竞争性放射分析法的编译原理分析法是什么

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2012-12-25 10:10 标签： 编译原理分析法
放射性免疫分析法_百度百科
关闭特色百科用户权威合作手机百科 收藏 查看&放射性免疫分析法本词条缺少名片图，补充相关内容使词条更完整，还能快速升级，赶紧来吧！
放射性免疫分析法是80年代以来被日益广泛应用的超微量分析技术具有灵敏度高和特异性强的突出优点它又分为两种方法性&&&&质超微量分析技术等缺&&&&点重复性差，非特异性结合率高 一竞争性RIA又称传统RIA
基本原理是根据被测定的抗原物质和其标记物标记抗原同特异性抗体之间存在着竞争性的结合主要特点标记的是抗原其原理未知抗原Ag+标记抗原Ag +已知定量抗体Ab标记抗原与抗体复合物AgAb+未知抗原与抗体复合物Ag Ab+游离标记抗原Ag 去除未知抗原多标记抗原与定量抗体结合的复合物就少表现为负相关若以Ag和Ag*分别代表待测抗原和标记抗原Ab代表抗体Ag·Ab和Ag*·Ab分别代表非标记的和标记的抗原抗体复合物则当Ag与Ag*同时存在时这一系统呈如图所示的平衡关系
在Ab恒定时由于Ag的存在而使Ag*·Ab的产量减少若F代表未结合的Ag*B代表Ag*·Ab复合物则B/F与Ag之量存在函数关系若以B/F为纵坐标Ag浓度ng/ml为横坐标则可绘制出剂量反应标准曲线测量未知样品时只需在同样条件下测量B和F的放射性即可由标准曲线求出被测样品的浓度而不需纯化样品本方法要求有高纯度的标记抗原测定标准曲线时要寻找合适的标准品标准品的免疫活性应与待测样品相当且不含放射性免疫干扰物
临床上甲胎蛋白AFP癌胚抗原CEA8 一微球蛋白pzMG 铁蛋白Fer人绒毛膜促性腺激素p亚单位HCG-13等的检测都是竞争性RIA法原理竞争性RIA法根据加样顺序与温育次数的区别反应方式分三种平衡法将非标记抗原被测物与标准品抗体标记抗原依次加入反应管混匀后一次性温育至反应达到动态平衡再加分离剂分离B复合物与F游离物如AFP8 一MGFer顺序加样法先将非标记抗原被测物与标准品与抗体在反应管内作第一次温育待反应达到动态平衡后加入标记抗原再作第二次温育后分离B与F如CEA急诊检测法为临床急需检测结果而提出的反应方式不等RIA 反应达到动态平衡就终止反应分离剂的选择有PEG聚乙二醇第二抗体等
现在一般采用的是第二抗体与PEG合用的方法称为双抗体一PEG法
PEG原理PEG浓度达到7 一9 时能使抗原一抗体复合物沉淀
优点经济简便通用
缺点重复性差非特异性结合率高
第二抗体第一抗体是可与被测抗原进行特异结合的抗体来自家兔或豚鼠用第一抗体为抗原作用到羊马身上产生的抗第一抗体的抗体称第二抗体第二抗体与第一抗体在适当条件下发生特异性结合生成分子量很大的免疫复合物AgAb ×Ab 能自然沉淀
优点分离效果好非特异性结合率低
缺点增加经费投入需要第二次温育延长了时间
所以就产生了两者合用的双抗体一PEG法它结合了上述两种方法的优点
二非竞争性RIA又称免疫放射分析IRMA
主要特点标记的是抗体
按反应原理分为两种
一单位点IRMA
其原理抗原只有一个抗原决定簇所测的抗原为小分子抗原Ab+AgAg Ab+ Ab+ ImAdAg ImAdAgAb+Ag Ab去除负相关ImAdAg固相抗原免疫吸附剂一般用聚苯乙烯塑料珠包被抗原双位点IRMA抗原有两个抗原决定簇所使用的两种亚型抗体在与同一抗原分子结合时互不干扰ImAdAb+AgImAdAbAg+ AbImAd-AbAg- Ab+ Ab过剩的游离的ImAdAb固相抗体免疫吸附剂一般用聚苯乙烯塑料珠包被抗体
二双位点IRMA又称双抗体夹心法
从加样测定顺序上看有三种方法固相抗体先与未知抗原结合再与标记抗体结合正向两步法然后去除游离的标记抗体测固相抗体一抗原一标记抗体复合物的放射性计数未知抗原先与标记抗体结合再与同相抗体结合反向两步法然后去除游离的标记抗体测固相抗体一抗原一标记抗体复合物的放射性计数未知抗原与固相抗体和标记抗体同时反应一步法又称同时加样法然后去除游离的标记抗体测固相抗体一抗原一标记抗体复合物的放射性计数
这三种方法都生成夹心状的抗体一抗原一抗体复合物故又称双抗体夹心法
糖类抗原CA50CA125就用的是其中的第三种方法一步法血清中的未知抗原与固相抗体和标记抗体同时反应生成夹心状的抗体一抗原一抗体复合物然后去除游离的标记抗体测固相抗体一抗原一标记抗体复合物的放射性计数
三RIA法的影响因素
pH和离子强度反应温度温度一般为37℃也有45℃室温4℃ 冰箱反应时间操作中的注意事项戴手套防护镜等将试剂盒从冰箱中取出室温下放置30 min方可使用
1编号第一排是标准管根据标准品浓度由低到高ABCDEFG……第二排是被测样品123456……
2加样要准确移液器的使用两个档位一档吸人二档排出吸头一个标本一个吸头避免互相污染加试剂先看瓶签再摇匀最后吸人标记物一般为红色一抗为兰色
3温育时间要保证按说明书中所要求的时间温育可以延长不能缩短
4分离剂加入混匀静置时间可以延长不能缩短保证抗原抗体复合物与第二抗体的充分结合
5温度注意观察水浴箱的水温误差不能太大为±1℃ 室温21℃左右
6离心时间也应按说明书中所要求来操作转速一般为3 500r/min往离心机里放反应管时尽量让它直立因为倾斜可能会使液体流出吸上清液时沉淀物在试管底部真空泵的吸头头部不能直接插人到试管底部中央会吸走沉淀物而我们的目的是分离保留沉淀物应该使吸头贴着试管管壁往下放并且试管要稍微倾斜但要在即将插到沉淀物边缘时停止快速上升取出少留一点点上清液也可主要是保证沉淀物完整
7进人免疫计数器测量时注意观察做出的曲线好坏是不是需要修改剔除坏点
8报结果碰到异常结果要再次看一看沉淀物是否都在患者情况如何结果是否与患者情况相符方可报出非竞争性RIA法中清洗固相包被珠时清洗次数要严格按说明书中所要求来操作不得减少
虽然RIA法的影响因素很多但操作中只要注意上述事项RIA法的稳定性还是相当不错的主要是它存在放射污染这个问题不易解决影响了它以后的发展如今电化学发光免疫分析化学发光免疫分析酶联免疫分析磁酶免疫分析等相继推出发展很快RIA法将被淘汰
1程绍钧余裕民.检验核医学[M]重庆重庆大学出版社20036275
新手上路我有疑问投诉建议参考资料 查看 下载
 收藏
该文档贡献者很忙，什么也没留下。
 下载此文档
正在努力加载中...
其他体外放射分析
下载积分：400
内容提示：其他体外放射分析
文档格式：PPT|
浏览次数：1|
上传日期： 17:09:01|
文档星级：
该用户还上传了这些文档
下载文档:其他体外放射分析.PPT
官方公共微信放射性核素的制备_百度文库
两大类热门资源免费畅读
续费一年阅读会员，立省24元！
文档贡献者贡献于
评价文档：
29页免费27页免费116页2下载券9页¥2.008页免费7页免费2页免费8页1下载券6页免费
放射性核素的制备|你​值​得​拥​有
把文档贴到Blog、BBS或个人站等：
普通尺寸(450*500pix)
较大尺寸(630*500pix)
大小：355.50KB
登录百度文库，专享文档复制特权，财富值每天免费拿！
你可能喜欢EUROIMMUN Medizinische Labordiagnostika AG: 放射免疫分析法(RIA/IRMA)
第一步，患者血清与125I标记的抗原在聚乙烯管中温育，血清中的特异性抗体与抗原结合。第二步，用沉淀剂沉淀抗原抗体复合物。用缓冲液洗涤沉淀。离心去上清，用γ计数仪测定沉淀的放射性。放射性强度与患者血清中特异性抗体的浓度成正比。根据标准曲线对抗体浓度进行定量检测。RIA法（包被管）通过竞争性配体结合分析，测定抗原和抗体浓度。放射性强度与标本中的特异性抗体或抗原浓度成反比。根据标准曲线对抗原/抗体浓度进行定量检测。此实验中，所用的单克隆抗体直接或间接结合至聚苯乙烯管内壁。第一步，待测患者血清与包被管内的单克隆抗体进行温育。标本中的抗原可与固相化的抗体和125I标记抗体结合。这样，可在固相上形成夹心配合物。将游离的125I标记抗体清洗下来，其中的放射性活性与患者血清中的抗原浓度成正比。根据标准曲线对抗原/抗体浓度进行定量检测。操作简单经济，结果可靠实验流程简单。可同步处理不同实验项目的标本。试剂可直接使用（示踪剂、沉淀剂可能除外）。试剂盒有多种规格，可分别适用于少量和大量标本的检测。欧蒙RIA法检测范围宽，通常不需将标本作其它稀释。结果判断简单。每次实验可选择性使用试剂盒提供的质控品，对所有质控品都提供了试剂盒特异的参考范围。欧蒙放射免疫法产品具有以下分析特性：&– 特异性高。&– 敏感性高。&– 临床敏感性和特异性高。&&– 重复性好。北 京市朝阳区北辰东路8号 北辰时代大厦19层 （100101） 电话：+86 10
传真：+86 10
欧蒙热线： 电子邮件：
技术支持：::放射免疫分析技术_百度文库
两大类热门资源免费畅读
续费一年阅读会员，立省24元！
评价文档：
21页1下载券21页免费2页免费2页¥1.003页¥1.0031页1下载券42页7下载券32页2下载券3页免费3页免费
喜欢此文档的还喜欢35页免费35页免费60页1下载券162页免费47页免费
放射免疫分析技术|生​化​药​物​分​析​期​末​作​业
把文档贴到Blog、BBS或个人站等：
普通尺寸(450*500pix)
较大尺寸(630*500pix)
你可能喜欢

我要回帖

更多关于 编译原理分析法 的文章

 

随机推荐