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淀粉酶的检测
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　　胰淀粉酶由胰腺以活性状态排入消化道，是最重要的水解碳水化合物的酶，和唾液腺分泌的淀粉酶一样都属于&-淀粉酶，作用于&-1，4糖苷键，对分支上的&-1，6糖苷键无作用，故又称淀粉内切酶，其作用的最适pH为6.9，可通过肾小球滤过，是唯一能在正常时于尿中出现的血浆酶。 　　人体的其他组织如卵巢、输卵管、肺、睾丸、精液、乳腺等的提取物中都发现有淀粉酶活性；血液、尿液、乳液中也含淀粉酶。血液淀粉酶中主要来自胰腺、唾液腺，尿液中淀粉酶则来自于血液。 　　测定血清淀粉酶同工酶时，发现有两个主要的同工酶区带及数个次要区带。两个主要区带中的一个和胰腺的提纯物或分泌物电泳的位置相同，因此命名为P-同工酶；另一个和唾液腺提纯物或唾液电泳在同一位置，因此命名为S-同工酶。测定淀粉酶同工酶有助于对胰腺疾病的鉴别诊断。 　　参考值：限定性底物法： 　　血清淀粉酶 220U／L（37℃） 　　尿淀粉酶 1200U／L（37℃） 　　P同工酶 血清115U／L 　　尿800U／L 　　新生儿血清淀粉酶约为成年人的18%，主要为S-型，到5岁时达成人水平；在一岁内测不出血清P-型淀粉酶，以后缓慢上升，在10～15岁时达成人水平。 　　血清淀粉酶和尿淀粉酶测定是胰腺疾病最常用的实验医|学教育网搜集整理室诊断方法，当罹患胰腺疾病，或有胰腺外分泌功能障碍时都可引起其活性升高或降低，有助于胰腺疾病的诊断。尿淀粉酶水平波动较大，所以用血清淀粉酶检测为好，或两者同时测定。淀粉酶活性变化亦可见于某些非胰腺疾患，因此在必要时测定淀粉酶同工酶具有其鉴别诊断意义。 　　1.血清淀粉酶升高：最多见于急性胰腺炎，是急性胰腺炎的重要诊断指标之一，在发病后2～12h活性开始升高，12～72h达峰值，3～4天后恢复正常。淀粉酶活性升高的程度虽然并不一定和胰腺损伤程度相关，但其升高的程度越大，患急性胰腺炎的可能性也越大，因此虽然目前还都用淀粉酶作为急性胰腺炎诊断的首选指标，但其特异性和灵敏度都还不够高。当怀疑急性胰腺炎时，应对患者血清和尿淀粉酶活性连续作动态观察，还可结合临床情况及其他试验，如胰脂肪酶、胰蛋白酶等测定共同分析，作出诊断。 　　淀粉酶测定对监测急性胰腺炎的并发症如胰腺假性囊肿，胰腺脓肿亦有价值，此种时候血淀粉酶活性多持续升高。重症急性胰腺炎时可以引起胸腔积液或／和腹腔积液，积液中的淀粉酶活性甚至可高于血清淀粉酶活性100倍以上。 　　急性胰腺炎的诊断有一定的困难，因为其他急腹症也可以引起淀粉酶活性升高。所以当怀疑急胰腺炎时，除应连续监测淀粉酶外，还应结合临床情况及其他试验，如胰脂肪酶、胰蛋白酶等测定结果共同分析，作出诊断。 　　慢性胰腺炎淀粉酶活性可轻度升高或降低，但没有很大的诊断意义。胰腺癌早期淀粉酶活性可见升高。 　　淀粉酶活性中度或轻度升高还可见于一些医|学教育网搜集整理非胰腺疾病，如腮腺炎、急性腹部疾病（消化性溃疡穿孔、上腹部手术后、机械性肠梗阻、肠系膜血管病变、胆道梗阻及急性胆囊炎等）、服用镇痛剂、酒精中毒、肾功能不良及巨淀粉酶血症等情况，应加以注意。 　　血液中淀粉酶能被肾小球滤过，所以任何原因引起的血清淀粉酶升高时，都会使尿中淀粉酶排出量增加，尤以急性胰腺炎时为多见，急性胰腺炎时肾清除淀粉酶的能力加强，其升高可早于血淀粉酶，而下降晚于血淀粉酶。 　　2.淀粉酶同工酶：血清淀粉酶除来源于胰腺外，还来源于唾液腺及许多其他组织，所以在淀粉酶活性升高时，同工酶的测定有助于疾病的鉴别诊断。P-同工酶升高或降低时，说明可能有胰腺疾患；S-同工酶的变化可能是源于唾液腺或其他组织。当血清淀粉酶活性升高而又诊断不清时，应进一步测定同工酶以助鉴别诊断。有许多方法可以测定同工酶，琼酯糖和醋纤膜电泳法都是比较常用的方法。 　　淀粉酶的测定结果受方法的影响较大，不同方法参考值亦有所不同，临床所用方法也较多，因此必须了解所用测定方法和其参考值，才能作出正确的诊断。 　　作为胰腺疾病尤其是急性胰腺炎诊断的试验，淀粉酶测定应用已久，试验方法曾屡经改进，已经有过200多种方法。其试验基本原理都是把病人的标本（含淀粉酶）和作为底物的多糖一起进行反应后，测定反应后的剩余底物或产物来计算淀粉酶的医|学教育网搜集整理活性。很久以来一直以淀粉为底物，但由于淀粉来源物质不同，其分子结构、分子量变化都很大，因而会影响到淀粉酶的测定。多年的研究结果，认为从天然物质中提取的淀粉分子结构差异很大，不宜用做底物。现在已经改用限定性底物法，即选用结构明确，性质稳定的小分子低聚糖作为底物，能产生稳定的限定性产物，然后测定反应产物（发色团或葡萄糖）量来计算淀粉酶活性。 　　用做限定性底物的一般有4～7个葡萄糖（戊糖、庚糖等），并连有发色团如&2-氯-4-硝基酚-G7、ethylidene-G7PNP等。试验中所用的工具酶&-葡糖苷酶来源不同时，其水解淀粉酶作用后产物的程度也不同，也会影响的测定结果。 　　很多阴离子有激活淀粉酶的作用，其中以Cl-，Br-为最强。血清甘油三酯浓度高时，可以抑制淀粉酶活性，应将标本加以稀释，以降低其影响。由于Ca2+是淀粉酶分子组成的部分，所以除肝素外，一般抗凝剂如草酸盐，枸橼酸盐等因能与Ca2+结合，抑制淀粉酶活性而不宜应用。 　　另外应该注意淀粉酶的测定方法操作要简单，快速，适于急诊应用，因为急性胰腺炎需要尽快诊断和治疗。
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　|　　|　　|　植物淀粉酶的作用实验--《生物学通报》1985年07期
植物淀粉酶的作用实验
【摘要】：正 种子萌发时,淀粉酶的产生,可用碘色反应进行定性鉴定.具体步骤如下: (一)实验材料的准备 1.琼脂培养基 10克可溶性淀粉和10克琼脂加1升蒸馏水,搅拌加热熔化后,慢慢地倒入灭过菌的培养皿中,铺成厚2—3毫米的薄层.琼脂凝固后备用。 2.萌发种子取大麦、小麦、水稻之类的种子,先用清水冲洗干净,再在5—7％漂白粉溶液中浸泡约10分钟进行灭菌.用清水冲洗2—3次,再将种子排放在垫有吸足水的脱脂棉的培养皿中(如图).使之萌发,一日后即可使用。 3.碘溶液取碘1.2克和碘化钾2.5克于烧
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植物叶片淀粉分解机理研究进展
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植物生理学通讯 第44卷第2期，2008年4月
植物IjI一淀粉酶
齐继艳，陈舟舟，卢晗，张亮，沈文飚
南京农业大学生命科学学院，生命科学实验中心，南京210095
I~-AmylaseinPlants
QXJi-Yah，CHENZhou—Zhou，LUHan，ZHANGLiang，SHENWen—Biao
CollegeofLifeSciences，LaboratoryCenterofLifeSciences，M
，lgAgriculturalUniversity，M
，lg210095，China
提要：介绍了植物D一淀粉酶的蛋白质结构、热稳定性、突变体和遗传规律、生理功能、基因表达和调控的研究新进展
并对今后此领域的研究作了展望。
关键词：D一淀粉酶；热稳定性；遗传突变体；生理功能；基因表达
D一淀粉酶(D—amylase，EC3．2．1．2，仅一1，4一D—
D一淀粉酶的蛋白质结构包括一个典型的(B／0o一
glucanmalt0hvdrolase)广泛存在于植物和微生物
桶状核心和一个羧基末端的长环结构(图1)。活性
中，通过外切淀粉或寡葡聚糖等相关化合物 中的
中心的Glu186和Glu380位于(13／cc)一桶状核心的深
仅一1，4一葡聚糖的非还原性末端，直到第一个仅一1，6
部，此结构被认为是切割多聚糖非还原性末端的
分枝点，从而释放麦芽糖和 D一极限糊精(Sopanen
最佳结构(Mikami等 1993)。Glu186和Glu380分别
和Lauri~re1989)。早期研究认为谷物籽粒中的D一 承担酸和碱性催化作用，其 中Glul86充当酸碱催
淀粉酶可以通过参与淀粉的降解和转运为萌发提供
化反应中的质子供体，Glu380则在活化水分子中
能量，例如水稻(Oryzasativa)种子萌发过程 中的
起着重要作用(Kang等2004)。Mikami等(1994)研
D一淀粉酶活性是种子发芽势和活力的可靠指标 。
究还发现Glu186和Glu380对从淀粉中释放D．麦芽
此外，大麦(Hordeumvulgare)D一淀粉酶与麦芽糖
糖起着关键的催化作用，Glu380是接触反应部位
化力密切相关，因此也是衡量麦芽糖化力大小的
(Glul86)的配对物 。Totsuka和Fukazawa(1996)在
主要育种指标。近年来，有关植物D一淀粉酶的
研究引起了植物学界的广泛关注。本文对植物D一
淀粉酶的蛋 白质结构、热稳定性、突变体和遗传
规律、生理功能、基因表达的器官和发育特异性
以及调控等研究领域的相关结果进行了初步概述，
最后讨论了该研究领域存在的若干 问题 。
1蛋白质结构
绝大多数禾本科作物种子的D一淀粉酶属于单
体蛋 白，分子量范围为53～64kDa。大麦、黑
麦(Secalecereale)和水稻胚乳专一型D一淀粉酶的氨
图113·淀粉酶蛋白的三维结构示意
基酸序列中有一定相似性，例如氨基酸序列中都
根据http：／／www、brouw—bier、nlltheorielehemielenzymen．htm
含有高度保守的谷氨酸(Glu)残基。研究大麦D一淀
粉酶氨基酸全序YlJ(Kreis等 1987；Yoshigi等 1994)
发现其羧基末端有4个富含甘氨酸的重复区段，
而黑麦是 3个重复区段(Rorat等 1991)。另外，麦
国家 自然科学基金()和江苏省青年科技创新人
才项 目(BK2004417)。
芽糖和cc／D环糊精(cyclodextrin，CD)分别是p一淀
通讯作者fE—mail：wbshenh@njall、edu．ca：
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淀粉酶在使用过程中的影响因素
染整工程师|
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