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丝状真菌分子细胞生物学与实验技术本书通过对当前真菌分子细胞生物学研究最新研究进展，总结了真菌分子细胞生物学研究的技术要点，有针对性的提出了真菌分子细胞生物学研究的技术原理和方案，为真菌研究人员提供了切实可行的参考技术。全书分为14章。主要包括：真菌基因型的鉴定与特征分析、核酸的分析、真菌遗传转化、功能基因组学、生化与免疫方法、分子系统学及生物信息学常用软件等。前言第一章 丝状真菌基因型特征的鉴定1 概述2 基因组变异的主要特征3 确定研究目的4 用于基因组分析的技术5 假设6 选择最佳策略方案1 链格孢真菌的RAPD分析7 AFLP技术的原理及其应用方案2 丝状真菌的AFLP分析方案3 丝状真菌的cDNA-AFLP8 变性梯度凝胶电泳（DGGE）方案4 土壤中真菌的DGGE分析9 重要的数据库和互联网资源第二章 丝状真菌核酸的提取与分析1 概述2 基因组DNA的分离方案1 CTAB法提取真菌基因组DNA方案2 氯化苄（benzylchloride）法提取真菌基因组DNA方案3 丝状真菌总DNA的分离方案4 固体平板上菌小量DNA的块速提取（以稻瘟病菌为例）方案5 真菌小量DNA的快速提取3 丝状真菌RNA的提取4 RNA的操作方案6 Trizol法提取丝状真菌总RNA方案7 状真菌总RNA的提取方案8 真菌总RNA的小量提]K（Trizd法）第三章 丝状真菌的DNA转化1 概述2 选择性标记和转化载体3 待转化DNA的质量4 DNA的进入5 REMI转化方案1 稻瘟病菌（Magnapotthegrisea）原生质体的制备及转化方案2 毛壳菌原生质体的制备6 真菌AATMT转化方案3 感受态农杆菌细胞的制备与转化方案4 利用农杆菌转化真菌7 电击转化方案5 Tapesiayallundae的电击转化8 转化DNA的命运方案6 丝状真菌中的质粒拯救方案7 农杆菌电击转化感受态的制备与转化第四章 丝状真菌的遗传分析1 子囊菌遗传分析方案1 对真菌孢子进行化学诱变方案2 对真菌的孢子进行紫外诱变方案3 营养缺陷型突变体的筛选与鉴定方案4 温度敏感型突变群体的制备方案5 单孢分离方案6 构巢曲霉的八分体分析方案7 通过准性重配确定里连锁群方案8 稻瘟病菌温度敏感型突变体的筛选2 担子菌遗传分析方案9 鬼伞菌在人工培养条件子实体和担孢子的产生方案10 通过Ct-IEF凝胶电泳分离C.cinereus的染色体方案11 C．cinereus的四分体分离方案12 C．cinereus粉孢子的紫外诱变方案13 利用NTG（MNNG）／EMS对担子菌进行诱变方案14 平板印迹附：担子菌研究中的标准培养基第五章 丝状真菌的基因组分析1 概述2 遗传图谱方案1 克隆固定大小的基因组DNA作为RFLP探针方案2 RAPD操作要点3 电泳核型分析方案3 琼脂糖栓中制备完整染色体DNA方案4 琼脂糖栓电泳方案5 钳位均匀电场电泳4 物理图谱方案6 染色体DNA的RecA-AC方案7 准备BAC载体DNA方案8 准备BAC插入DNA方案9 BAC插入DNA大小的选择，恢复和克隆方案10 将文库克隆排列到杂交膜上方案11 收集克隆文库5 筛选文库方案12Southern杂交分析混合文库和克隆阵列文库6 染色体步移（chromosomewalking）方案13BAC或者黏粒末端RNA探针的合成方案14根据插入片段末端序列制备的探针7 真菌基因组分析相关数字资源第六章 真菌发育过程的细胞学分析1 概述2 丝状真菌生长的测定方案1 菌丝顶端生长的测定方案2 菌落生长速度的测定方案3 直线生长速率的测定3 丝状真菌孢子的萌发方案4 真菌孢子的萌发测定4 稻瘟病菌细胞生物学分析方案5 稻瘟病菌产孢培养、孢子收集和附着胞诱导培养方案6 稻瘟病菌侵染过程的组织病理学观察方案7 稻瘟病菌孢子、附着胞内脂质体、糖原的观察方案8 细胞自噬现象的观察方案9 酒精氧化酶活性测定方案10 冷冻替代用于电子显微镜观察方案11 细胞核，细胞壁和隔膜的染色第七章 丝状真菌的信号传导1 概述2 蛋白抽提方案1 构巢曲霉（Aspergillusnidulans）蛋白激酶的抽提3 蛋白免疫沉淀反应方案2 NIMA在大肠埃希菌（E．coli）中的表达和His-tag亲和纯化方案3 蛋白质免疫沉淀（IP）4 凝胶阻滞试验（gel-shiftassay）检测蛋白的磷酸化状态方案4 NIMA磷酸化状态的凝胶阻滞试验5 蛋白激酶的底物特异性分析方案5 NIMA激酶分析第八章 丝状真菌的细胞生物学技术1 电子显微镜工作原理及其应用2 扫描电子显微镜样品制备的原理与方法3 透射电子显微镜样品制备的原理与方法4 电镜细胞化学技术5 免疫组化技术第九章 丝状真菌的生化研究方法1 概述2 抽提物的准备方案1 菌丝的摇瓶培养方案2 疏水蛋白的分离3 细胞组分的准备方案3 细胞膜的分离方案4 脉孢霉的液泡分离方案5 线粒体的分离方案6 细胞核的分离方案7 细胞核的抽提方案8 微体的分离4 蛋白分析方案9 孢子和菌丝的小量的蛋白质抽提方案10 从固体培养物中分离胞外酶（N．crassa的脂肪酶）方案11 从新鲜菌丝分离细胞内蛋白，适用于蛋白水解敏感蛋白的方法方案12 从新鲜菌丝分离细胞内蛋白方案13 从冻干菌丝分离胞内蛋白方案14 酶学分析的代谢物抽提第十章 真菌研究中的免疫学方法第十一章 丝状真菌的功能基因组分析第十二章 丝状真菌分子进化与系统发育分析第十三章 丝状真菌群体遗传分析第十四章 真菌分子生物信息学常用软件的使用参考文献京 东 价：
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【原创】Trizol法提取组织RNA的一些经验
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感谢LZ，最近也在用trizol 提取病毒RNA，话说采购说100ML，2600大洋，我现在深深觉得被坑了。。话说回来，比对 了LZ的操作流程，我在用trizol裂解时，没有放入-80℃冻存，只是室温静置10min，加入氯仿后，室温静置了10min。其他基本一致，可是提取来只有一条条带，并且比溴酚蓝条带还短。很不解。。
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楼主讲解很详细
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不错，学习了
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“很硬的组织，我是准备了刀片，切成小块后再研磨，”
楼主你好，我有个问题想请教一下。我们要做的组织是病人髋关节韧带，非常坚硬，用研钵一点都不能碾碎，而且泡在Trizol中韧性很大，研磨时转头总是滑脱。这样的情况我们的处理办法是将组织泡在Trizol中处理24小时，再提取RNA，既费时且提取的RNA量又非常少。我想请教楼主有没有更好的处理坚硬组织的办法？？我没试过用刀片处理组织，感觉用刀片的话，会增加组织暴露时间，增加RNA降解的可能性。而且刀片用DEPC泡过处理后是否可以直接用啦，楼主是怎么处理刀片的？
疑问多所以问了这么多，希望楼主不吝赐教，在此先谢谢啦！
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楼主，请问一般1mg组织能提出多少RNA？个人觉得不同组织含RNA应该不同吧，老师让我查这个问题，我觉得肯定得做定量，我们用的是肝组织，谢谢！
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为什么我提了三次了都成功呢，都是OD值特别低，不过不是用trizol，而是用RNAiso
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受教，谢谢
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mrsbiner 楼主，请问一般1mg组织能提出多少RNA？个人觉得不同组织含RNA应该不同吧，老师让我查这个问题，我觉得肯定得做定量，我们用的是肝组织，谢谢！肝组织没有做过，肝组织的细胞量应该不会太少，我一般用100mg食管癌组织，近乎可以提取100ug的总RNA量，你的肝组织应该可以参照，异丙醇沉淀以后可以根据沉淀的多少添加溶解液，宁多不少。
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yangqin1986 “很硬的组织，我是准备了刀片，切成小块后再研磨，”
楼主你好，我有个问题想请教一下。我们要做的组织是病人髋关节韧带，非常坚硬，用研钵一点都不能碾碎，而且泡在Trizol中韧性很大，研磨时转头总是滑脱。这样的情况我们的处理办法是将组织泡在Trizol中处理24小时，再提取RNA，既费时且提取的RNA量又非常少。我想请教楼主有没有更好的处理坚硬组织的办法？？我没试过用刀片处理组织，感觉用刀片的话，会增加组织暴露时间，增加RNA降解的可能性。而且刀片用DEPC泡过处理后是否可以直接用啦，楼主是怎么处理刀片的？
疑问多所以问了这么多，希望楼主不吝赐教，在此先谢谢啦！我有个同学取的是角膜的组织，也非常的韧，所以研磨的时候非常的耗时耗力，这种情况下最好在取组织的当时就把组织切成小块再冻起来，这样回头拿出来研磨就能方便很多。
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huangzhenjie 感谢楼主分享宝贵的经验，在此我请教楼主，你提到“然后就是在加入Trizol后，可以将裂解液放到-80冻存半小时以上，据说冻融过程中可以再次帮助更加充分的裂解细胞，分离蛋白和RNA。我试了一下，的确有效果。”，后面又说“加入Trizol裂解5-10分钟（我觉得还是10分钟比较好，有人说这步要放在冰上，但是我的经验室温就可以，室温更有利于Trizol完全发挥作用，而且毕竟Trizol含有RNA酶抑制剂，不用担心RNA降解”。我想请教你一下，“加入TRizol后放在-80度冻存半小时以上”与“加入TRIZOL后放室温有利其完全发挥作用”是否相互矛盾冲突，请楼主不吝赐教。谢谢！再补充一个问题，对于RNA质量的鉴定，想请教楼主您，是单纯看RNA电泳条带或者分光光度计OD260/280比值，还是两者都看。我上次提的RNA，260/280=1.90，但是RNA电泳条带显示：5S的条带比18S和28S都亮。继续进行逆转录PCR，可以P出产物啦，做Real-time PCR，也可以得到很好的扩增曲线。所以，我很疑惑，对于RNA质量鉴定的方法，假如电泳跟分光光度计的结果不一致时，更倾向相信哪种鉴定方法。谢谢楼主，这两个问题什么没回复，同求解。谢谢不好意思，最近做细胞实验没关注这个版块，加入Trizol后放入-80的道理应该是为了通过冻融把细胞给裂解掉，而一般Trizol常温情况下才能是完全液态，才能最大程度和细胞结合，裂解细胞，冻融和Trizol是先后的作用，可能不会矛盾。至于鉴定RNA质量，如果是提取的总RNA，能看一下电泳条带当然最好，260/280这一步肯定不能少，毕竟还要测浓度。电泳结果和260/280是两个范畴的东西，不能比较，电泳结果是看总RNA的完整性，看其是否降解，而260/280是看核酸的量和盐离子的量的比值，也就是看提取的核酸的纯度，即使总RNA降解都降解成小RNA，核酸纯度一样可以很高。
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qilong edited on
新人报道。顺便说一下我上周日提大鼠脑组织的大RNA，开头并没有用加液氮研磨，中间步骤略有不同，大体一样，效果的话，据肉眼目测还是不错的。后因为逆转录酶没有到，所以没有进行吸光度测定，直接放置在-80里，不知道会不会对以后的逆转录有影响？
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如何避免液氮研磨组织时，组织的溅出，感觉解冻的组织特别难研磨，急求回复。。。谢谢。。。。
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总结的很好！
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小巴巴 楼主，我是一个新手。最近老师要求用冰冻组织RNA.我提了三次了，最后一次还是用试剂盒提的，可是跑电泳，就只有一条带。冰冻组织是两年前的病人，冻存在—80的，提不出RNA是不是和组织有关负80放两年，组织里的RNA降解的可能性是非常非常大的，有个师兄的组织放两年后连DNA都降解了。
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芦亚琼1990 如何避免液氮研磨组织时，组织的溅出，感觉解冻的组织特别难研磨，急求回复。。。谢谢。。。。不好意思，最近没上论坛，往研钵里倒液氮的时候，一个是要慢慢倒，太猛的话会把组织蹦出来，然后研磨的时候我是用左手（戴着手套）盖住研钵的上面，右手用研磨棒使劲压组织，等比较碎了就不用盖住了，还有一点就是加上组织的小块在液氮里面的时候会比较好研，也不容易蹦出来，那时候可以单手轻点研，注意力度，别把液氮蹦到手上。
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老衲光头 新人报道。顺便说一下我上周日提大鼠脑组织的大RNA，开头并没有用加液氮研磨，中间步骤略有不同，大体一样，效果的话，据肉眼目测还是不错的。后因为逆转录酶没有到，所以没有进行吸光度测定，直接放置在-80里，不知道会不会对以后的逆转录有影响？脑的新鲜组织比较好破碎，不用液氮问题应该也不大，提取的总RNA放在-80应该可以放一两个月，不过最好还是早点反转录。
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学习第6步的经验，谢谢楼主分享了！
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最近要提RNA啦！！感触还是蛮多的，谢谢楼主
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裂解后放-80度保存，取出后该如何进行下步操作呢？是直接在冰上冻融吗？需要再裂解吗
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谢谢楼主分享自己的经验，很有用~说的很清楚
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大家要注意，很多植物RNA含有大量的多糖多酚和次级代谢产物，用Trizol是无法提取的，不是你操作有问题。很多复杂植物样品连进口的试剂盒也是无法提取，就更不要说trizol了。大家要注意这个问题，不是你操作问题，是trizol可能不适合你的植物样品的问题。提取复杂植物，尤其是搞要求比如RNA测序，芯片，高通量等要求高的应用更可以看出艾德莱生物RNA提取技术质量优势。 北京艾德莱生物的EASYspin 和EASYspin plus 植物RNA提取试剂盒，货号是RN09和RN38的。使用该试剂盒部分发表的文章如下：1.
桃果实、花、根、叶：Isolation, characterisation and phylogenetic analysis of resistance gene
analogues in a wild species of peach (Prunus kansuensis).Canadian Journal of Plant Science,
): 961-9702.
樱桃花、叶、颚等各部位：Over-expression of the PaAP1 gene from sweet cherry (Prunus avium
causes early floweri.Journal of Plant Physiology, 2012,Available online 1 December
洋葱根、茎、蕾、叶、雌雄蕊等各部位：Cloning and Expression Analysis of A Putative B Class MADS-box
Gene of AcPI in Onion. Scientia Agricultura Sinica, ):4.
芜菁：Isolation and Functional Characterisation of the Genes Encoding Δ8-Sphingolipid
Desaturase from Brassica rapa. Journal of Genetics and Genomics Volume 39, Issue 1, January
Pages 47–595.
芜 菁 1 ：EXPRESSION, DIVERGENCE AND EVOLUTION OF THE CALEOSIN GENE FAMILY IN BRASSICA RAPA. Arch. Biol. Sci., Belgrade, 65 (3), 863-876, 2013 DOI:10.2298/ABS1303863H6.
番茄叶：Effect of Low Temperature Stress on the Expression of ProDH Gene and the Activities of the Proline Dehydrogenase in Leaves of Tomato Seedling. Chinese Agricultural Science
Bulletin ):132-1357.
栀子叶：Isolation of High Quality Total RNA from Gardenia jasminoides Eills.Chinese Agricultural
Science Bulletin.):194-1988.
油桐果实：Cui Qinqin, Han Xiaojiao, Chen Yicun, Zhan Zhiyong, Lin Liyuan, Wang Yangdong.
Isolation and Expression Characteristics of Biotin Carboxyl Carrier Protein Coding Gene（VfBCCP)
from Vernicia fordii.SCIENTIA SILVAE SINICAE. ): Available online August9.
油桐果实1：Selection of Reliable Reference Genes for Gene Expression Studies Using Real-Time
PCR in Tung Tree during Seed Development. PLoS ONE, ): e4308410. 紫菜：Molecular cloning and expression analysis of ribosomal protein S7 gene from Porphyra
haitanensis. JOURNAL OF FISHERIES OF CHINA, ）：11. 石斛：Molecular characterization of a mitogen-activated protein kinase gene DoMPK1 in Dendrobium officinale. Acta Pharmaceutica Sinica, ): 12. 石斛1：ESTs Analysis Reveals Putative Genes Involved in Symbiotic Seed Germination in Dendrobium officinale. Symbiotic Germination Genes in D. officinale. August 2013 | Volume 8 | Issue 8 | e7270513. 大豆：RNA-seq Analysis Reveals Ethylene-Mediated Reproductive Organ Development and Abscission in Soybean(Glycine max L. Merr.). Plant Mol Biol Rep, 2012, published online: 4 Dec, 201214. 大豆1：Construction of ethylene regulatory network based on the phytohormones related gene transcriptome profiling and prediction of transcription factor activities in soybean. Acta Physiol Plant, 2012, published online: 12 Dec, 201215. 红花玉兰：Expression Analysis of MAwuAG in Different Organs and Developmental Stages of Magnolia wufengensis. Chinese Bulletin of Botany, ): 1–516. 毛桃：Cloning and Phylogeny Analysis of PpAP2 Floral Homologous Genes in Peach. Chinese Agricultural Science Bulletin, ): 99-10417. 五倍子：Cloning and characterisation of a phenylalanine ammonia-lyase gene from Rhus chinensis. Plant Cell Rep, 2013, published online：15 March, 201318. :五倍子1：Cloning, characterization and expression of chalcone synthase from medicinal plant Rhus chinensis.J. Plant Biochem. Biotechnol. DOI 10.-013-0231-919. 青杄 ：cDNA Cloning and Bioinformatic Analysis of the sPPa1 Gene form Picea wilsonii. Plant Science Journal, ): 394-40120. 青杄 1：cDNA Cloning and Bioinformatic Analysis of PsbO Gene from Picea wilsonii.Life Science Research, ): 201-20621. 青杄 2：Cloning and Tissue Expression Analysis of PwPSAF in Picea wilsonii. SCIENTIA SILVAE SINICAE. Vol. 49，No. 10, Oct. 2013.22. 洋葱 ：Molecular Cloning and Transcriptional Analysis of the Putative AGAMOUS Homolog AcAG in Onion (Allium cepa. Plant Mol Biol Rep, DOI 10.-013-0607-y23. 木瓜 ：XsFAD2 gene encodes the enzyme responsible for the high linoleic acid content in oil accumulated in Xanthoceras sorbifolia seeds. JOURNAL ARTICLE. .24. 木瓜1：Two novel diacylglycerol acyltransferase genes from Xanthoceras 2 sorbifolia are responsible for its seed oil content. GENE-38688; No. of pages: 9; 4C:25. 柑橘 ：Efficient auto-excision of a selectable marker gene from transgenic citrus by combining the Cre/loxP system and ipt selection. Plant Cell Rep, DOI 10.-013-1470-x26. 柑橘1：Expression Analysis of Three Phloem-specific Promoters in Transgenic Poncirus trifoliata. Acta Horticulturae Sinica. ）：1–8.27. 柑橘2：Activation of three pathogen-inducible promoters in transgenic citrus (Citrus sinensis Osbeck) after Xanthomonas axonopodis pv. citri infection and wounding. Plant Cell Tiss Organ Cult. DOI 10.-013-0423-y.28. 茶梅花瓣:Comparison and Analysis of Methods of Extracting Total RNA from Petals of Camellia sasanqua. Chinese Agricultural Science Bulletin.):129-133.29. 栀子：Isolation of High Quality Total RNA fromGardenia jasminoides Eills. Chinese Agricultural Science Bulletin. ):194-19830. 丹参：Genome-wide analysis and molecular dissection of the SPL gene family in Salvia miltiorrhiza.31. 牡丹：Transcriptome Comparison Reveals Key Candidate Genes Responsible for the Unusual Reblooming Trait in Tree Peonies. Genes Responsible for Reblooming in Tree Peonies. November 2013 | Volume 8 | Issue 11 | e7999632. 东南景天：Role of sulfur assimilation pathway in cadmium hyperaccumulation by Sedum alfredii Hance. Ecotoxicology and Environmental Safety.Volume 100, February 2014, Pages 159–165.33. 山苍子：Identification of appropriate reference genes for normalizing transcript expression by quantitative real?time PCR in Litsea cubeba. TECHNICAL NOTE. Mol Genet Genomics (7–737, DOI 10.-013-0785-134. 木本植物：Heterologous gene silencing induced by tobacco rattle virus (TRV) is efficient for pursuing functional genomics studies in woody plants. ORIGINAL PAPER. Plant Cell Tiss Organ Cult, DOI 10.-013-0393-035. 棉花：Analysis of sea-island cotton and upland cotton in response to Verticillium dahliae infection by RNA sequencing. Sun et al. BMC Genomics
//852.36. 桃子：Biochemical changes and defence responses during the development of peach gummosis caused by Lasiodiplodia theobromae. Eur J Plant Pathol (5–207, DOI 10.-013-0322-4.37. 桃子1：Carbohydrate metabolism changes in Prunus persica gummosis infected with Lasiodiplodia theobromae. Phytopathology &First Look& paper ?
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6.关于提取步骤：标准Trizol提取步骤为 液氮研磨--加入Trizol裂解--加入氯仿抽提--离心--加入氯丙醇沉淀--离心--酒精洗涤--离心。因为提取的组织，在加入Trizol后增加了一步简短的离心，可以帮助去掉一些无法降解的组织，比如纤维和杂质之类，然后取上清再加入氯仿，可以帮助提高氯仿的效率。然后就是在加入Trizol后，可以将裂解液放到-80冻存半小时以上，据说冻融过程中可以再次帮助更加充分的裂解细胞，分离蛋白和RNA。我试了一下，的确有效果。请问楼主是从研钵里加完裂解液直接放到—80度冰箱，还是裂解液融化了转移到离心管再放到—80度冰箱？？
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北京博凌科为生产的TRIpure Reagent（Trizol总RNA提取试剂） 货号 ：110102，跟进口invitrogen Trizol 提取效果一样，质量稳定价格便宜。 invitrogen Trizol
能提取的样本，我们提取不出来，做不好，无条件退货。
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受教，过两天提RNA
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为什么有时候提出来是两条带？
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shaquila 楼主我有提过种子的，但不是成熟的，我觉得你的步骤有大问题。首先加入TRIZOL后要震荡静置十分钟，多个样品可以一个一个磨后加，静置久一会也没事。我最多次提了十六个样，两轮研磨，质量没有下降。另外你后续操作时间和温度都不对。还有成熟的种子不好提取，向水稻，玉米，而且不能太老。楼主需要步骤留个邮箱，我自己有一个中文簡略步骤(其实看说明书最好) 你好，请问你有做过成熟水稻种子RNA的提取吗？最近试了trizol，一些试剂盒的方法，但效果都不好，求指教！
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我最近也在做液氮组织提取RNA，但是结果很不好，能帮忙看看吗？我的实验步骤如下：1. 将组织从-80℃取出，冰上或常温溶解，取一小片加液氮磨成粉末后倒入无核酶EP管中，加Trizol 1 ml ，吹打混匀后放入-80℃保存。2. 将已研磨并加Trizol的组织从-80℃取出，冰上溶解后加入氯仿200ul ，用力混匀后 冰上静置2 min ，12000g, 4℃离心15min 3. 离心后取上清400ul ，加入500 u l异丙醇，轻轻颠倒混匀 15s ，冰上静置10min（现改用-20℃ 4h），12000g, 4℃ 离心 10min 4. 离心后弃上清，加入75%乙醇（DEPC-H2O配制）洗涤沉淀（至沉淀浮起），7500g,
4℃ 离心 5min ，5. 离心后倒掉上清，将EP管倒扣在滤纸上至大部分水被吸掉，再敞口放5min ，加入20ul 无核酶水，吹打溶解6. 测RNA浓度每次测的RNA浓度都很高，A260/280也一直在1.90-2.00之间，但是逆转成cDNA后，跑出来的结果，首先就是GAPDH(内参)相当不整齐，这样跑其它基因就没有意义了，完全没法比较，但是我又找不到问题出在哪里，所以实验一直停滞不前，做了好多次液氮研磨还是一样的结果，请楼主帮忙看看我是哪里出了问题
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各位，我前段时间提取胃癌组织的RNA，OD值才1.6左右，是不是盐离子蛋白等污染严重啊，需要怎么解决啊！
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看了半天，原来是亲师兄。。。席师兄让代问赵师兄好
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楼主，我也用Trizol法提，大鼠血管组织。我都没有看到沉淀，测出浓度也不高，电泳有的没有条带，有的不亮。我看了你写的，有的地方跟你不同，你帮看看是不是出在这环节上。
组织从液氮中拿出来后我是等它融了之后再剪米粒大小。直接放到盛有Trizol的EP管中剪碎，再匀浆。没有用液氮研磨
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qilong 兄台说的不错，加入异丙醇后冷冻沉淀可以帮助沉淀更加微小的RNA，提高沉淀效率，但是有时也会使一些杂质沉淀下来。至于氯仿的含量，我觉得官方给出的Trizol/氯仿=5：1的比例应该是有道理的，至于什么道理，我现在也没想明白。最后几部肯定是要小心的，毕竟没有了试剂的保护。 我想请教一下：加入异丙醇后冷冻沉淀这一步具体应该怎么操作呢
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组织提RNA纯度只有0.9，找不到原因，求解啊。
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谢谢楼主分享，正需要呢
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你好，最近也在提取油棕的rna，发现很容易降解，你上面介绍的”可以将裂解液放到-80冻存半小时以上，据说冻融过程中可以再次帮助更加充分的裂解细胞，分离蛋白和RNA。我试了一下，的确有效果。”这个是说加入裂解液在振荡器上震荡混匀后放入-80度冰箱半小时然后取出来室温下静置10min吗？还有在离心完上清液与冰冻异丙醇的混合液之后去上清的时候是不是留一点利用酒精去清洗，如果全部去掉是不是容易被外源RNA酶降解？
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提取组织rna前，组织标本在液氮中最多可以保存多长时间？
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