组织培养所用的培养基含有植物细胞生长所必需的各类营养物质．同时也是各种细菌、真菌滋生繁殖的极好场所。因此必须对培养基等进行灭菌处理，以确保无菌操作的顺利进行。
一、目的要求
学习用母液法配制MS培养基以及掌握培养基灭菌的方法及操作过程。
二、基本原理
组织培养所用的培养基含有植物细胞生长所必需的各类营养物质．同时也是各种细菌、真菌滋生繁殖的极好场所。因此必须对培养基等进行灭菌处理，以确保无菌操作的顺利进行。
三、实验材料
、扭力天平、(5OmL、100mL、500mL、l 000mL)、(1000mL、500mL、25mL)、药勺、称量纸、玻璃棒、(10mL、5mL、2mL、1mL、0.5mL、O.2mL)、电炉(1000W)、石棉网、洗耳球、或pH(5.0-7.0)、三角瓶(50mL、100mL)或果酱瓶、耐高温高压的专用、线绳、冰箱、手提式消毒灭菌锅， 蔗糖、、1mol&L-1 HCl、1mol&L-1NaOH，2，4－D母液及MS基本培养基各母液(实验一制备)。
四、操作步骤
1．培养基的配制
每组配培养基500mL，培养基组成为：MS+6－BA0.5 mg&L-1十NAA0.1mg&L-1十30g&L-1蔗糖十5g&L-1(pH 5.8)。
(1)．首先，将所需的各贮存母液按顺序放好，将洁净的各种玻璃器皿，如、、、玻璃棒、等放在指定的位置；准备好水及做瓶盖用的专用封口塑料薄膜或用于封口的棉塞、牛皮纸和包装线等。然后，根据所需配制的培养基用量，计算需吸取各母液的数量(mL)。
(2)．取50mL的烧杯一只，用25mL量筒取大量元素母液25mL，然后，用各母液专用移液管分别吸取微量元素母液0.5ml、有机母液5mL、铁盐母液5mL和及相应量的6-BA和NAA，置于烧杯中备用(注意：各母液移液管不能混用)。
(3)．取500mL烧杯一只，先用量筒量取500mL水倒入烧杯中，用记号笔画好液位线，再将蒸馏水倒出一半。准确称取琼脂粉2.5g倒入烧杯中，再称蔗糖15g备用。将加入琼脂的烧杯置于电炉上或微波炉内煮沸，待琼脂完全溶化后，加入15g蔗糖，充分溶解后，将准备好的含大量元素、微量元素、铁盐、有机物和的母液混合液倒人烧杯中，用蒸馏水将装过母液混合液的烧杯洗三遍，一并倒人500mL烧杯中，加热至沸腾后，将烧杯端离火源，并加蒸馏水定容至设定的液位线。
(4)．用1mol&L-1HCI或1mol&L-1NaOH将培养基的pH值调至5.8－6.0，用酸、碱调节pH值时，应用玻璃棒不断搅拌后，再用pH或pH计测试培养基的pH值。
(5)．将500mL培养基分装入若干只100mL大小的三角瓶中，每瓶约装 30mL培养基。分装培养基时，切勿将培养基倒在瓶口或瓶外壁上。堵养基分装完后，应随即用专用的耐高温高压的封口塑料薄膜或铝箔封好瓶口，并贴上标签，用记号笔注明培养基名称、配制者姓名和配制日期，待灭菌用。
2．培养基的灭菌
可用于培养基灭菌的器材有多种类型，本实验学习用手提式消毒灭菌锅进行灭菌。其操作步骤如下：
(1)．把分装好的培养基及其他需灭菌的各种用具(如用牛皮纸包扎好的剪刀、镊子、解剖刀、培养皿)和蒸馏水等，放入消毒灭菌锅的消毒桶内，将外层锅内加入适量的水，以水位与锅内三角搁架相平行为宜。注意加水量不可过少，以防灭菌锅烧干而引起炸裂事故。然后盖上锅盖，并将盖上的排气软管插入消毒桶壁的排气槽内后，上好螺丝，逐个拧紧后，接通电源加热。
(2)．当灭菌锅盖上的压力表指针移至0.05MPa时，打开放气阀门排除锅内冷空气，待压力表指针回复到零位后，关闭放气阀门继续加热。当灭菌锅的压力表指针移至0.1MPa(121.5℃)时，通过调节放气阀，控制热源，使压力表保持在该压力15-20min，即可达到灭菌目的。
(3)．灭菌所需时间到后，应先切断电源，让灭菌锅内温度自然下降；待灭菌锅压力表的压力降低至& 0& 时，才能打开排气阀，旋松螺栓，开启锅盖，取出已灭菌的培养基。
(4)．刚灭过菌的培养基应在室温下放置2-3d后，观察有无菌类生长，以确定培养基是否彻底灭菌。经检查没有杂菌生长污染，方可使用。
【注意事项】：
1．灭菌锅内冷空气必须排尽，否则，压力表指针虽达到了一定压力，但由于锅内冷空气的存在并达不到对应的温度，从而影响灭菌效果。
2．在灭菌过程中，当压力达到时，要严格控制时间，时间太长会使培养基中的一些化学物质遭到破坏，影响培养基的成分；而时间太短则达不到灭菌效果。
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培养基的灭菌原理及方法
所谓灭菌就是杀死一切微生物，包括微生物的营养体和芽孢，这一概念不同于消毒。后者是指消灭一切致病微生物(病原体)。在发酵生产中为什么要灭菌呢？主要有以下几点原因：如不灭菌，会使生物反应的基质或产物，因杂菌的消耗而损失，造成生产能力的下降；杂菌也会产生代谢产物，这就使产物的提取更加困难，造成得率降低，产品质量下降；有些杂菌会分解产物，使生产失败；杂菌大量繁殖后，会改变反应液的pH值，使反应异常；如果发生噬菌体污染，生产菌细胞将被裂解，使生产失败。一、培养基灭菌的原理和方法:灭菌的方法很多，在实验室可以使用干热灭菌、对于环境可以使用化学试剂灭菌，但化学试剂的灭菌方法有很大的限制。在工业生产中，对于培养基、管道、设备的灭菌，通常采用蒸汽加热到一定的温度，并保温一段时间的灭菌方法，称之为湿热灭菌。湿热灭菌的显著优点是：使用方便，无污染，而且其冷凝水可以直接冷凝在培养基中，也可以通过管道排出。灭菌的原理在这里先讲几个概念：①致死温度：杀死微生物的极限温度。②致死时间：在致死温度下，杀死全部微生物所需要的时间。③微生物的热阻：表示微生物对热的抵抗能力，即指微生物在某一特定条件下(主要是温度)的致死时间。其对热的抵抗能力越大，可以理解为热阻越大，衡量不同的微生物对热的抵抗能力的大小，可以使用相对热阻的概念。④相对热阻：某一微生物在某一特定条件下的致死时间与另一微生物在相同条件下的致死时间之比。例如：芽孢/大肠杆菌=；病毒/大肠杆菌=1&5/1等。
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酪蛋白培养基的灭菌条件是啥？求指教^_^
酪蛋白培养基的灭菌条件是啥？求指教^_^我还想知道酪蛋白培养基在灭两次菌之后会不会变性了？:hand::hand::hand:
两次会变形的
两次会变形的
两次会变形的
两次会变形的
两次会变形的 过滤灭菌，这种蛋白经不起高温灭菌的，用过滤投灭菌，估计抽的时候不好抽，因为络蛋白溶在水里较稠，当时我就是过滤灭菌的。过滤头好像是0.22微米的孔径 尽量减少这样的操作，会使培养基成分损失很大的， 培养基灭两次 营养成分大大减少！！:tuzi4: 加点溶菌酶呗 : Originally posted by 宋某 at
加点溶菌酶呗 加溶菌酶干啥呀？:rol::rol::rol: 121°,20min,为什么要灭两次呢？应该会损失点，而且酪蛋白不溶的，所以不能过滤，灭菌之后会溶解很多，但是还有些沉淀在里边 :hand::hand: 如果没有记错的话，应该是分开灭的，酪蛋白灭一次，培养基的其他成分灭一次，然后混合在一起！ 两次灭菌就算了吧。
不知道你那115度20分钟灭菌试过没有？ :hand:用酪蛋白水解物，是可溶的，过滤除菌后添加到灭菌培养基里 115摄氏度，灭菌30分钟，酪蛋白和其他成分要分开灭 就直接湿热灭菌就行的，115度30分钟，作分离驯化蛋白酶的菌吧~ : Originally posted by 2zongyou at
过滤灭菌，这种蛋白经不起高温灭菌的，用过滤投灭菌，估计抽的时候不好抽，因为络蛋白溶在水里较稠，当时我就是过滤灭菌的。过滤头好像是0.22微米的孔径 请问过滤灭菌前要先用水将酪蛋白溶解吗？我加水发现不能溶解啊，溶解0.5克加水量大约多少，需要加热吗？ : Originally posted by friend625 at
请问过滤灭菌前要先用水将酪蛋白溶解吗？我加水发现不能溶解啊，溶解0.5克加水量大约多少，需要加热吗？... 用热水，再把ph调到7.5左右，过了等电点应该就能溶了 : Originally posted by mengchunjiao at
就直接湿热灭菌就行的，115度30分钟，作分离驯化蛋白酶的菌吧~ 不会出现沉淀吗？ 同求啊！灭菌会不会出现沉淀，出现沉淀会不会影响使用和观察呢？
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培养基（料）的消毒灭菌有哪些方法收藏
食用菌培养基（料）的消毒灭菌是指对培养基（料）中的微生物进行杀灭，它是对食用菌纯培养的必要条件，一般采用、拌药消毒等方法。
　　。热力灭菌是利用高温使菌体蛋白变性，从而失去活性，达到灭菌的目的。热力灭菌常采用湿热灭菌的方法对培养基质进行灭菌，因为热蒸汽的穿透力强，蛋白质的凝固点随含水量的增加而降低。根据采用不同的仪器、温度、时间及压力指标分为、常压灭菌、常压间歇灭菌、发酵杀菌（）等方法。
　　①&&&即将灭菌物置于密封的高压锅内，利用加压高温蒸汽在较短的时问内达到彻底灭菌的方法。一般在1公斤／平方厘米的压力下，处理20～30分钟，温度约为121℃。对，如木屑、棉籽壳、谷粒、粪草等，必须在1.5公斤／平方厘米的压力下，处理1～2小时，温度约为128℃，才能达到满意的灭菌效果。使用高压锅的步骤为：加水至水位线→装锅→加盖→加热升温→压力至0.5公斤／平方厘米时，打开排气阀排除锅内冷空气，压力降至0，排气阀有大量热蒸汽冲出时，关闭排气阀→继续升温，压力升至规定指标，温度达到规定指标时，开始调火稳压规定时间→灭火→降压→开盖→取物。
　　②常压灭菌&&&常压灭菌将灭菌物置于常压灭菌锅内，以自然压力的蒸汽进行灭菌的方法。常压灭菌灶的建造方法根据各地习惯而异。常压灭菌的时间通常以见冒大气（100℃）开始计算，一般维持8～10小时。灭菌时注意不要将灭菌物排得过密，以保证灭菌锅内的蒸汽流通。开始要求以旺火猛攻，使灭菌灶内的温度尽快上升至100℃，中途不能停火，经常补充热水以防蒸干。此法的优点是建灶成本低、容量大，但灭菌时间长、能源消耗量大。
　　③常压间歇灭菌&&&在没有高压灭菌设备的条件下，或对一些不宜用100℃以上温度而又须杀灭其中的细菌芽孢的物质的灭菌，可采用此法。具体做法是：将培养基或其他灭菌物置于灭菌锅里，经100℃的热蒸汽30～120分钟，杀死细菌的营养体，然后将灭菌物取出，置于25～30℃条件下培养24小时，诱发其中残留的芽孢萌发成营养体，再放入灭菌锅内灭菌30分钟，以杀死新萌发的营养体。如此连续3次，即可杀死灭菌物的芽孢、。
　　④发酵杀菌&&&在中经常采用培养料堆制发酵的方法，由热所产生的高温，使培养料发酵腐熟的同时，杀死培养料中的营养体、害虫的幼虫及卵。
　　拌药消毒。在食用菌的生料栽培的过程中，对培养料进行拌料时，通常要加入0.1％多菌灵粉、或0.1％甲基托布津等杀菌剂，以杀死或抑制杂菌的生长。在堆制培养料时，常常加入1％～2％的生石灰，这不仅有消毒灭菌的作用，同时还可以调节培养料的pH值。来源:湖南科技报&
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新型杀菌剂，绿色，无污染：。
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