转染细胞转染原理时opti加多了会怎样

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2015-06-12 05:57 标签： 质粒转染细胞步骤
质粒转染能在普通的DMEM中进行吗(质粒转染,转染,血清,培养的细胞)
16:12:52&&&来源：&&&评论：&&
[质粒转染能在普通的DMEM中进行吗(质粒转染,转染,血清,培养的细胞)] 我现在培养的细胞是在绝对无血清的状态下生长的，而转染用的optimen是一种减血清培养基，不能满足要求。想请问各位大侠，有没有人直接在绝对无血清的DMEM培养基中做过转染。或者在其他的绝对无血清培养基中进行转染的。谢谢！ 关键词:[转染 质粒转染 血清 培养的细胞 无血清培养基 培养基 血清培养基]…
我现在培养的细胞是在绝对无的状态下生长的，而转染用的optimen是一种减培养基，不能满足要求。想请问各位大侠，有没有人直接在绝对无血清的DMEM培养基中做过转染。或者在其他的绝对无血清培养基中进行转染的。谢谢！
回复没关系的吧~我用过自己配的无血清的DMEM，lip转染~回复没关系的吧~我用过自己配的无血清的DMEM，lip转染~自己配需要加哪些东西？回复就是DMEM粉末呀~回复额，不需要加别的东西吗？这样细胞不会死吗？不是要过夜吗？回复我用无血清的optimem转染过A549细胞，转染后4-6h换为含血清的完全培基，结果第二天一看，细胞全死了，师姐说是因为转染时没有血清，细胞缺营养，自噬了，所以不含血清转染的做法要慎重。回复OptiMEM不是必须加血清，而是血清的量可以减少，一般用10%的细胞在OptiMEM里用5%就可以了，多少能提高转染效率。LZ的例子里直接用平时用的无血清培养基操作就行了回复我用无血清的optimem转染过A549细胞，转染后4-6h换为含血清的完全培基，结果第二天一看，细胞全死了，师姐说是因为转染时没有血清，细胞缺营养，自噬了，所以不含血清转染的做法要慎重。 专门登陆就是为了说一声，那是扯淡！
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18:01:42&&&来源：&&&评论：&&
[optimem和无血清培养基做转染有哪些不同呢(转染,无血清培养基,无血清培养液)] 请问各位高手：optimem和无血清培养基做转染有什么不同呢？肯定是optimem转染效率更高了，可是无血清培养液也可以做转染，两者只有效率高低的差别吗？成分上有什么差别呢？？有人做过这样的试验吗？谢谢！！！ 关键词:[转染 无血清培养基 无血清培养液]…
请问各位高手：optimem和无血清培养基做转染有什么不同呢？肯定是optimem转染效率更高了，可是无血清培养液也可以做转染，两者只有效率高低的差别吗？成分上有什么差别呢？？有人做过这样的试验吗？谢谢！！！
回复无血清培养基和OPTIMEM都用过觉得两者的区别应该不在转染效率上我查过optimem里面的营养成分应该是比单纯的无血清培养基多的对细胞状态应该是更好的回复好的，太感谢了！请问optimem里面的成分都有什么啊？回复因为我想知道optimem里面是否含有核糖核苷酸和脱氧核糖核苷酸，谢谢！回复Opti-MEM& I 减血清培养基是 EMEM 的改良型，其中使用了 HEPES 和碳酸氢钠进行缓冲，并添加次黄嘌呤、胸苷、丙酮酸钠、L-谷氨酰胺、痕量元素和生长因子。在含血清培养基中生长的大多数细胞都能转移到 Opti-MEM& 减血清培养基中，其血清含量至少降低了 50% 。在使用我们提供的转染列表中的进行阳离子脂质体转染时， Opti-MEM& I 减培养基是您的理想之选。
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【求助】脂质体转染
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这个帖子发布于6年零266天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
请教各位，我在做脂质体转染后24小时发现细胞死了很多，换液后发现细胞的状态不是很好，我该怎么办？另外按照英伟创津的说明书在稳定转染的时候还要1：10或者更高的比例传代，细胞状态不好的话肯定不能传代，我该怎么办？
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贴壁细胞的脂质体转染以下是个人经验，1.细胞的状态。这点非常重要，不要急于求成，一定要让细胞处于最佳的生长状态再做。有文献说传代不要超过17代。我总是在细胞复苏后的3代左右做，那时细胞状态最好，不要用传了很多代的细胞去做，细胞的形态都会发生变化了。2.细胞的融合度。细胞的融合度必须要达到90%才能做，细胞太少，容易死的。3.无血清培养基OPTI-MEM（GIBICO）很好用，有条件的话，就用它代替PBS洗细胞两遍（我曾比较过OPTI-MEM与PBS或无血清的DMEM，前者的转染效率确实高）。注意洗的时候要轻，靠边缘缓缓加入液体，然后不要吹吸细胞，而是转动培养板让液体滚动在细胞表面。如果洗的太厉害，细胞又损失一部分，加了脂质体后，细胞受影响就更大了，死亡细胞会增多。4.加入无血清培养基后5~6小时更换全培养基。无血清培养基培养时间过长，对细胞是有毒性的，这里有血的教训！5.转染的质粒一定纯度好、浓度高、无内毒素。浓度不要低于0.35ug/ul。低浓度的质粒，我做的结果都不好。6.48小时mRNA表达最高；72h蛋白表达最高。内容仅供参考，希望 对你有帮助 ！
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请教ly106-10,我做的基本上一致，用的肿瘤细胞也是沒传几代，融合度也是没问题。有一点不同的是我在第三步用的是有血清的培养基和OPTI相混合。请问有无血清对转染有影响吗？另外我是在六小时后换的液，有的说四个小时足够了，你的意见是多少？还有我的质粒浓度不够，但肯定是无内毒素的，浓度不够对转染的效果也有影响吗？望赐教！
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xiaolaidu 请教ly106-10,我做的基本上一致，用的肿瘤细胞也是沒传几代，融合度也是没问题。有一点不同的是我在第三步用的是有血清的培养基和OPTI相混合。请问有无血清对转染有影响吗？另外我是在六小时后换的液，有的说四个小时足够了，你的意见是多少？还有我的质粒浓度不够，但肯定是无内毒素的，浓度不够对转染的效果也有影响吗？望赐教！如果没有血清会有一定的影响，但自己认为不太大。至于时间没有太大的要求，最好不易太长4-4.5小时即可。浓度是很有影响的，但要看你的浓度相差多少了。内容仅仅代表个人意见，希望对你有帮助！
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我一般都是转染前1-2h换上Opti-MEM，使细胞适应Opti-MEM环境，转染试剂和Opti-EME同时刺激细胞，可能会引起转染效率不高；同时有个饥饿的效果，据说能增加转染效率；转染后3-4h更换新鲜DMEM，Opti-EME没血清，时间长了，细胞会饿瘦的，同时脂质体有毒性，这个是血的教训，有一次我放了6h,结果细胞死了好多。
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我们公司的产品没有这么高要求和这么大毒性，你可以试着了解一下，而且年前在打六折！买一只试试也很便宜！
popestudy edited on
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lyl06_10 贴壁细胞的脂质体转染以下是个人经验，1.细胞的状态。这点非常重要，不要急于求成，一定要让细胞处于最佳的生长状态再做。有文献说传代不要超过17代。我总是在细胞复苏后的3代左右做，那时细胞状态最好，不要用传了很多代的细胞去做，细胞的形态都会发生变化了。2.细胞的融合度。细胞的融合度必须要达到90%才能做，细胞太少，容易死的。3.无血清培养基OPTI-MEM（GIBICO）很好用，有条件的话，就用它代替PBS洗细胞两遍（我曾比较过OPTI-MEM与PBS或无血清的DMEM，前者的转染效率确实高）。注意洗的时候要轻，靠边缘缓缓加入液体，然后不要吹吸细胞，而是转动培养板让液体滚动在细胞表面。如果洗的太厉害，细胞又损失一部分，加了脂质体后，细胞受影响就更大了，死亡细胞会增多。4.加入无血清培养基后5~6小时更换全培养基。无血清培养基培养时间过长，对细胞是有毒性的，这里有血的教训！5.转染的质粒一定纯度好、浓度高、无内毒素。浓度不要低于0.35ug/ul。低浓度的质粒，我做的结果都不好。6.48小时mRNA表达最高；72h蛋白表达最高。内容仅供参考，希望 对你有帮助 ！ 你好，我铺板是50%M密度，但是72小时候，G418抗性筛选，细胞都长疯了，怎么办
yj1984ren edited on
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