵母菌获取某植物需要的某种酶基因的流程，结合所学知识及相关信息回答下列问题：（1）图中cDNA文库基因组文库（填“大于”、“等于”或者“小于”）．（2）①过程提取的DNA需要的切割，B过程是．（3）为在短时间内大量获得目的基因，可用扩增的方法，其原理是．（4）目的基因获取之后，需要进行，其组成，必须有以及标记基因等．此步骤是基因工程的核心．（5）将该目的基因导入某双子叶植物细胞，常采用的方法是，其能否在此植物体内稳定遗传的关键是，可以用技术进行检测．（6）如果要想使该酶活性更强或具有更强的耐受性，需要对现有蛋白质进行改造，这要通过基因工程延伸--蛋白质工程．首先要设计预期的，再推测应有的氨基酸序列，找到相对应的．（7）除植物基因工程硕果累累之外．在动物基因工程、基因工程药物和基因治疗等方面也取得了显著成果，请列举出至少两方面的应用．
科目：高中生物
动物的细胞质中有一种与细胞衰老有关的复合体结构，其组成物质全部是由基因控制合成的，其中一些物质是由线粒体中DNA控制合成的．由这种复合体结构变化引起的细胞衰老（　　）
A、只受细胞核控制B、只受细胞质控制C、由细胞核和细胞质共同控制D、不受细胞核和细胞质控制
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电话：020-38858 传真 020-7& [求助]养细胞两个月，三次细菌污染，是不是我这人有问题？
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[求助]养细胞两个月，三次细菌污染，是不是我这人有问题？
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[求助]养细胞两个月，三次细菌污染，是不是我这人有问题？
我真的要疯掉了，被打败了
第一次是原代长大十几天的一皿和原代3天的一皿
不知道为什么，前一天晚上还像个样子，准备传代的，第二天就全污染了
然后继续用原来的培养基，继续取材
这里说下，我养的是大鼠的MSC细胞，听说是非常好养的一种
后面我就每个星期取一只，细胞也长起来了，也传代了
传到P3代，准备开始流式分选了，就在准备做的前一天晚上
细胞又污染了
而且是所有的细胞，一共有十皿，有P0--P2代的，我也没给它们集体换过液
每只老鼠的都是分开放的，搞不清楚怎么就突然都细菌污染了
我的培养基都是买的袋装的，自己配，配好了抽滤
培养基也做了无菌试验，结果也是好的
我坚持，继续，昨天我又取了一只老鼠，昨天离心完感觉沉淀还很多，心里感觉还不错
今天去看，又黄了，明显的细菌污染
镜下可以看到一层的小黑虫在里面晃，那场面真是难受
我就是想不明白了，污染在我这里也太常见了，是不是我个人有问题啊？
有人帮我分析一下吧
先在这里谢过各位了
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详细说下我的实验流程：
首先是把装培养基的新瓶子洗涤，泡酸，再高温高压消毒灭菌。我用的都是一种蓝盖的广口瓶
培养基是GIBCO公司的进口的IMDM粉末，用三蒸水溶解，加碳酸氢钠调PH值到7.0-7.2
用专门的滤器抽滤
滤器是经高温高压消毒的，加上0.22的微孔滤膜
然后进细胞房抽滤，抽滤好的基培做无菌试验，结果培养基颜色还是清亮的，没有沉淀，没有杂质
完培在用之前配的，用的是进口的HYCLONE 的胎牛血清，配完后做无菌试验，结果也是好的。这里做无菌试验都很简单，就是把培养基用枪吸到个5ML离心管中，放细胞专用的培养箱的，2天后观察
看我的细胞感觉最大问题就是培养基，但是无菌试验也做了，我就不明白了
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然后谈取材：
大鼠脱颈处死，放75％酒精里泡个3分钟
然后就先剥皮，再分离骨头，把骨头上的肉尽量去除
把股骨和胫骨取出来，放解剖液里。这里用的解剖液就是基培加上抗生素
抗生素用的是青霉素和链霉素
然后进超净台，把骨头上的肉剔干净，把骨头两端去掉，有一端是把关节拧开的，另外一端是剪刀剪开的。进超净台以后的器械都是干净的，和取骨头时用的是分开的
然后就是用5ML一次性注射器，用IMDM基培把骨髓冲出来。我一开始用的是加了双抗的基培，后来觉得加了对细胞生长不好，就改用不加的了
骨髓冲出来后，放入5ML离心管中，1000RM离心5MIN
取沉淀，用加了血清的IMDM重悬，种到一个大皿里
这样取材就结束啦
不知道是不是取材有问题，因为我养的细胞状态一直不好，原代要长10天才能传代
传代后的细胞活力也不好，有拉网现象。
但是我也有两只老鼠的细胞长的传到了P3代，传代后3天就能长满的
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污染最大的可能来源于血清,营养太高,无抗生素,多次取用,非常容易污染.
其次是培养基,如果不加抗生素,对操作技术要求很高,
双抗对细胞的抑制作用不明显,还是可以加的,能对抗轻微的细菌污染.
如果你不同期换液的培养物,同一个时间污染(同时变黄)
是不是考虑培养箱内空气严重污染.
其他人的细胞会不会污染.
如果细胞对PH要求不高,试试密闭培养瓶,会不会被污染.
我以前到一个实验室做一段时间的细胞培养(杂交瘤).
他们实验室如果有一个人的东西污染就把温箱给消毒一遍.
所有人的东西都要处理一遍.
还有你的超净台,是不是空气过滤功能有问题,吹进去的风里大量含菌,
和你共用一个超净的人,他们有污染么?
污染肯定是有原因的,把所有的操作,从头到尾考查一遍,总会有收获的.
建议一次配大量基础培养基(含双抗),分装后放-30度冷冻.
血清也分装冷冻.
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建议你看看培养箱中的水，看水污染了吗？可能需要重新清洗培养箱
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谢谢你们啊
至少还有人关心我
整个细胞房就我一个人在污染，我都快被驱逐啦
所以还是考虑自己操作的原因
准备明天再取一次看看，重新配完培
冲骨髓的时候还是加双抗
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又想到一个问题，你们取材的时候把骨头从老鼠身上剪下来之前把肉剔的很干净吗？
我发现如果把肉剔很干净很容易把骨头损伤
骨头上面像是有骨髓渗出来
其实我更喜欢肉带的多一点放解剖液里再进超净台去肉
有经验的来谈谈吧，到底哪种方法比较好啊？
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直接在超净台取骨头啊！老鼠泡过酒精，入超净台操作，没问题的。倒是像你那样，问题还大点
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直接在超净台取骨头啊！老鼠泡过酒精，入超净台操作，没问题的。倒是像你那样，问题还大点
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但是我们这里其它人取都是在超净台外面的
怕老鼠身上病菌太多，会污染超净台
不过照你那么说，还是肉稍微留多点比较好吗？
至少骨头还没有暴露在外界环境呢
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我觉得培养原代细胞最好是加上双抗，虽然对细胞有一定影响，但污染程度会大大降低~~