怎样的pcr产物的克隆技术电泳图较好，从条带多少...

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2011-10-13 15:34 标签： pcr产物的克隆技术
【原创】PCR产物图不清晰如何解决(电泳,琼脂糖凝胶,跑胶,产物条带) - PCR实验 - 生物秀
标题: 【原创】PCR产物图不清晰如何解决(电泳,琼脂糖凝胶,跑胶,产物条带)
摘要: [【原创】PCR产物图不清晰如何解决(电泳,琼脂糖凝胶,跑胶,产物条带)] 我跑胶的图见下面，左侧marker右边的产物是100bp，右侧marker右边的产物是239bp marker是TKARA DL2000的，共6条，分别是 100、250、500、750、 1000、 2000bp。琼脂糖凝胶是3%，电泳120V
300mA 30分钟。PCR中DNA加样量为1ug20ul反应体系目前存在的问题： 产物条带很模糊，如何提高亮度？希望懂得的大侠指点迷津。 关键词:[跑胶 琼脂糖凝胶 产物条带 电泳 反应体系 加样量]……
我跑胶的图见下面，左侧marker右边的产物是100bp，右侧marker右边的产物是239bp.marker是TKARA DL2000的，共6条，分别是 100、250、500、750、 1000、 2000bp。糖凝胶是3%，电泳120V
300mA 30分钟。PCR中DNA加样量为1ug20ul反应体系目前存在的问题： 产物条带很模糊，如何提高亮度？希望懂得的大侠指点迷津。
回复PS一下的了回复我在实验过程中也遇到了这个问题，我初步判定有以下几个方面的原因：1.反应体系加的不对2.退火温度还有待进一步优化3.染液不行等回复我上周刚跑过一个凝胶电泳看一个只有96 bp的PCR产物。我想你的问题可能是电泳时间不够长。我用2％的糖凝胶跑了75分钟。而你用了3％的凝胶，可能需要跑更长的时间。回复marker如果也不清晰，估计是你配胶的问题了。反之，则是PCR体系的问题，模板太少？回复感觉胶没有溶解好，再有就是背景好像很高。回复胶的质量不高回复我觉得你可以从以下几个方面入手：（1） 你的胶还有一些白点，可能是胶没有溶解好，3%的胶溶解的时间应该长一点。（2）PCR时的退火温度有待调整。希望能对你有所帮助。
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标题: 高手帮我看看，为何电泳跑出来这么多条带(条带,电泳跑,目的基因,电泳图)
摘要: [高手帮我看看，为何电泳跑出来这么多条带(条带,电泳跑,目的基因,电泳图)] 今天刚跑的电泳图，出现了很多乱七八糟的条带，但是目的基因（500bp左右）却没有出现，反而是300-400bp出现了几条很亮的条带？Marker是100bp、200bp、300bp、400bp（最亮的）、500bp、600bp。 关键词:[条带 电泳跑 电泳图 目的基因]……
今天刚跑的电泳图，出现了很多乱七八糟的条带，但是目的基因（500bp左右）却没有出现，反而是300-400bp出现了几条很亮的条带？Marker是100bp、200bp、300bp、400bp（最亮的）、500bp、600bp。
回复这一张是前几天同样的PCR产物跑出来的图，因为那天成像系统出了点问题，照片不清晰，所以才想今天再跑一次电泳，结果却出现了这么奇怪的结果。回复非特异条带多，有没污染，检验水或实验室环境。回复非特异条带多，有没污染，检验水或实验室环境。谢谢楼上的建议，我明天重新蒸水试试看。但是，实验室环境怎么改善呢？我以前提DNA和配置PCR反应体系都是在一个工作台上完成的，而且没有戴手套，是不是有影响呢？回复自己顶起来，到底是什么问题呢？没有人知道吗？回复确定是相同的PCR产物？可能降解了吧？你那张黑糊糊的照片上，勉强看出有带且位置正确回复呵呵，楼上的太强了，怎么把图弄得这么清楚？可能就是降解了，PCR产物放了4天。回复天啊。这是什么我怎么看不懂回复提DNA和配置PCR反应体系在一个工作台上问题不大，非特异性条带过多有可能是模板质量不高，或者是反应条件还要优化，建议做个梯度看看回复琼脂糖电泳仪， 琼脂糖电泳，凝胶电泳仪，凝胶电泳槽， 琼脂糖水平电泳槽，水平电泳槽，水平电泳槽配件，电泳仪电源，电泳仪，核酸电泳仪电源，数显电泳仪电源，稳压稳流电泳仪电源，垂直电泳槽，双垂直电泳槽，单垂直电泳槽，加宽双垂直电泳槽，小型双垂直电泳槽凯元电泳 科技成就之美回复谢谢楼上的建议，我明天重新蒸水试试看。但是，实验室环境怎么改善呢？我以前提和配置PCR反应体系都是在一个工作台上完成的，而且没有戴手套，是不是有影响呢？...LZ你强,我们规定做这种实验一定要带手套的,老师在的时候,还会带口罩回复呵呵，楼上的太强了，怎么把图弄得这么清楚？可能就是降解了，PCR产物放了4天。我感觉放了4天的PCR应该还好用的回复先提高退火温度，故意5度以上吧，多试几个，有可能就能解决，如果还是不行，就重新设计引物吧。回复跟你同样的问题，进来学习学习，收益匪浅啊！回复恩 ，降解的可能性很大！回复出现了类似问题，不过我觉得降解的可能性不大啊，我以前做的pcr放在四度一个月再测也问题不会太大的，而且一起做出来的pcr产物（其他引物）除了引物不同，其他条件都相同的，跑出的条带就非常好，估计还是引物的问题回复非特异条带这么多，最先考虑的是退火温度太低，因此首先建议一Tm值加减5°行个梯度PCR；其次，你的引物最好BLAST一下以检验引物本身的特异性；如果通过以上处理不行就考虑引物合成的质量问题，这时你可以把另外一OD溶解（一般引物合成都有2OD）或从新合成引物行梯度，对于以为模板的PCR对条件要求很低，我曾经测试过用自来水做都一样的好回复退火温度要调一下回复这一张是前几天同样的PCR产物跑出来的图，因为那天成像系统出了点问题，照片不清晰，所以才想今天再跑一次电泳，结果却出现了这么奇怪的结果。这个好像没有问题了么？回复个人认为是退火温度太低了，需提高退火温度。一般PCR产物在4℃放四天不会有什么影响的。
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电话：021-dna电泳条带 如何跑得更开
我用了天根的胶回收试剂盒,回收的DNA 量非常的少最多的一个才9ng/?l 左右,我加了 50ul 的洗脱液.这个到底是出了什么问题呢?我回收的是下面那 3 条跑开的条带,大小是500Bp 左右,下面小的Marker 都跑没了,不知道是为什么,以前都有的,胶是1.2%的浓度,电压120V,时间是25 分钟.建议用原模板进行PCR,如果担心PCR 量较少,可同时扩增几管（最后回收成1 管）,如果 PCR 产物较纯（无非特异性杂带）,则可以直接采用纯化,相对于胶回收,可以减少损失.如果PCR 产物可能存在突变,混在一起后会比较麻烦,你可以就一管回收下来,先连T 克隆,在进行后续载体的构建.PS:做T 克隆时,回收产物只要有就够了,不需要太多的回收产物,即使你回收后的产物电泳检测都看不到都没关系,T 克隆很容易的.关于胶回收问题,我不知道你的片段大概多少,用的什么公司的回收试剂盒.For SOE-PCR:1,never use the SOE-PCR product as the 2ndary PCR template,since it usually contains several different length products which will cause your final products as a smear.2,use about 1/10 conc.of middle primers to increase the PCR products:for example of your case:you should have 3 pairs of PCR primers to amplify the first group products (those three bands on the right side),let's name those primers as 1 to 6.1 and 2 for the 2nd band 3 and 4 for the 3rd band 5 and 6 for the 4th band in this case,odd number primers are forward primers,and even number primers are reverse primers.And let's say you want to PCR them together as the order of 5'-2nd band-3rd band-4th band-3'.When you perform SOE-PCR,in addition of your regular primer 1 and 6 as the pair,add 1/10 the conc.3 and 4 with it.3,Run 2% gel,which will increase the resolution of DNA band (
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延长电泳时间或者增加电压，还可以增加凝胶浓度。
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