很抱歉，该文档已经被删除了...先到其它地方遛一圈吧！
您可以在豆丁搜索您要找的内容
&2008- Inc. All Rights Reserved 豆丁网
扫描下载APP
扫描关注豆丁网
微信号：doudingwang
随时赢取精美礼品您所在位置：
&& 文章详情
大鼠肝细胞无血清原代培养体系的建立
作者：周晓涛　林仁勇　张雪，张亚楼， 许晏， 卢晓梅， 马海龙， 刘辉，
温浩， 吕国栋， 刘涛&&&&作者单位：新疆医科大学第一附属医院新疆包虫病基础医学重点实验室， 基础医学院免疫学教研室， 新疆
目的：建立大鼠肝细胞无血清原代培养体系。方法：以Wistar大鼠做肝细胞供者，采用胶原酶肝脏原位灌流消化法分离肝细胞，分别通过有血清和无血清方法进行原代培养；以台盼蓝染色法测细胞活力，倒置显微镜观察肝细胞形态变化，流式细胞仪测定原代培养大鼠肝细胞增殖指数。结果：在大鼠肝脏有血清原代培养体系和无血清原代培养体系两种方法中，大鼠肝细胞存活率均>90%，生长良好，经24 h和48 h培养后，经检测大鼠肝细胞增殖指数无统计学差异(P>0.05)。结论：成功建立大鼠肝细胞无血清原代培养方法，为今后利用此方法进行细胞信号传导等相关研究提供有力的实验手段。
【关键词】& 大鼠肝细胞； 无血清原代培养； 胶原酶； 细胞增殖
基金项目：新疆维吾尔自治区高校科研创新研究群体基金（XJEDU 2004G10）及新疆重点实验室开放课题基金资助项目（XJDX，XJDX）。
　　Establishment of the serum-free primary cultured protocol on rat hepatocytes
　　ZHOU Xiao-tao, LIN Ren-yong, ZHANG Xue, et al
　　(Xinjiang Key Lab of Hydatid Fundamental Medicine, Xinjiang Medical University,Urumqi 830011, China)
　　Abstract: Objectives: To establish the serum-free primary cultured protocol on rat hepatocytes. Methods: Rat hepatocytes were isolated from female Wistar rat by the perfusion and digestion of collagenase IV and the viability was determined by trypan blue exclusion. The freshly isolated& hepatocytes were plated on a rat-tail collagen I-coated plate at a density of 1&106 cells/35 mm dish and were cultured in Williams E culture medium containing 10% FCS for 4 hours. Then the medium was replaced by serum-free Williams E culture medium. The morphology and proliferation index (PI) were evaluated by using microscope and flow cytometry respectively. Results: The isolated rat hepatocytes were intact and the viability was more than 90% in serum-free cultured condition. No significant difference was found after incubation the cells with serum or without serum in 24 hours (63.4&2.67% vs 82.0&6.0%)& or 48 hours& (48.87&1.56% vs 67.0&10.0%) (P>0.05). Conclusions: Establishing the serum-free primary cultured protocol of rat hepatocytes successfully and it could be used for the reseach on the cell signal transduction pathway in the future.
　　Key words: serum-free pr proliferation
　　大多数动物细胞在体外培养时，均不同程度地依赖血清才能生长、繁殖，血清在体外培养细胞中的作用，主要是提供细胞增殖所必需的生长因子。与此同时，血清的成分十分复杂，其中还可能含有一定量的有毒物质和抑制因子，影响细胞的代谢和繁殖。因此，许多研究工作需要采用不含有血清的其他天然培养基［1］。20 世纪 60 年代中期，Howard等用机械和酶相结合的技术首先从大鼠中分离得到肝细胞，随后Berry 和Hriend对此方法进行了修改，Seglen进一步完善发展成为沿用至今的两步胶原酶灌注技术，即首先用不含 Ca2+的离子螯合剂 (EDTA等)移走肝组织中的 Ca2+，打破固定细胞的细胞桥粒样结构；然后用含 Ca2+和消化组织的胶原酶进行灌注，最后通过低速离心分离得到肝细胞并进行培养［2］。原代培养的肝细胞具有较好的体外实验重现性，基本维持了肝脏的代谢功能，广泛应用于药物代谢和毒理学研究［3］。大多数原代肝细胞的培养建立在血清培养的基础上，由于血清中含有多种细胞因子，如表皮生长因子(EGF)、胰岛素等，给目前兴起的细胞信号传导通路方面的研究带来不便，因此建立肝细胞无血清原代培养体系对于细胞信号传导等研究具有极其重要的意义。本研究通过胶原酶肝脏原位灌流消化法分离大鼠肝细胞，建立无血清原代培养体系，并与有血清原代培养体系在细胞形态变化及细胞增殖方面进行了比较。
　　1& 材料和方法
　　1.1& 实验动物& 雌性Wistar大鼠, 200～250 g，由新疆医科大学实验动物中心提供。
　　1.2& 主要试剂& Ⅳ型胶原酶、Williams E培养基、青链霉素均购自美国GIBCO公司，胎牛血清（FBS）购自杭州四季青生物工程公司、Collagen I预铺底细胞培养皿（35 mm）购自美国BD公司， Percoll 400细胞分离液、碘化丙啶（PI）、乙二醇二乙醚二胺四乙酸（EGTA）及其它化学试剂和耗材均购自Sigma公司。
　　1.3& 大鼠肝细胞原代培养& 对Seglen法［4］加以改良，大鼠腹腔麻醉（硫喷妥钠50 mg/kg），无菌常温环境下固定于操作台，剪开肌层，门静脉插管,剪断下腔静脉，用37℃预热的含0.5 mmol/L EGTA的Hanks 液 25 ml/min灌注，8 min后更换 37℃预热含5 mmol/L CaCl2、0.03%Ⅳ型胶原酶的Hanks 液25 ml/min灌洗10 min。灌注后的肝脏置于含预冷Hanks 液的无菌培养皿，研磨后的组织匀浆过100目网。4℃，50 g，离心3 min，弃上清，预冷的Hanks 液重悬，此步骤重复3次。33% Percoll 400细胞分离液100 g离心10 min，弃去上层细胞，将肝细胞重悬于Hanks液中，0.4%台盼蓝染色测定细胞总数和存活率。活力在90%以上的肝细胞以1～1.5&106/ml的密度接种于细胞培养皿，培养液为含100 U/ml青霉素，100 &g/ml链霉素，10%FBS 的Williams&Medium E培养液，于饱和湿度的CO2培养箱培养4 h后，培养液分别换无血清的Williams&Medium E培养液及10%FBS 的Williams&Medium E培养液，然后每24小时更换相应的培养液。
　　1.4& 大鼠肝细胞活力检测及形态学观察& 台盼蓝染色检测细胞活力，荧光倒置生物显微镜对培养细胞进行动态观察并采图。
　　1.5& 细胞增殖测定& 用胰酶将大鼠肝细胞从平皿上消化下来，PBS洗2遍（离心70 g/min，5 min），70%酒精固定过夜。检测前PBS洗2遍，用含RNA酶（10 mg/L）的0.005%碘化丙啶染色30 min，200目丝网过滤后，流式细胞仪测定细胞增殖指数，其计算如下：PI=［（S+G0/M）/（G0/G1+S+G2/M）］&100%［5］。
　　2& 结果
　　2.1& 原代培养大鼠肝细胞形态学观察& 台盼蓝染液显示本法所分离大鼠肝细胞活力达到 90%以上，形态呈圆球形，胞体透亮，接种4 h后肝细胞贴壁、伸展,并开始连接成条索状；24 h后绝大多数肝细胞贴壁，呈扁平状，连接成岛屿状；48 h后肝细胞贴壁牢固，连接成片，少数活力差的细胞悬浮于培养液中，换液时可去除。有血清培养与无血清培养大鼠肝细胞在形态学上无明显差异（图1～4）。
　　图1& 肝细胞形态学观察（无血清24 h，10&10） （略）
　　图2& 肝细胞形态学观察（血清24 h，10&10）（略）&&
　　图3& 肝细胞形态学观察（无血清48 h，10&10）（略）&
　　图4& 肝细胞形态学观察（血清48 h，10&10）（略）
　　2.2& 流式细胞仪测细胞周期& 24 h时，血清培养组肝细胞增殖指数（PI）为 (63.4&2.67)%，无血清培养组肝细胞增殖指数（PI）为 (82&6)%，经统计学检验差异无显著性 (P>0.05)；48 h时，血清培养组肝细胞增殖指数（PI）为 (48.87&1.56)%，无血清培养组肝细胞增殖指数（PI）为 (67&10)%，经统计学检验差异无显著性 (P>0.05)。与血清原代培养的大鼠肝细胞相比，24 h及48 h无血清原代培养的肝细胞增殖指数较高，差异无统计学意义（图5）。
　　图5& 原代培养大鼠肝细胞增殖指数在有血清和无血清培养体系中的检测和比较（略）
　　3& 讨论
　　无血清细胞培养可以克服传统的牛血清细胞培养基中存在的一些缺点，如防止支原体和其他异源病毒的污染；防止产物的后处理困难；防止血清中许多未知成分可能对细胞生长造成的抑制作用［6,7］ 。陈钟等［8］采用无血清方法培养乳猪肝细胞，排除了血清携带细胞免疫毒性物质和病毒的可能性，为人工器官移植、组织工程的应用提供方法。李剑等［9］采用无血清培养脐血间充质干细胞，排除了血清中激素和生长因子对细胞定向诱导分化机制的研究所带来的不便。原代肝细胞培养作为一种体外模型 ,有其突出的优点: (1)与体内情况保持一致 ,酶量和辅助因子的水平都是正常的生理浓度 ,可以在接近生理状态情况下研究药物的代谢及毒性; (2)较好保留和维持了肝细胞的完整形态和体外代谢活性 ,真实反映了体内的代谢情况; (3)排除了其他器官、组织的影响［10］。一般常用培养液中的胎牛血清含有多种细胞因子，会对信号传导通路的研究带来不便，故肝细胞无血清原代培养体系的建立对于这些方面的研究有着重要的应用价值。我们的实验对Seglen法进行改良，因为无血清培养基培养的细胞不易贴壁［11］，实验中使用胶原酶Ⅰ预铺底的细胞培养皿利于肝细胞的贴壁；33% Percoll 400细胞分离液分离出活细胞 ，细胞存活率大于90%后培养的肝细胞存活率较高。从大鼠体内初分离的肝细胞先进行血清培养，血清中的成分可以抑制胶原酶活性，利于细胞贴壁［12］。4 h后换无血清培养液培养，培养液中未添加胰岛素、地塞米松等生长因子，排除这些生长因子对细胞信号通路的影响，可用于较短时间内外界因素对肝细胞信号通路影响的研究。一般来说，无血清培养20 h后可用于实验。与血清培养体系相比，我们建立的大鼠肝细胞无血清原代培养体系，在形态学上未出现空泡、脱落等现象，细胞生长良好。细胞周期是细胞生命活动基本过程，细胞增殖最终发生在细胞周期水平。一个细胞周期包括细胞间期和细胞分裂期（M），细胞间期又包括间期1（G1）、DNA合成期（S）和间期2（G2）3个时期。G1期也称细胞分裂后期，生长旺盛的细胞G1期较短，老化的细胞G1期较长。G1期又分为活动期（G0）和稳定期，它们之间有一个控制点。大多数新分裂的细胞都停留在G0期，只有能够越过控制点的细胞，才能进行下一次的分裂；其余的细胞只能分化成组织细胞或衰老死亡。G2期也称细胞分裂前期，主要是遗传物质的表达，mRNA的转录，蛋白的合成和能量的准备。S期是DNA复制合成时期，DNA经S期恢复到正常体细胞的含量。原代培养的肝细胞刚从动物体内取出时，仍处于功能态，其受损后在一定条件下可重返增殖状态，修复后又恢复功能态［13］。以增殖为主的细胞，G0期较短、无分化；以完成功能为主的分化细胞则G0期相对较长。我们的实验显示，与血清原代培养的大鼠肝细胞相比，24 h及48 h无血清原代培养的肝细胞增殖指数较高，但并无统计学意义。无血清的培养对于离开体内环境的肝细胞可能带来一定损伤，使其处于一种轻微增殖状态。与24 h相比，48 h血清、无血清原代培养的肝细胞增殖指数均下降，显示肝细胞在逐渐适应体外周围环境。肝细胞无血清原代培养体系的成功建立，为今后细胞信号传导通路方面的研究提供了条件。
【参考文献】
& 　　［1］
征.组织培养和分子细胞学技术［M］.北京:科学出版社,1994.63.
张莉萍,康格非.原代肝细胞培养的研究现状［J］.国外医学临床生物化学与检验学分册,2004 ,25 （3）:193-196.
李继尧,王 玲,张席锦. 神经降压素对醋氨酚引起肝损伤的保护作用及其与谷胱甘肽系统的关系［J］. 生理学报 ,):168.
Seglen PO. Preparation of isolated rat liver cells［J］.Methods Cell Biol,-83.
Yin L, Jin XP, Yu XZ, et al. Flow cytometric analysis of nitrofen in cultured keratinocytes［J］.Biomed Environ Sci,-149.
Glassy MC, Tharakan JP, Chao PC. Serum free media in hybridoma culture and monoclonal antibody production ［J］. Biochemical and Botechnology, 5-1028.
余泽华, 刘冬连, 陈曲侯. 昆虫细胞无血清培养基的研究进展［J］. 生物工程进展,): 45-47.
钟,丁义涛,张鹤云.无血清培养基培养乳猪肝细胞的效果［J］.世界华人消化杂志,）:320-323.
剑,涂怀军,石庆芝,等.脐血间充质干细胞的无血清培养［J］.中华血液学杂志,）:409-410.
　　［10］
杰,毕惠嫦,等.原代肝细胞培养及其在药物代谢和毒理学研究中的应用进展［J］.中国药理学通报,):900-903.
　　［11］
Rademacher A, Paulitschke M, Meyer R, et al. Endothelialization of PTFE vascular grafts under flow induces significant cell changes［J］.Int J Artif Organs,-242.
　　［12］
睿,王智宇,等.无血清培养基与含血清培养基培养CHO细胞的比较［J］.中国生物制品学杂志,）:158-160.
　　［13］
冯伯森,王秋雨,胡玉兴.动物细胞工程原理与实践［M］.北京:科学出版社,.
&&订阅登记：
请您在下面输入常用的Email地址、职业以便我们定期通过邮箱发送给您最新的相关医学信息，感谢您浏览首席医学网！
耳鼻喉头颈外科
胸心血管外科
耳鼻喉头颈外科
胸心血管外科
副主任医师
副主任技师
副主任药师
副主任医师
副主任技师
副主任药师
论文写作技巧上海鑫闵生命科学有限公司
您的位置：
> 大鼠肝细胞BRL
大鼠肝细胞BRL
点击次数：543发布时间：
更新日期：
所 在 地：中国大陆
产品型号：
简单介绍：简介：本公司为您提供大鼠肝细胞BRL：，公司主营菌种，细胞，抗体，试剂，耗材，实验室常用设备等，更多信息请咨询在线客服：71
相关标签：&
联系人：夏海峰
大鼠肝细胞BRL
大鼠肝细胞BRL-3A
大鼠肝细胞BRL3A
BRL-3A大鼠肝细胞
BRL 3A(大鼠肝细胞)
BRL-3A大鼠肝细胞株
大鼠肝细胞BRL大鼠Buffalo
BRL 大鼠肝细胞BRL 大鼠肝细胞
CRL-1442 BRL 3A 大鼠肝细胞CRL-1442 BRL 3A 大鼠肝细胞
大鼠正常肝细胞BRL-3A
BRL-3A大鼠正常肝细胞
BRL-3A大鼠正常肝细胞BRL大鼠Buffalo大鼠肝细胞
大鼠肝细胞,BRL细胞
BRL 3A(大鼠肝细胞)&
大鼠肝细胞
&产品名称：大鼠肝细胞&BRL规格：70%密度的25cm2培养瓶的细胞一瓶特点：细胞代数为4-5代左右包装：内层无菌自封袋；专用防压泡沫盒；外层防压保温气泡袋；说明书细胞来源：ATCC、sciencell、ICLC货期：1-2周运输方式：快递运输售后：收到细胞后7天，如发现细胞有质量问题（如污染，死亡，快递运输等原因）时，应出具书面质量问题报告并及时传真或E-mail致销售人员，我们将尽快为您解决。细胞培养常见问题分析细胞培养1、冷冻管应如何解冻？取出冷冻管后， 须立即放入37 ℃水槽中快速解冻， 轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化， 并注意水面不可超过冷冻管盖沿， 否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时， 必须注意安全， 预防冷冻管之爆裂。2、细胞冷冻管解冻培养时， 是否应马上去除DMSO？除少数特别注明对DMSO 敏感之细胞外， 绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞）， 在解冻之后， 应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中， 待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO 即可， 如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。3、可否使用与原先培养条件不同之培养基？不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基， 若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基， 细胞大都无法立即适应， 造成细胞无法存活。4、可否使用与原先培养条件不同之血清种类？不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源， 所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清， 在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。5、何谓FBS, FCS, CS, HS ?FBS （fetal bovine serum） 和FCS （fetal calf serum） 是相同的意思， 两者都是指胎牛血清， FCS 乃错误的使用字眼， 请不要再使用。CS （calf serum） 则是指小牛血清。HS （horseserum） 则是指马血清。6、培养细胞时应使用5 % 或10% CO2？或根本没有影响？一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作为pH 的缓冲系统， 而培养基中NaHCO3 的含量将决定细胞培养时应使用的CO2 浓度。当培养基中NaHCO3 含量为每公升3.7 g 时，细胞培养时应使用10 % CO2；当培养基中NaHCO3 为每公升1.5 g 时， 则应使用5 % CO2 培养细胞。7、何时须更换培养基？视细胞生长密度而定， 或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。8、培养基中是否须添加抗生素？除于特殊筛选系统中外， 一般正常培养状态下， 培养基中不应添加任何抗生素。9、附着性细胞继代时所使用之trypsin-EDTA 浓度？应如何处理？一般使用之trypsin-EDTA 浓度为0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na。次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中， 保存于&20 ℃，避免反复冷冻解冻造成trypsin 之活性降低， 并可减少污染之机会。10、悬浮性细胞应如何继代处理？一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中， 稀释细胞浓度即可， 若培养液太多时， 可将培养角瓶口端稍微抬高， 直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞之培养液至另一新的培养角瓶， 加入新鲜培养基稀释至适当浓度， 重复前述步骤即可。11、欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速？欲回收动物细胞， 其离心速率一般为300xg （约1,000rpm），5 - 10 分钟， 过高之转速， 将造成细胞死亡。12、细胞之接种密度为何？依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长之一重要原因。13、细胞冷冻培养基之成份为何？动物细胞冷冻保存时最常使用的冷冻培养基是含5 - 10 %DMSO （dimethyl sulfoxide） 和90 - 95 % 原来细胞生长用之新鲜培养基均匀混合之。注意：由于DMSO 稀释时会放出大量热能， 故不可将DMSO 直接加入细胞液中， 必须使用前先行配制完成。14、DMSO 之等级和无菌过滤之方式为何？冷冻保存使用之DMSO 等级， 必须为Tissue culture grade之DMSO （如Sigma D2650）， 其本身即为无菌状况， 次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中， 保存于4&C， 避免反复冷冻解冻造成DMSO 之裂解而释出有害物质， 并可减少污染之机会。若要过滤DMSO， 则须使用耐DMSO 之Nylon 材质滤膜。15、冷冻保存细胞之方法？冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟& （-20 ℃30 分钟*） & -80 ℃16~18 小时（或隔夜） & 液氮槽vaporphase 长期储存。冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至&80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。15、细胞欲冷冻保存时， 细胞冷冻管内应有多少细胞浓度？冷冻管内细胞数目一般为1x106 cells/ml vial， 融合瘤细胞则以5x106 cells/ml vial 为宜。16、应如何避免细胞污染？细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之方法。17、如果细胞发生微生物污染时，应如何处理？加入相应抗生素。直接灭菌后丢弃之。18、支原体（mycoplasma） 污染的细胞， 是否能以肉眼观察出异状？不能。除极有经验之专家外，大多数遭受支原体污染的细胞株，无法以其外观分辨之。19、支原体污染会对细胞培养有何影响？支原体污染几乎可影响所有细胞之生长参数， 代谢及研究之任一数据。故进行实验前，必须确认细胞为mycoplasma-free，实验结果之数据方有意义。20、CO2 培养箱之水盘如何保持清洁？定期（至少每两周一次） 以无菌蒸馏水或无菌去离子水更换之。21、为何培养基保存于4 ℃ 冰箱中， 颜色会偏暗红色， 且pH值会越来越偏碱性？培养基保存于4 ℃ 冰箱中， 培养基内之CO2 会逐渐溢出，造成培养基越来越偏碱性。而培养基中之酸碱指示剂（通常为phenol red） 的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。培养基偏碱之结果， 将造成细胞生长停滞或死亡。若培养基偏碱时， 可以通入无菌过滤之CO2， 以调整pH 值。22、各种细胞培养用的dish，flask是否均相同？不同厂牌的dish 或flask， 其所coating 的polymer 不同， 制造程序亦不同， 虽对大部分细胞没有太大之影响， 惟少数细胞则可能因使用厂牌不同之dish 或flask 而有显著之生长差异。23、购买之细胞冷冻管经解冻后，为何会发生细胞数目太少之情形？ 购买之细胞死亡或细胞存活率不佳可能原因？研究人员在细胞培养时出现存活率不佳， 常见原因可归纳为：培养基使用错误或培养基品质不佳。血清使用错误或血清的品质不佳。解冻过程错误。冷冻细胞解冻后， 加以洗涤细胞和离心。悬浮细胞误认为死细胞。培养温度使用错误。细胞置于&80℃太久。24、收到之冷冻管瓶身破裂，瓶盖有裂纹，或瓶盖脱落之原因？冷冻管瓶盖裂纹，或瓶身破裂，可能是因为操作者夹取冷冻管时用力不当，造成冷冻管裂损，建议使用止血钳小心夹取。另冷冻管瓶盖松动或松脱，乃因热胀冷缩之物理现象，冷冻管有可能因此而造成细胞污染，故冷冻管于放入和取出液氮桶时，均应立刻将冷冻管再一次扭紧 。25、如何选用特殊细胞系培养基？培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养是一个好的开始，各种目的无血清培养首选AIM V（12005）培养基（SFM）。26、L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？L-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后，L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，但是确切的降解率一直没有最终定论。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。27、GlutaMAX-I是什么？培养细胞如何利用GlutaMAX-I？这个二肽有多稳定？GlutaMAX-I 二肽是一个L-谷氨酰胺的衍生物，其不稳定的alpha-氨基用L-丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽，释放L-谷氨酰胺供利用。 GlutaMAX-I二肽非常稳定，即使在121磅灭菌20分钟，GlutaMAX-I 二肽溶液有最小的降解，如果在相同条件下，L-谷氨酰胺几乎完全降解。28、什么培养基中可以省去加酚红？酚红在培养基中被用来作为PH值的指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用，（特别是雌激素）。为避免固醇类反应，培养细胞，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时，不使用加有酚红的培养基。29、培养基中丙酮酸钠的作用是什么？丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是，如果没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。30、二价离子抑制胰蛋白酶活性吗？使用胰蛋白酶时加入EDTA的目的是什么？二价离子的确抑制胰蛋白酶活性。EDTA用来螯合游离的镁离子和钙离子，以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建议胰蛋白酶处理细胞前，用EDTA清洗细胞，以消除来自培养基中所有的二价离子。31、书上说，Hank&s 平衡盐溶液（HBS）要在空气中使用，不需要CO2培养箱。原因是什么？Hank&s 平衡盐溶液（HBS）和Earle&s平衡盐溶液（EBS）有什么本质的功能差别？HBS和 EBS 的主要差别在于碳酸氢钠的水平,在Eagles （2.2g/L）中比在Hanks （0.35g/L） 中高。碳酸氢钠需用高水平的CO2平衡，以维持溶液的PH值。Eagles液在空气水平的CO2 中，溶液会变碱，Hanks液在CO2培养箱中会变酸。如果希望在CO2培养箱中保存组织，需要用Eagles液，。如果仅仅是清洗将要在细胞培养基中储存的组织，用Hanks液就可以了。血清&
江苏无锡的采购商 9:12:56查看了本产品的联系电话
会员类型：免费会员
工商认证： 【未认证】
最后认证时间：
企业类型：代理商
注册资金：人民币万
请告知该产品价格与相关资料，谢谢！大鼠细胞间质的培养与鉴定_图文_百度文库
两大类热门资源免费畅读
续费一年阅读会员，立省24元！
大鼠细胞间质的培养与鉴定
上传于||暂无简介
阅读已结束，如果下载本文需要使用1下载券
想免费下载本文？
定制HR最喜欢的简历
下载文档到电脑，查找使用更方便
还剩2页未读，继续阅读
定制HR最喜欢的简历
你可能喜欢