常用的一些特殊染色方法 - 实验交流 - 生物秀
标题: 常用的一些特殊染色方法
摘要: [常用的一些特殊染色方法]常用的一些特殊染色方法一、六胺银染色1．第一步准备工作：配制六胺银染液，将10％硝酸银2．5ml倒入干净的染色缸内，加入2％硼砂5ml，液体呈乳白色，再加入3％乌洛托品40ml，染液逐渐呈透明状。2．第二步染色过程：事先把温箱调至60℃备用，切片经脱蜡至水，用1％过碘酸氧化10 min，水洗，然后切片放人六胺银染液放置60℃温箱1 …… [本文关键词:染色 切片 乙醇 染液 真菌]……
常用的一些特殊染色方法一、六胺银染色1．第一步准备工作：配制六胺银染液，将10％硝酸银2．5ml倒入干净的染色缸内，加入2％硼砂5ml，液体呈乳白色，再加入3％乌洛托品40ml，染液逐渐呈透明状。2．第二步染色过程：事先把温箱调至60℃备用，切片经脱蜡至水，用1％过碘酸氧化10 min，水洗，然后切片放人六胺银染液放置60℃温箱1 h，染真菌时间要相对短一些，一般情况下肉眼看到染液变色，切片呈棕色时从温箱取出染色缸，倒掉染液，自来水冲洗1min，用0．25％氯化金调色1 min，水洗后，用3％硫代硫酸钠染5min,水洗，用苏木精染液浅染，水洗、分化、冲水返蓝，伊红染10 s，最后经脱水、透明、封固。3．图示结果：基底膜与毛细血管间质性物质、真菌呈棕黑色，核呈蓝色。4．注葸事项(1)掌握染色温度和时间，如60℃染1 h，80℃染30～40 min。(2)真菌类染色时间相对要短，染色时间过长，切片染色过深，可用分色剂处理。二、黏液卡红染色1．第一步准备工作：配制黏卡染液，将称好的胭脂1 g、氢氧化铝1 g倒入瓶内，加入50％L醇100 rnl混合摇匀，再加入氯化铝0．5g，水浴加温逐渐煮沸并搅动液体，使其充分溶解(注意染液容易外溅)，数分钟后，染液由红色变成透明深紫红色，冷却后 将液体倒入量筒，再加入50％乙醇至原量，过滤，放人冰箱备用。2．第二步染色方法：染液使用时原液与蒸馏水比例为1：4稀释.切片厚5 um，脱蜡至水，经苏木精染色2 min、水洗、分化、返蓝后进人黏卡液染色2 h以上，染液可以重复使用多次，但要适当延长染色时间．切片水洗后，脱水、透明、封固。3．图示结果：黏液为红色，胞核为蓝色．4．注意事项(1)染液使用时比例为1份黏卡原液，4份蒸馏水。(2)用酶消化对照染色特异性很大，消化时间为20 min。(3)配制黏卡染液时要防止液体溅出。三、石碳酸品红染色1．第一步准备工作(1)配制盐基性品红饱和液：盐基性品红溶于乙醇内。(2)配制石碳酸水溶液：将石碳酸结晶放入热水浴溶解后取5 ml与事先预热的蒸馏水95ml匀备用．(以上二种液体可单独保存)。(3)石碳酸品红染液：取盐基性品红溶液10 ml与5％石碳酸水溶液90 ml混合，使用前过滤。2．第二步染色方法切片厚度为6 um，脱蜡至水，石碳酸品红染色30 min至1 h，(或用微波炉高档加热10~20 s)，水洗，用1％盐酸乙醇分化洗掉切片上多余染液，水洗，0.1％美蓝浅染，背景为淡蓝色、冲水、晾干、封固。3．图示结果：抗酸杆菌呈亮红色，背景呈淡蓝色。4．注意事项(1)用微波染色时切片容易脱落．(2)美蓝染色宜浅。四、奥辛蓝一PAS染色1．第一步准备工作(1)配制奥辛蓝染液；将奥辛蓝1 g溶解于3％的醋酸溶液，调整液体PH值为2.5。(2)配制PAS染液：将碱性品红1 g加人煮沸的蒸馏水内溶解，温度降至50℃时加入亚硫酰氯1 ml(加亚硫酰氯时要在通风厨内进行)放入冰箱过夜。加入活性碳2 g，摇动混合液1 min，静止10 min后，过滤于棕色瓶内，放置冰箱保存。2．第二步染色方法(1)奥辛蓝染色：切片脱蜡至水经3％醋酸溶液l10min，切片直接进入1％的奥辛蓝染色10 min，水洗，必要时用1％的中性红对比染色，水洗。(2)PAS染色切片厚5um，脱蜡至水，用0.5％过碘酸氧化10min后流水冲洗1 min，用纸吸干切片周围水分，用干燥的吸管吸取PAS染液，滴染10~20 min，流水冲洗1 min，用苏木精浅染1 min，水洗、分化、返蓝、然后进行脱水、透明、封固。3．图示结果：PAS阳性物质呈玫瑰红色，胞核呈蓝色。4．注意事项 (1)加亚硫酰氯时要在通风厨内进行。 (2)过碘酸恢复室温才能使用(20℃以内)。 (3)染色时要加对照片。 (4)氧化时间要限制在10 min内。 (5)PAS染液易挥发使染色反应迟缓或红色太浅，加入数滴亚硫酰氯即可。 (6)如果染奥辛蓝-PAS时，省略染苏木精步骤。
相关热词：
生物秀是目前国内最具影响力的生物医药门户网站之一，致力于IT技术和BT的跨界融合以及生物医药领域前沿技术和成功商业模式的传播。为生物医药领域研究人员和企业提供最具价值的行业资讯、专业技术、学术交流平台、会议会展、电子商务和求职招聘等一站式服务。
官方微信号：shengwuxiu
电话：021-免疫组化在血液肿瘤病理诊断中的应用及意义
近年来，血液系统肿瘤发病率呈逐年上升趋势。急性白血病、恶性淋巴瘤是血液系统最常见的恶性肿瘤。临床上白血病、淋巴瘤类型较多，不同类型在选择治疗方案、疗效及预后方面都不完全相同。因此，早期诊断，正确分型是关键。目前在血液病诊断中，形态学、组织化学、遗传学、分子生物学、流式细胞术等检测手段越来越广泛应用，但免疫组织化学(IHC)以其方法简单、特异性强、设备要求低、形态学与免疫学结合等优势，得到各级医院尤其是基层医院的广泛认可，成为其它方法不可完全取代的、血液系统肿瘤病理诊断、鉴别诊断与分型的常规检测手段。一、血液系统肿瘤IHC检测中应注意的问题IHC方法相对简单，但从取材到发报告之间环节较多，任何环节的疏忽都可能造成检测结果偏差，甚至导致漏诊、误诊。除IHC染色常规注意事项外，血液肿瘤标本的检测还有其特殊性。1.标本的前期处理血液系统疾病病理诊断标本，主要是淋巴结、脾脏和骨髓组织。与其它组织相似，造血细胞表面抗原不同其稳定性会有差异，从而对固定剂的耐受性不同。组织固定的原则，是采用10%中性福尔马林作为固定剂，固定时间最好不超过24小时。(1)淋巴结：取材后迅速固定，待组织表面变硬即可修块。以淋巴结大小为直径，厚度不超过3mm，以使组织得到充分的固定。如淋巴结中有淤血、坏死成分，应尽量除去。组织制片中的每个步骤都应严格掌握，以免破坏组织的抗原活性。 (2)脾脏：脾脏组织较大，应注意多点取材；脾脏又是贮血器官，含血量多，取材时应尽量除去积血；取材大小以2×2×7.5px 为宜，取材后尽快固定。在多块标本中，病理医师应根据HE切片，挑出病变明显的 1～2 块作 IHC 染色。(3)骨髓组织：特点为组织小，主要为骨质，造血细胞充斥于骨小梁之间。在组织制片的每个步骤都应相应缩短时间。骨髓组织制片需要脱钙，酸性脱钙液对抗原活性有影响，常规采用的2%硝酸，脱钙不应超过3小时。EDTA脱钙液偏碱性，比较温和，效果较好，只是时间长，约需24～48小时。(4)骨髓涂片：某些情况下当骨髓组织取材不好，如太小或组织为骨皮质、血凝块等不能进行石蜡包埋制片时，可用骨髓涂片代替。但注意骨髓涂片不能太厚，最好不混血。涂片稍干后用甲醇：丙酮(1：1)固定90秒后染色。涂片不能在室温下久存。(5)外周血涂片：某些特殊情况不能采用穿刺骨髓取材时，可用外周血涂片代替。前提是外周血有核细胞总数必须较多，结果才相对可靠，固定同骨髓涂片。(6)组织印片：当疾病诊断和分型必需的标记物不能用于石蜡切片时，可用组织印片来补救。将新鲜软组织取材后，按取材大小平放于干净的载玻片上，轻压，然后垂直取下标本，组织表面的细胞即印在玻片上，风干，固定同骨髓涂片。组织印片与冰冻切片相似，由于形态不好，除特殊情况外，临床上尽量不用。2.IHC所采用的检测系统IHC染色方法很多，如免疫荧光、免疫酶标、免疫金标。免疫酶标是以酶标记的抗体与组织或细胞作用后，加入酶的底物生成有色产物，通过光镜对细胞表面或细胞内抗原进行定位。免疫酶标以其标记酶不同又分为标记过氧化物酶(HRP)法，如ABC、SP及相应二步法；标记碱性磷酸酶(AP)法，如SAP及相应的二步法。葡萄糖氧化酶(GOD)分子量较大，具有较多的氨基酸，在标记时易形成广泛的聚合，影响酶活性，现已较少使用。目前最常用的是SP、SAP及二步法。脾脏、淋巴结切片IHC染色可采用SP及相应的二步法，DAB显色。此法敏感性高，阳性定位准，保存时间长。而骨髓中的红细胞、粒细胞、单核组织细胞含有丰富的内源性HRP、H2O2处理效果不理想，可造成非特异着色而影响结果的分析。故在做骨髓切片、骨髓涂片、外周血涂片染色时，我们常选择AP标记的SAP及相应的二步法，核固红或BcLP/NBT显色。此系统敏感性尚好，但定位不及SP法，保存时间较短。3.抗体的选择抗体的正确选择是IHC染色的关键。血液系统肿瘤免疫分型主要用CD系列的白血病分化抗原。考虑到患者对检测费用的承受能力，在病理诊断中，主要采用认真而全面的HE形态学观察提出初步诊断与鉴别诊断意见，再据此选择适应的抗体。这就需要病理医师准确掌握各种抗体的作用，适应范围和可能发生的交叉反应。选择抗体的原则是：(1)当造血系统肿瘤(主要是淋巴瘤)与其它非造血系统未分化小细胞肿瘤难以区分时，首先选用LCA、NSE、CK等抗体组合，以确定肿瘤的组织来源。(2)病理诊断需作IHC来辅助诊断与鉴别诊断时，要根据组织形态学，考虑首选的抗体与鉴别诊断的抗体，首选抗体中至少应用两个以上的抗体联合检测。鉴别诊断的抗体应选敏感性强及广谱的抗体。(3)抗体的敏感性、特异性有很大差别，在选择抗体时，要兼顾到这两个方面。如T细胞淋巴瘤，选择敏感性好的CD45R0与特异性强的CD3组合。同时，由于现有检测抗体并非白血病细胞特异性试剂，而是针对不同人血细胞分化抗原的单抗，因此进行分型时，需要配套抗体联合使用、综合分析、统一判断。4.检测结果的分析IHC 染色理想的结果是：阳性反应部位明确、色泽鲜艳、背景清晰、对比度好。但由于诸如石蜡制片质量、不同组织内源性因素、不同厂家、不同批号抗体质量的差异、抗原修复方式等因素的影响，染色结果并不一定理想。所以病理医师在分析结果时，首先要分清阳性细胞是反应性细胞，残留细胞还是肿瘤性细胞，在确定阳性肿瘤细胞后，一般根据以下几方面综合分析，得出正确的诊断。(1)阳性定位：阳性细胞的定位是IHC诊断的重要依据。不同抗原阳性表达可分别定位于细胞膜、细胞质、细胞核或膜/质、核/质等不同部位，不在特定部位表达应视为阴性。(2)阳性强度和阳性率：依据欧洲EGIL免疫分型建议，如果正常细胞成分在骨髓和外周血中只占极少部分时，具有某些分化相关抗原的髓系细胞＞20% 、淋系细胞＞30% 则考虑白血病细胞。但也不能仅依靠阳性率的高低作为分型的唯一依据。某一种标记只要是瘤细胞，即使数量不多亦可作为分型依据。阳性强度取决于细胞中抗原含量的多少，也与肿瘤细胞分化的不一致性有关，致使阳性表达有强弱之分。 (3)阳性细胞的分布：骨髓及外周血涂片、骨髓组织切片，在多数情况下，阳性标记瘤细胞呈弥漫性或散在性均匀分布，偶见小灶性分布，如转移癌、淋巴瘤累及骨髓的部分类型。故阳性结果常以计数阳性率来表示。如阳性标记细胞有形态上的异常再加以注明。而脾脏、淋巴结细胞密度大，正常情况下T、B淋巴细胞有一定的分布区域，一般B淋巴细胞占整个淋巴细胞群体的25～50%，T淋巴细胞约占50～75%。不同类型淋巴瘤细胞分布也不同，所以计数百分率不完全准确。 确定单克隆性增生：大多数情况下，T或B阳性瘤细胞占绝对优势，在正常应该分布较少的区域也广泛增生；有时T、B两系均有不同程度表达，可能是由于交叉反应或双标记所致，应选择更特异的抗体检测；个别情况下T、B标记均不满意，则以HE瘤细胞形态特点来确定类型。阳性细胞数量只是诸多判定因素之一，阳性瘤细胞的分布和形态是淋巴瘤分型的重要依据，如滤泡性淋巴瘤生发中心BcL-2阳性；弥漫大B细胞淋巴瘤肿瘤性大细胞CD20阳性及生发中心BcL-6阳性；霍奇金淋巴瘤H/RS细胞CD30阳性均具有诊断意义。(4)如何区别特异性与非特异性反应：IHC染色结果有时并不理想。如何区别特异性与非特异性结果，得出科学的结论呢？一般来说，特异性反应产物常分布于特定部位，多定位于单个细胞的细胞膜、细胞质或细胞核，且与阴性细胞相互交杂分布，由于细胞内含抗原量不同，表现在同一切片上出现不同强度的阳性染色结果。非特异性反应常表现为：无一定的分布规律，阳性不限于单个细胞，而在某一部位成片均匀着色；细胞和周围结缔组织无区别；组织边缘及皱折处呈现很强的染色。二、IHC在肿瘤组织细胞来源鉴别中的应用肿瘤组织来源的鉴别仅适用于靠形态学不能确定来源的异常细胞。最常见为恶性未分化小细胞肿瘤的鉴别。波形蛋白Vimentin在很多肿瘤中都可表达，特异性较差，必要时加做肌源性标记物如myosin、Desmin等。值得注意的是：并不是所有血液系统肿瘤LCA均为阳性。树突状细胞肉瘤、淋巴母细胞淋巴瘤常不表达；少数间变性大细胞淋巴瘤、 NK/T 细胞淋巴瘤 LCA 也可阴性；霍奇金淋巴瘤亦不表达。故不能因为 LCA 阴性而完全排除淋巴瘤的可能。在排除了其它组织来源的基础上，可考虑增加其它抗体检测。三、IHC在血液系统良恶性疾病鉴别中的应用组织形态学诊断中最易误诊的血液系统良恶性疾病主要是淋巴组织反应性增生与恶性淋巴瘤，误诊率可高达10～30%；如淋巴滤泡反应性增生与滤泡性淋巴瘤。利用特异性单抗IHC染色，往往能达到较理想的鉴别效果。　　B淋巴细胞在分化的大多数阶段存在细胞表面免疫球蛋白(SIg)，每个B细胞可表达一种以上Ig重链，但只表达一种Ig轻链，K或λ。正常B细胞群体分泌的Ig轻链K和λ比例为2:1。淋巴组织反应性增生为良性多克隆性增生，B淋巴细胞同时表达K和λ。当淋巴组织发生肿瘤性增生时，起自单个克隆的 B淋巴细胞则单一性表达K或λ，两者比例可达1：10以上。因此，Ig不仅能证实B细胞来源，而且限制性轻链表达又是鉴别B细胞肿瘤的重要依据之一。　　但实践中Kappa、Lambda这两种标记物并不理想，正常浆细胞可阳性，B细胞肿瘤有时阳性检出率较低。因此，该标记物阴性者不能完全排除B细胞恶性淋巴瘤，应结合其它B细胞标记。还有30～40%的弥漫性大 B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤不表达Ig轻链。当缺乏Ig轻链而全B标记阳性时，常考虑肿瘤的可能。诊断确有困难时，辅以Ig重链(IgH)基因重排检测，可以有助于诊断。T-淋巴瘤缺乏克隆性标记抗体，可选用全T细胞标记物来鉴别。T淋巴细胞绝大部分表达CD2、CD3、CD5、CD7，同时CD4与CD8之比约1～5：1，极少有CD4-/CD8-或CD4+/CD8+的情况。当增生的T细胞CD4/CD8比例增大或缩小，或出现双阴性，双阳性，或丢失一个或多个全T细胞抗原时，应高度怀疑T细胞淋巴瘤。必要时，TCR受体基因重排有助于诊断。30～40%的滤泡性淋巴瘤(FL)不表达Ig轻链，与淋巴滤泡反应性增生的鉴别，主要靠BcL-2来实现。正常淋巴组织中。套区小B细胞，T区大部分细胞表达BcL-2而滤泡中心细胞不表达。FL时，肿瘤性淋巴滤泡生发中心细胞则BcL-2阳性。CD10强阳性表达也有助于两者的鉴别。诊断仍有困难时，BcL-2/JH融合基因重排阳性有助于FL的诊断。四、IHC在髓系肿瘤病理诊断中的应用髓系白血病的免疫分型，是基于正常血细胞从多能干细胞分化、发育、成熟为功能细胞的过程中，细胞中抗原的出现、表达增多与减少甚至消失与血细胞的分化发育阶段密切相关。这些抗原的表达与否可作为鉴别和分类血细胞的基础。白血病细胞仍能表达正常血细胞所具有的抗原，因而仍可依据其抗原的表达谱对白血病进行分型。1.急性髓系白血病是髓系恶性肿瘤的主要类型。目前，商品化的髓系抗体针对髓细胞分化的阶段性不十分明显，加上一些抗体不能用于石蜡切片或效果不好，使髓系白血病免疫分型在病理学领域的应用受到一定限制，BM石蜡包埋组织 IHC染色对鉴别AML各亚型虽有一定帮助，但目前还不能用抗体鉴别AMLMO～M5各亚型，须结合其它检查综合分析，才能作出正确的诊断。详见流式细胞术在血液肿瘤诊断中的应用相关章节。2.组织细胞肿瘤组织细胞肿瘤是软组织中由起源于骨髓原始单核细胞转化的巨噬细胞异常增生所形成的肿瘤，临床上常见的几种类型有：① 性组织细胞增生症(恶组)： 恶组是全身性单核一巨噬细胞的恶性增生性疾病，表达CD68、Lysozyme等组织细胞标记物。随着对本病细胞起源的认识，目前认为：恶组实际上一部分是T细胞淋巴瘤，一部分是同时表达T细胞抗原的间变性大细胞淋巴瘤，真正起源于单核巨噬细胞系统是极少的，所以，此种疾病基本上已归入T细胞淋巴瘤的范畴。 ②组织细胞肉瘤：瘤细胞强表达组织细胞抗原 CD68、Lysozyme，同时还表达CD11C、CD14、CD45，而MPO、CD33常阴性。B细胞标记和CD3也常阴性，但CD4可表达。③朗格汉斯细胞组织细胞增生症 /朗格汉斯细胞肉瘤：CD1a是Langerhan's细胞特异性标记物，因此，强表达CD1a和S－100，CD10也阳性，同时还可出现CD4及许多细胞粘附抗原的强表达，60%病例还表达Ki-67。而CD45、CD68、Lysozyme则弱表达或不表达。④滤泡树突状细胞肉瘤：瘤细胞强表达CD21、CD23、CD35，偶见表达S-100、CD68、CD45，淋巴细胞标记及CD1a、Lysozyme、CK均阴性。组织细胞肿瘤临床病例不多，免疫表型特征还有待于进一步积累病例加以总结。五、IHC在淋系肿瘤诊断中的应用淋巴系统恶性肿瘤主要是急性淋巴细胞白血病和恶性淋巴瘤，都是淋巴细胞在某一分化阶段异常克隆性增生的结果。与髓系相比，淋巴细胞分化发育的阶段性较强，研究也深入一些，作为病理诊断的辅助手段，IHC在淋系肿瘤的诊断、鉴别诊断与分型中已成为常规检测项目。急性淋巴细胞白血病(ALL)ALL 由骨髓中未分化或低分化淋巴细胞无限增生所致。淋巴细胞在分化发育过程中可形成许多分化抗原，应用这些抗原的特异性抗体区分免疫表型不同的细胞系，同时区分同一细胞系不同亚群和不同分化阶段的细胞群。1.T-ALL：T-淋巴细胞分化阶段及抗原表达。CD7、CD5、CD2为全T细胞抗原，基本表达于T细胞分化的各阶段。CD7与髓系有10%交叉，尤其在AML M5中常有表达；而在部分外周T细胞淋巴瘤中又丢失。CD5除表达 T 细胞外，在成熟B淋巴细胞中也有表达，如CLL/SLL。CD45R0可识别大多数胸腺细胞和激活的T细胞，少数静止T细胞，在石蜡片上也很敏感，其不足是不具有细胞谱系特异性，与髓系B淋巴细胞交叉可达40%。CD3是一种有较高敏感性和特异性的T-细胞标记抗体，与 B细胞交叉少于5%，膜型CD3主要表达于成熟T细胞。我们常以CD45Ro和CD3作为检测T细胞来源肿瘤较好的抗体组合。但有作者也提出，部分T细胞疾病无论NK细胞相关标志阳性与否，CD3均阴性，推荐以CD2代替CD3。CD4、CD8在皮质胸腺细胞期为同一细胞共表达，到成熟T淋巴细胞，CD4、CD8在不同的细胞上独立表达，两者表达率与比例的差异，常可反应细胞的成熟情况，如CD4+/CD8+伴CD3+，表示成熟T细胞；CD4+/CD8-或CD4-/CD8+，伴 CD1+，示较幼稚T细胞；CD4-/CD8-伴CD38+，示幼稚T细胞。T-ALL的亚型一般按胸腺细胞的分化程度分为Ⅲ型，但这种分型目前对指导临床治疗方案的选择，评价疗效和预后意义不是很大，临床上常不须进一步细分。2.B-ALL：目前，B淋巴细胞分化及相应免疫标记较 T 细胞研究深入。B-淋巴细胞分化阶段及抗原表达：与T细胞分化相同，在淋巴干细胞阶段，只表达TDT，CD34等非系抗原；到B系祖细胞，出现CD19、CD79a及胞浆CD10表达；随着B细胞分化发育到逐渐成熟，TDT消失，相继出现CD10、CD22、CD45RA、CD20表达，同时出现膜免疫球蛋白；淋巴细胞发育到终末浆细胞，除表达浆细胞标记抗体外，还表达胞浆免疫球蛋白。CD19、CD45RA、CD79a。几乎在B细胞发育的全过程都有表达，但CD19有时在幼粒单白血病中出现，应用在石蜡片上效果也不好；CD45RA的敏感性及特异性均较好，只与T辅助细胞有少量交叉，我们常将CD45RA与CD20搭配使用，作为B细胞标记的抗体组合。近年有报导称CD79a能在B-细胞发育全过程，包括浆细胞中表达，且与髓系及T细胞无交叉。我们在临床石蜡切片应用中体会，用于B细胞标记CD79a特异性高，但敏感性仍较CD45RA、CD20低；用于浆细胞标记，表达率不是太高，敏感性也低一些，其结果可能与我们选择的抗原修复方式和修复液种类有关，有待进一步摸索，找出CD79a在石蜡片上应用的最佳条件。某些抗原表达与否，与预后也有一定关系。有资料表明，CD10阳性表达，无论儿童或成人，预后较好。婴儿ALL常无CD10表达，生成率极低；增殖细胞核抗原PCNA、KI-67等，虽对分型无助，但其阳性表达，即阳性指数高、预后也差。目前可用于石蜡片B-细胞标记的产品还有“B细胞特异性转录因子“(PAX-5)，反应谱与 CD19 类似；oct-2，反应谱与CD79a相似，浆细胞可表达，由于应用不多，没有积累足够的病例资料。恶性淋巴瘤恶性淋巴瘤是一组来源于淋巴组织的恶性肿瘤，IHC的应用对其鉴别诊断和分型有独到之处。恶性淋巴瘤一般会出现异常的免疫表型，如出现Ig限制性轻链；正常情况不表达或只表达少数的T、B细胞标记的异常表达；不成熟细胞的表达或部分抗原的丢失等等。现就临床上常见的恶性淋巴瘤免疫表型特征作一简略介绍。1.B细胞恶性淋巴瘤： (1)前B淋巴母细胞淋巴瘤(B-LBL)：瘤细胞表达TdT、HLA-DR，CD79a，几乎全部病例表达CD19、大多数病例表达CD10，还不同程度表达cCD22。LCA、CD20常阴性。(2)B前淋巴细胞淋巴瘤(B-PLL)：强表达B细胞相关抗原，1/3病例可异常表达CD5，SIg阳性。不表达CD23可与CLL/SLL鉴别。(3)慢性淋巴细胞白血病/小细胞淋巴瘤(CLL/SLL)：同时表达CD5、CD23、CD43及B细胞相关抗原，但CD20表达可能很弱。不表达CD10、CyclinD1。CD5异常表达为其持征，但CD5对组织处理，尤其是组织固定要求较高，要注意假阴性。(4)套细胞淋巴瘤(MCL)：同时表达CyclinD1、CD5和B细胞相关抗原，但CyclinD1敏感性较差，组织固定和抗原修复方式是染色的关键。近年推出的兔源性单抗效果好些。KI-67的高表达与不良预后有关。此型不表达CD10、CD23，可与CLL/SLL、FL鉴别。(5)滤泡性淋巴瘤(FL)：淋巴滤泡生发中心BCL-2100%阳性表达，肿瘤性滤泡强表达CD10。PCNA的高表达虽对分型无特异性，但可提示预后差。FL不表达CD43，可与Burkitt淋巴瘤区别。目前认为BCL-6是生发中心B细胞特异性标志。但也有研究认为，FL中BCL-6无过度表达，FL发生恶性转化可能与P53突变有关，与BCL-6无明显的相关性。(6)边缘区淋巴瘤(包括MZL、SMZL、MALT)：无特异性抗原表达，在B细胞相关抗原表达的同时可表达边缘区细胞相关抗原CD21、CD35。CD20广泛强阳性是其特征，SIg阳性，一般不表达CD43。(7)淋巴浆细胞淋巴瘤(LPL)：特征为表达B细胞抗原的同时表达CD138、kappa+/Lambda-或kappa-/Lambda+，即B细胞抗原与浆细胞抗原同时存在，可与多发性骨髓瘤等浆细胞疾病区别。CIg阳性。(8)毛细胞白血病(HCL)：表达B细胞抗原，同时强表达CD103、CD25、CD11C，一般不表达CD43。有报导称，CycLinD1 CyclinD1在毛白病例中约50～70%阳性，因此种病例少，我们还无资料证实。(9)多发性骨髓瘤(MM)：CD138是目前浆细胞疾病较好的标记物，约50～100%MM病例表达CD138。但CD138在血管内皮细胞，上皮细胞也可部分表达，阳性判定时须注意鉴别。MM还表达其它浆细胞标记物，如kappa或Lambda，CD38，约50%病例表达CD79a，CIg阳性。特征为不表达B细胞相关抗原和CD45。(10)弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)：无特征性免疫标志和遗传特征。肿瘤性大细胞多表达B细胞相关抗原，但可能丢失部分全B标记，大部分病例还表达CD10、KI-67。当间变性大细胞变型时也可表达CD30，但不表达CD15、ALK、EMA可与HL、ALCL区别。有报导称，BCL-6在DLBCL中阳性率可达95%，提示DLBCL中BCL-6过表达。(11)Burkitt淋巴瘤：全B细胞标记阳性，100%表达KI-67，部分表达CD10，CD43阳性而不表达CD5、BCL-2。由于存在吞噬核碎片的巨噬细胞，CD68阳性细胞可呈星空样分布。2.T细胞和NK细胞淋巴瘤(1)前体T淋巴母细胞淋巴瘤(T-LBL)：此型淋巴瘤TDT，CD7，cCD3表达最具特征。同时还可表达CD38，CD2，CD5，CD10；LCA，CD3常阴性。髓系相关抗原CD13和/或CD33在此型中常有表达。(2)T前淋巴细胞淋巴瘤(T-PLL)：表达T细胞相关抗原，约60%病例CD4+/CD8-，而CD4+/CD8+或CD4-/CD8+较少，不表达TDT，CD10可与T-LBL区别。(3)成人T细胞白血病/淋巴瘤(ATLL)：表达T细胞相关抗原，绝大部分病例呈CD4+/CD8-，通常不表达CD7，特征为几乎全部病例CD25阳性，粒酶B，TIA-1阴性。(4)NK-T细胞淋巴瘤：瘤细胞表达CD56、CD3，多数病例表达粒酶B、穿孔系，约90%以上病例表达细胞毒性颗粒相关蛋白TIA-1。一般不表达CD4/CD8、CD25、CD57，B细胞和组织细胞分化抗原阴性。(5)血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤(AILT)：CD45R0、CD3阳性，通常CD4阳性细胞多于CD8+，滤泡树突状细胞标记物CD21阳性，常可异常表达CD5、CD7。(6)外周T细胞淋巴瘤(PTL)：T细胞相关抗原阳性，但常有部分丢失，尤以CD7、CD5多见，以大细胞为主者，可见CD30+/-，但ALK、EMA阴性可与ALCL区别。(7)间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)：特征性肿瘤大细胞表达CD30，多数表达EMA，约10-20%表达CD15，须注意与HL区别。60-80%表达ALK，据报导此标记物阳性表达者5年生成率可达80%，儿童常ALK、EMA共表达，成人多为ALK+/EMA-或ALK－/EMA+。ALCL在多数情况下仅表达少数T细胞相关抗原，通常CD45R0，CD2、CD4阳性，而CD3、CD5、CD7常不表达。3.经典型霍奇金淋巴瘤(CHL)95%的HL为此型，以出现少量H/RS细胞和大量炎症背景细胞为特征。WHO按临床特点将CHL分为四个亚型，但四个亚型肿瘤细胞的免疫表型特征是一致的。肿瘤细胞表达CD30，约75-80%病例表达CD15，不表达EMA，ALK可与ALCL区别。多数病例无T、B免疫表型，约20-40%病例H/RS细胞CD20+，须与DLBCL区别。CHL的背景非肿瘤细胞大部分为T细胞，少数为B细胞。CHL常不表达LCA。最近上市的FASCIN对霍奇金细胞有特异性，可用于HL的鉴别诊断。有报导称，70%的CHL还表达CyclinD1，但我们在临床检测中还未注意到。　　4.结节性淋巴细胞为主型霍奇金淋巴瘤(NLPHL)本型仅占HL的5%，免疫表型与B-NHL相似。肿瘤细胞多呈CD45、CD20、BCL-6阳性而CD30表达不稳定。常不表达CD15，极易与DLBCL混淆。但此型大多数病例表达CD75，约50%表达EMA，较为特征的是，背景中CD21阳性的滤泡树突状细胞呈网络状结节。六、IHC应用须遵循的原则IHC在血液肿瘤病理诊断中的应用，不仅有助于良恶性疾病的诊断，也是白血病、淋巴瘤细胞来源与分型的重要依据。但其检测结果和判定受石蜡制片质量、抗原修复技术、抗体本身质量及病理医师的经验等多方面因素影响，如果仅以IHC染色结果作为诊断的唯一依据，将不可避免地造成误诊、漏诊。因此，必须强调的是：1.IHC染色应选择敏感的检测系统，质量稳定可靠的标记抗体，操作过程尽量规范化，标准化，减少人为误差，保持检测结果的稳定性，可重复性。2.血液肿瘤类型繁多，IHC必须在病理医师经过形态学观察，提出初步诊断意见及鉴别诊断思路的基础上进行，有的放矢地选择抗体，以免误导诊断。3.恶性肿瘤抗原表达常呈现紊乱现象，当染色结果与组织形态学观察有矛盾无法解释时，应遵循形态学诊断为主的原则，结合细胞化学、染色体等检测结果分析，必要时辅以分子生物学检测方法帮助确诊。来源：飞华健康网医生组　
& 上一篇：
& 下一篇：
Copyright & 2016 , All rights reserved.杨邱老师网校 , 专注免费的网站！